目的:臨床研究驗(yàn)證涼血潛陽(yáng)法治療尋常型銀屑病“血熱證”臨床療效、安全性及對(duì)Wnt信號(hào)通路的影響。基礎(chǔ)研究從DNA甲基化修飾WIF-1調(diào)控Wnt信號(hào)通路角度,研究表觀遺傳修飾Wnt通路在尋常型銀屑病“血熱證”中的作用,并進(jìn)一步闡釋涼血潛陽(yáng)法作用機(jī)制。方法:第一部分采用隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)設(shè)計(jì),將80例患者隨機(jī)分為涼血潛陽(yáng)法辨證加減組和固定方組,分別予8周口服藥物治療,采用銀屑病面積及嚴(yán)重度指數(shù)評(píng)分法(Psoriasis Area Severity Index,PASI)評(píng)價(jià)其臨床療效和安全性;同時(shí)以正常組織為對(duì)照,選取銀屑病血熱證、涼血潛陽(yáng)治療愈顯和無(wú)效患者,采用免疫組化法檢測(cè)WIF-1、STAT3、Wnt-5a、β-Catenin蛋白表達(dá)與分布。第二、第三部分為在體和離體實(shí)驗(yàn)相結(jié)合,在體實(shí)驗(yàn)以銀屑病患者皮損和正常受試者皮膚為研究對(duì)象,運(yùn)用亞硫酸鹽擴(kuò)增子測(cè)序、q PCR、Western blot、免疫組化技術(shù)檢測(cè)WIF-1甲基化狀態(tài)、相關(guān)基因和蛋白表達(dá);離體實(shí)驗(yàn)以Ha Ca T細(xì)胞為研究對(duì)象,采用WIF-1 sh RNA轉(zhuǎn)染和去甲基化方法,通過(guò)功能學(xué)研究評(píng)價(jià)WIF-1表達(dá)沉默對(duì)Wnt信號(hào)通路調(diào)控...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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中文摘要
Abstract
引言
第一部分 涼血潛陽(yáng)法治療銀屑病血熱證臨床療效及Wnt信號(hào)通路表達(dá)研究
    1 臨床資料與方法
        1.1 病例資料來(lái)源
        1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)
        1.3 入選標(biāo)準(zhǔn)
        1.4 干預(yù)方式
        1.5 隨機(jī)方法
        1.6 分配隱藏
        1.7 觀察時(shí)間
        1.8 觀察指標(biāo)
        1.9 療效標(biāo)準(zhǔn)
        1.10 主要試劑
        1.11 數(shù)據(jù)錄入及統(tǒng)計(jì)方法
        1.12 倫理審批
    2 結(jié)果
        2.1 年齡、病程及性別基線比較
        2.2 PASI評(píng)分、DLQI、SDS、SAS指數(shù)基線比較
        2.3 治療前后PASI評(píng)分比較
        2.4 治療前后DLQI指數(shù)評(píng)分比較
        2.5 治療前后SDS指數(shù)評(píng)分比較
        2.6 治療前后SAS指數(shù)評(píng)分比較
        2.7 療效比較
        2.8 不良反應(yīng)
        2.9 涼血潛陽(yáng)法治療尋常型銀屑病血熱證典型病例
        2.10 尋常型銀屑病血熱證患者皮損與正常皮膚WIF-1、STAT3、Wnt-5a、β-Catenin蛋白的差異表達(dá)
        2.11 IFN-γ、IL-17、IL-23、TNF-α、IL-8、TGF-β1 基因在尋常型銀屑病血熱證患者皮損組織與正常皮膚mRNA表達(dá)
    3 討論
        3.1 中醫(yī)學(xué)對(duì)尋常型銀屑病血熱證的認(rèn)識(shí)
        3.2 尋常型銀屑病血熱證中醫(yī)藥臨床研究現(xiàn)狀
        3.3 涼血潛陽(yáng)法臨床療效分析
第二部分 尋常型銀屑病血熱證WIF-1表達(dá)及其啟動(dòng)子甲基化研究
    1 在體實(shí)驗(yàn)
        1.1 資料與方法
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)資料
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要儀器設(shè)備
            1.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
            1.1.5 指標(biāo)檢測(cè)
            1.1.6 統(tǒng)計(jì)方法
        1.2 結(jié)果
            1.2.1 EMBOSS Cpgplot和 Methprimer軟件進(jìn)行WIF-1啟動(dòng)子CpG島預(yù)測(cè)
            1.2.2 亞硫酸鹽擴(kuò)增子測(cè)序檢測(cè)銀屑病血熱證WIF-1啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)
            1.2.3 銀屑病血熱證WIF-1 m RNA、蛋白表達(dá)
    2 離體實(shí)驗(yàn)
        2.1 資料與方法
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)資料
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器及設(shè)備
            2.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1.5 統(tǒng)計(jì)方法
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 Western Blot 檢測(cè) 5-Aza-d C 藥物作用濃度和 WIF-1 sh RNA 轉(zhuǎn)染效率
            2.2.2 MSP檢測(cè)WIF-1 基因調(diào)控區(qū)甲基化程度
            2.2.3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)HaCaT細(xì)胞凋亡率
            2.2.4 免疫熒光檢測(cè)HaCaT細(xì)胞增殖
    3 討論
        3.1 DNA甲基化與銀屑病
        3.2 Wnt信號(hào)通路與銀屑病
第三部分 涼血潛陽(yáng)法調(diào)控WIF-1甲基化緩解銀屑病血熱證研究
    1 在體實(shí)驗(yàn)
        1.1 資料與方法
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)資料
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要儀器設(shè)備
            1.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
            1.1.5 指標(biāo)檢測(cè)
            1.1.6 統(tǒng)計(jì)方法
        1.2 結(jié)果
            1.2.1 亞硫酸鹽擴(kuò)增子測(cè)序檢測(cè)銀屑病血熱證WIF-1啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)
            1.2.2 銀屑病血熱證WIF-1 m RNA、蛋白表達(dá)
    2 離體實(shí)驗(yàn)
        2.1 資料與方法
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)資料
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器及設(shè)備
            2.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1.5 統(tǒng)計(jì)方法
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 Western Blot檢測(cè)5-Aza-d C藥物作用濃度和WIF-1shRNA轉(zhuǎn)染效率
            2.2.2 MSP檢測(cè)WIF-1 基因調(diào)控區(qū)甲基化程度
            2.2.3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)HaCaT細(xì)胞凋亡率
            2.2.4 免疫熒光檢測(cè)HaCaT細(xì)胞增殖
    3 討論
        3.1 清熱涼血法治療銀屑病的作用機(jī)制研究現(xiàn)狀
            3.1.1 清熱涼血法作用于免疫系統(tǒng)
            3.1.2 清熱涼血法作用與KC增殖、凋亡相關(guān)
            3.1.3 清熱涼血法作用與血液流變學(xué)相關(guān)
        3.2 涼血潛陽(yáng)法通過(guò)調(diào)控WIF-1甲基化緩解銀屑病血熱證
創(chuàng)新點(diǎn)
結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄一 :文獻(xiàn)綜述 A MOOSE-compliant meta-analysis on the immune status of patients suffering from psoriasis vulgaris of blood-stasis and blood-dryness syndrome
    References
附錄二 :在校期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文
附錄三 :在校期間發(fā)表其他學(xué)術(shù)論文
附錄四 :參加學(xué)術(shù)會(huì)議情況
附錄五 :參編專著
附錄六 :倫理審查批件



本文編號(hào)：3786281