目的:臨床研究驗證涼血潛陽法治療尋常型銀屑病“血熱證”臨床療效、安全性及對Wnt信號通路的影響�；A研究從DNA甲基化修飾WIF-1調(diào)控Wnt信號通路角度,研究表觀遺傳修飾Wnt通路在尋常型銀屑病“血熱證”中的作用,并進一步闡釋涼血潛陽法作用機制。方法:第一部分采用隨機對照試驗設計,將80例患者隨機分為涼血潛陽法辨證加減組和固定方組,分別予8周口服藥物治療,采用銀屑病面積及嚴重度指數(shù)評分法(Psoriasis Area Severity Index,PASI)評價其臨床療效和安全性;同時以正常組織為對照,選取銀屑病血熱證、涼血潛陽治療愈顯和無效患者,采用免疫組化法檢測WIF-1、STAT3、Wnt-5a、β-Catenin蛋白表達與分布。第二、第三部分為在體和離體實驗相結(jié)合,在體實驗以銀屑病患者皮損和正常受試者皮膚為研究對象,運用亞硫酸鹽擴增子測序、q PCR、Western blot、免疫組化技術(shù)檢測WIF-1甲基化狀態(tài)、相關(guān)基因和蛋白表達;離體實驗以Ha Ca T細胞為研究對象,采用WIF-1 sh RNA轉(zhuǎn)染和去甲基化方法,通過功能學研究評價WIF-1表達沉默對Wnt信號通路調(diào)控...

【文章頁數(shù)】：142 頁

【學位級別】：博士

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中文摘要
Abstract
引言
第一部分 涼血潛陽法治療銀屑病血熱證臨床療效及Wnt信號通路表達研究
    1 臨床資料與方法
        1.1 病例資料來源
        1.2 診斷標準
        1.3 入選標準
        1.4 干預方式
        1.5 隨機方法
        1.6 分配隱藏
        1.7 觀察時間
        1.8 觀察指標
        1.9 療效標準
        1.10 主要試劑
        1.11 數(shù)據(jù)錄入及統(tǒng)計方法
        1.12 倫理審批
    2 結(jié)果
        2.1 年齡、病程及性別基線比較
        2.2 PASI評分、DLQI、SDS、SAS指數(shù)基線比較
        2.3 治療前后PASI評分比較
        2.4 治療前后DLQI指數(shù)評分比較
        2.5 治療前后SDS指數(shù)評分比較
        2.6 治療前后SAS指數(shù)評分比較
        2.7 療效比較
        2.8 不良反應
        2.9 涼血潛陽法治療尋常型銀屑病血熱證典型病例
        2.10 尋常型銀屑病血熱證患者皮損與正常皮膚WIF-1、STAT3、Wnt-5a、β-Catenin蛋白的差異表達
        2.11 IFN-γ、IL-17、IL-23、TNF-α、IL-8、TGF-β1 基因在尋常型銀屑病血熱證患者皮損組織與正常皮膚mRNA表達
    3 討論
        3.1 中醫(yī)學對尋常型銀屑病血熱證的認識
        3.2 尋常型銀屑病血熱證中醫(yī)藥臨床研究現(xiàn)狀
        3.3 涼血潛陽法臨床療效分析
第二部分 尋常型銀屑病血熱證WIF-1表達及其啟動子甲基化研究
    1 在體實驗
        1.1 資料與方法
            1.1.1 實驗資料
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要儀器設備
            1.1.4 實驗方法
            1.1.5 指標檢測
            1.1.6 統(tǒng)計方法
        1.2 結(jié)果
            1.2.1 EMBOSS Cpgplot和 Methprimer軟件進行WIF-1啟動子CpG島預測
            1.2.2 亞硫酸鹽擴增子測序檢測銀屑病血熱證WIF-1啟動子甲基化狀態(tài)
            1.2.3 銀屑病血熱證WIF-1 m RNA、蛋白表達
    2 離體實驗
        2.1 資料與方法
            2.1.1 實驗資料
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器及設備
            2.1.4 實驗方法
            2.1.5 統(tǒng)計方法
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 Western Blot 檢測 5-Aza-d C 藥物作用濃度和 WIF-1 sh RNA 轉(zhuǎn)染效率
            2.2.2 MSP檢測WIF-1 基因調(diào)控區(qū)甲基化程度
            2.2.3 流式細胞儀檢測HaCaT細胞凋亡率
            2.2.4 免疫熒光檢測HaCaT細胞增殖
    3 討論
        3.1 DNA甲基化與銀屑病
        3.2 Wnt信號通路與銀屑病
第三部分 涼血潛陽法調(diào)控WIF-1甲基化緩解銀屑病血熱證研究
    1 在體實驗
        1.1 資料與方法
            1.1.1 實驗資料
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要儀器設備
            1.1.4 實驗方法
            1.1.5 指標檢測
            1.1.6 統(tǒng)計方法
        1.2 結(jié)果
            1.2.1 亞硫酸鹽擴增子測序檢測銀屑病血熱證WIF-1啟動子甲基化狀態(tài)
            1.2.2 銀屑病血熱證WIF-1 m RNA、蛋白表達
    2 離體實驗
        2.1 資料與方法
            2.1.1 實驗資料
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器及設備
            2.1.4 實驗方法
            2.1.5 統(tǒng)計方法
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 Western Blot檢測5-Aza-d C藥物作用濃度和WIF-1shRNA轉(zhuǎn)染效率
            2.2.2 MSP檢測WIF-1 基因調(diào)控區(qū)甲基化程度
            2.2.3 流式細胞儀檢測HaCaT細胞凋亡率
            2.2.4 免疫熒光檢測HaCaT細胞增殖
    3 討論
        3.1 清熱涼血法治療銀屑病的作用機制研究現(xiàn)狀
            3.1.1 清熱涼血法作用于免疫系統(tǒng)
            3.1.2 清熱涼血法作用與KC增殖、凋亡相關(guān)
            3.1.3 清熱涼血法作用與血液流變學相關(guān)
        3.2 涼血潛陽法通過調(diào)控WIF-1甲基化緩解銀屑病血熱證
創(chuàng)新點
結(jié)論
致謝
參考文獻
附錄一 :文獻綜述 A MOOSE-compliant meta-analysis on the immune status of patients suffering from psoriasis vulgaris of blood-stasis and blood-dryness syndrome
    References
附錄二 :在校期間發(fā)表學術(shù)論文
附錄三 :在校期間發(fā)表其他學術(shù)論文
附錄四 :參加學術(shù)會議情況
附錄五 :參編專著
附錄六 :倫理審查批件



本文編號：3786281