本文關(guān)鍵詞：膽管瘢痕差異蛋白研究及Activin B在UDCA治療瘢痕中作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[研究目的]從蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄水平研究良性膽管增生性癱痕形成的分子機(jī)理,同時(shí)為膽管增生性瘢痕的發(fā)病機(jī)制研究提供線索,為臨床研究和治療膽管增生性瘢痕提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。[研究方法]1.原代培養(yǎng)人肝內(nèi)膽管正常成纖維細(xì)胞和瘢痕成纖維細(xì)胞,MTT檢測正常及瘢痕成纖維細(xì)胞生長情況；2.蛋白芯片檢測膽管正常成纖維細(xì)胞和瘢痕成纖維細(xì)胞差異蛋白,對差異蛋白進(jìn)行Pathway分析和GO功能注釋,從中選取Act B、 TGF-β1、ET-1、Tsp-1和OSM作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)蛋白；3. ELISA驗(yàn)證膽管瘢痕組織差異蛋白；4. siRNA-Act B轉(zhuǎn)染瘢痕成纖維細(xì)胞,RT-PCR檢測Act B mRNA表達(dá),流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡,Western-blot檢測差異蛋白表達(dá)；5.重組人Act B蛋白干預(yù)正常成纖維細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期,Western-blot檢測差異蛋白表達(dá)；6.MTT檢測12種膽汁酸對瘢痕成纖維細(xì)胞活力的影響；7.流式細(xì)胞儀檢測膽酸、脫氧膽酸對瘢痕成纖維細(xì)胞周期的影響；8.細(xì)胞計(jì)數(shù)、MTT和劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測膽酸和脫氧膽酸聯(lián)合對瘢痕成纖維細(xì)胞活力的影響；9.流式細(xì)胞儀檢測熊脫氧膽酸對瘢痕成纖維細(xì)胞凋亡的影響；10.Western-blot檢測熊脫氧膽酸對瘢痕成纖維細(xì)胞差異蛋白的影響；11.用熊脫氧膽酸喂食膽總管瘢痕狹窄模型的家兔,連續(xù)觀察30天、90天和180天；12.檢測熊脫氧膽酸對血清肝功能的影響；13.HE染色和Masson染色分別觀察熊脫氧膽酸對瘢痕增生指數(shù)和膠原纖維面密度的影響；14.免疫組織化學(xué)法檢測熊脫氧膽酸對瘢痕組織Act B和Smad2/3表達(dá)的影響；15.Western-blot檢測熊脫氧膽酸對瘢痕組織差異蛋白表達(dá)的影響。[研究結(jié)果]1.原代培養(yǎng)的正常成纖維細(xì)胞和瘢痕成纖維細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)不同,vimentin免疫熒光檢測二者細(xì)胞都為陽性表達(dá),瘢痕成纖維細(xì)胞生長速度明顯快于正常成纖維細(xì)胞；2.蛋白芯片檢測507個蛋白,共發(fā)現(xiàn)有37個差異蛋白,與正常成纖維細(xì)胞相比,在瘢痕成纖維細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)的蛋白有27個,表達(dá)下調(diào)的蛋白有10個(P0.05),其功能與細(xì)胞外基質(zhì)的合成與降解、細(xì)胞因子的生成和激活、炎癥免疫反應(yīng)、組織損傷反應(yīng)、細(xì)胞周期、細(xì)胞遷移、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞分泌和結(jié)合激活素等有關(guān)；3.ELISA驗(yàn)證Act B、TGF-β1、ET-1、Tsp-1和OSM蛋白表達(dá)情況符合蛋白芯片的結(jié)果；4. siRNA-Act B干擾組Act B mRNA表達(dá)量顯著下降(P0.01)。干擾組早期凋亡、晚期凋亡及壞死百分比升高(P0.01)。干擾組Act B、Smad2/3和TGF-β1蛋白表達(dá)量降低(P0.05),其中TGF-β1 (P0.01),而干擾組Tsp-1和OSM蛋白表達(dá)量升高(P0.05),其中OSM (P0.01);5.重組人Act B蛋白過表達(dá)組細(xì)胞周期G0/G1期百分比降低,S期百分比上升(P0.05)。過表達(dá)組Act B、Smad2/3和TGF-β1蛋白表達(dá)量升高(P0.05),而過表達(dá)組Tsp-1和OSM蛋白表達(dá)量顯著降低(P0.01)；6.膽汁酸濃度在0.5-5μmol/L之間時(shí),僅膽酸和脫氧膽酸促進(jìn)瘢痕成纖維細(xì)胞活力(P0.05),其他膽汁酸對瘢痕成纖維細(xì)胞的活力無明顯影響(P0.05),濃度在20-500μmol/L,絕大多數(shù)膽汁酸都抑制了瘢痕成纖維細(xì)胞的活力(P0.05)；7.膽酸、脫氧膽酸使瘢痕成纖維細(xì)胞G0/G1期百分比降低,S期百分比上升(P0.05)；8.膽酸和脫氧膽酸聯(lián)合干預(yù)瘢痕成纖維細(xì)胞,聯(lián)合組細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞活力增加,劃痕愈合距離縮小(P0.05)；9.熊脫氧膽酸促進(jìn)瘢痕成纖維細(xì)胞凋亡；10.熊脫氧膽酸抑制瘢痕成纖維細(xì)胞Act B、Smad2/3和TGF-β1蛋白表達(dá)量(P0.05),升高Tsp-1和OSM蛋白表達(dá)(P0.05)；11.膽總管瘢痕狹窄模型制備成功；12.熊脫氧膽酸能適度改善血清肝功能指標(biāo)；13.熊脫氧膽酸能輕度減少瘢痕增生指數(shù)和膠原纖維面密度；14.180d觀察發(fā)現(xiàn)UDCA組與瘢痕組Act B和Samd2/3總體評分分布有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),且服藥與總體評分有相關(guān)性。30d、90d和180天連續(xù)觀察發(fā)現(xiàn)Act B和Samd2/3總體評分隨時(shí)間推移而減少(P0.05),時(shí)間長短與總體評分有相關(guān)性；15.熊脫氧膽酸抑制瘢痕組織Act B、Smad2/3、TGF-β1和ET-1蛋白表達(dá)(P0.05),升高Tsp-1蛋白表達(dá)(P0.05)。[研究結(jié)論]1.人肝內(nèi)膽管瘢痕成纖維細(xì)胞和正常成纖維細(xì)胞存在蛋白表達(dá)差異,其中Activin B、TGF-β1、ET-1、Tsp-1和OSM與瘢痕形成有關(guān)。2. Activin B信號在膽管正常成纖維細(xì)胞向瘢痕成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程中起著重要作用,TGF-β1、Smad2/3、Tsp-1和OSM是重要的參與者。3.低濃度的膽酸和脫氧膽酸可促進(jìn)瘢痕成纖維細(xì)胞生長。4. UDCA可抑制瘢痕成纖維細(xì)胞的生長,促進(jìn)其凋亡。其機(jī)制是通過ActivinB信號調(diào)控TGF-β1、Smad2/3、Tsp-1和OSM蛋白的表達(dá)。5. UDCA可適度改善良性膽總管瘢痕狹窄動物肝功能、瘢痕增生指數(shù)、膠原纖維面密度指標(biāo),且改善程度與時(shí)間長短相關(guān)。其機(jī)制是通過Activin B信號調(diào)控TGF-β1、Smad2/3、ET-1和Tsp-1蛋白的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：膽管 瘢痕 成纖維細(xì)胞 熊脫氧膽酸 Activin B
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R657.4
【目錄】：

• 英文縮寫一覽表6-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-14
• 引言14-16
• 第一部分 人肝內(nèi)膽管正常成纖維細(xì)胞和瘢痕成纖維細(xì)胞的體外培養(yǎng)及差異蛋白研究16-72
• 前言16
• 材料與方法16-38
• 結(jié)果38-60
• 討論60-66
• 結(jié)論66-67
• 參考文獻(xiàn)67-72
• 第二部分 膽汁酸對人肝內(nèi)膽管瘢痕成纖維細(xì)胞生長影響的研究及熊脫氧膽酸對瘢痕成纖維細(xì)胞生長影響機(jī)制的探討72-95
• 前言72
• 材料與方法72-79
• 結(jié)果79-85
• 討論85-90
• 結(jié)論90-91
• 參考文獻(xiàn)91-95
• 第三部分 熊脫氧膽酸對家兔良性膽總管瘢痕狹窄的影響及機(jī)制探討95-118
• 前言95
• 材料與方法95-103
• 結(jié)果103-112
• 討論112-114
• 結(jié)論114-115
• 參考文獻(xiàn)115-118
• 全文總結(jié)118-119
• 文獻(xiàn)綜述119-130
• 參考文獻(xiàn)125-130
• 攻讀博士學(xué)位期間主要研究成果130-131
• 致謝131

【引證文獻(xiàn)】

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 柴成偉;魏明發(fā);馮杰雄;吳曉娟;鄭帥玉;王小林;;環(huán)氧化酶-2在甘氨鵝脫氧膽酸鈉致膽管上皮細(xì)胞癌變中的機(jī)理研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國小兒外科學(xué)術(shù)會論文集[C];2010年

2 賀偉峰;吳軍;羅高興;甘成軍;程文廣;袁順宗;彭旭;賈雄飛;譚江琳;王曉娟;胡婕;黃正根;楊世偉;陳希煒;張小容;;增生性瘢痕組織和正常皮膚來源的成纖維細(xì)胞分泌蛋白的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會燒傷外科學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

  本文關(guān)鍵詞：膽管瘢痕差異蛋白研究及Activin B在UDCA治療瘢痕中作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：377389