發(fā)布時(shí)間：2017-05-18 20:06

  本文關(guān)鍵詞：Period2 調(diào)節(jié)小鼠心肌梗死后血管新生的作用及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景心血管疾病是當(dāng)今導(dǎo)致人類死亡的第一殺手,其中,急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)是心力衰竭、心律失常及猝死的主要原因。AMI發(fā)作的一個(gè)顯著流行病學(xué)特點(diǎn)是,多數(shù)患者常在凌晨發(fā)病,這個(gè)時(shí)間患者難以及時(shí)就診,因而失去再灌注治療的最佳時(shí)間窗,從而導(dǎo)致較大范圍的心肌壞死和心源性休克、心律失常和心力衰竭等嚴(yán)重并發(fā)癥的發(fā)生。因此,深入研究AMI發(fā)作的晝夜調(diào)控規(guī)律及機(jī)制,對于有效的防治心肌梗死是具有十分重要的意義的。晝夜節(jié)律(circadian rhythm)也被稱為近日節(jié)律,生理節(jié)律,24小時(shí)節(jié)律,在人體的生理活動中扮演著重要角色,尤其是對組織器官的細(xì)胞活性起著節(jié)律性的生理調(diào)節(jié)作用。晝夜節(jié)律的破壞會導(dǎo)致疾病的發(fā)生、發(fā)展。近年來的流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)：睡眠剝奪、生理節(jié)律被破壞以及夜間處在光環(huán)境中的工作者有較大幾率發(fā)生心肌梗死(myocardial infarction, MⅠ)、中風(fēng)、糖尿病以及一些癌癥,并且有研究還發(fā)現(xiàn)節(jié)律基因的破壞破壞會產(chǎn)生較少的血管新生。研究表明：心肌梗死的發(fā)生相比于其他時(shí)間更容易出現(xiàn)在上午6點(diǎn)左右,并且研究還發(fā)現(xiàn)凌晨發(fā)生的心梗其梗死面積都要明顯大于一天當(dāng)中其他時(shí)間�？梢�,心肌梗死的發(fā)生和發(fā)展與時(shí)間節(jié)律有著密切的關(guān)系。晝夜節(jié)律的交替使得節(jié)律基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯呈現(xiàn)出節(jié)律性的變化。晝夜節(jié)律是通過節(jié)律基因調(diào)控組織器官功能的。Period 2 (per2)是節(jié)律基因period家族成員之一,目前研究認(rèn)為該基因?qū)π难芗膊∮兄匾绊�。其表達(dá)于骨髓CD34陽性細(xì)胞、人類的白細(xì)胞以及小鼠的骨髓中。研究表明per2通過自身節(jié)律性表達(dá)調(diào)節(jié)了造血干細(xì)胞的釋放。外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells, EPCs)的數(shù)量和功能與心血管疾病的關(guān)系十分密切。外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量的增加能夠改善受損動脈的修復(fù),相反,減少的數(shù)量會導(dǎo)致心血管疾病的發(fā)生,尤其是心肌梗死的發(fā)生發(fā)展。2008年,、vang cy等人采用下肢缺血模型研究得出節(jié)律基因per2突變會減少下肢缺血后的血管新生,這為節(jié)律基因和內(nèi)皮祖細(xì)胞的密切關(guān)系提供了有力證據(jù)。但對于節(jié)律基因per2與心梗發(fā)生的節(jié)律性以及per2與心梗后的血管新生之間的關(guān)系尚缺乏直接的證據(jù)。本論文擬通過采用per2基因敲除小鼠研究內(nèi)皮祖細(xì)胞的數(shù)量、功能以及這些相關(guān)功能與心肌梗死的關(guān)系,從而明確節(jié)律基因per2在心梗發(fā)生發(fā)展及血管新生中的作用。目的1.觀察野生型小鼠和per2基因敲除(knock out, KO)小鼠外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞的數(shù)量的變化；2.觀察per2基因敲除前后小鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的功能改變；3.探討per2基因影響內(nèi)皮祖細(xì)胞的數(shù)量和功能的可能機(jī)制。方法1小鼠基因型鑒定提取鼠尾組織脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid, DNA),加入引物,進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction, PCR)擴(kuò)增,并進(jìn)行DNA瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)進(jìn)行基因型的鑒定。2動物分組于早6點(diǎn)、中午12點(diǎn)、傍晚18點(diǎn)分別選取野生型(wild type, WT)、per2 KO(per2-／-)小鼠6只,檢測外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量。WT小鼠55只隨機(jī)分為4組,假手術(shù)組10只,心肌梗死模型組心肌內(nèi)注射鹽溶液(PBS)組15只,心梗模型組心肌內(nèi)注射WT-EPC (MI+WT EPCs)組15只,心梗模型組加心肌內(nèi)注射per2-/--EPC (MI+per2-/-EPCs)組15只。3內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定無菌狀態(tài)下分離小鼠股骨和脛骨,獲得單個(gè)核細(xì)胞,采用EGM-2培養(yǎng)基培養(yǎng)7天,將得到的內(nèi)皮祖細(xì)胞進(jìn)行流式鑒定及觀察細(xì)胞對乙�；兔芏戎鞍�(DiI-AcLDL)的攝取和對荊豆凝集素(UEA-I)的綁定進(jìn)行細(xì)胞鑒定。4實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(Q uantitative RT-PCR)提取內(nèi)皮祖細(xì)胞RNA采用per2引物進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn),檢測per2的mRNA的表達(dá).5免疫熒光化學(xué)檢測以免疫熒光方法檢測內(nèi)皮祖細(xì)胞上per2的蛋白表達(dá)。6內(nèi)皮祖細(xì)胞功能檢測(增殖、遷移、粘附、成管功能)采用CCK-8試劑盒檢測內(nèi)皮祖細(xì)胞的增殖功能,transwell小室檢測內(nèi)皮祖細(xì)胞的遷移功能、基質(zhì)膠成管實(shí)驗(yàn)檢測內(nèi)皮祖細(xì)胞體外成管功能、細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)檢測粘附功能。7蛋白免疫印跡試驗(yàn)檢測采用蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測內(nèi)皮祖細(xì)胞上P13K/Akt/Foco3a以及(CXCR4的蛋白表達(dá)水平。8免疫共沉淀檢測通過免疫共沉淀方法檢測CXCR4蛋白和per2蛋白的相互作用。9心肌內(nèi)注射內(nèi)皮祖細(xì)胞的標(biāo)記采用DiI-C18依據(jù)說明書進(jìn)行內(nèi)皮祖細(xì)胞的標(biāo)記以備心肌內(nèi)注射用。10小鼠心梗模型建立使用戊巴比妥鈉麻醉小鼠,建立呼吸支持,進(jìn)行冠狀動脈左前降支結(jié)扎術(shù)。頸部及左前胸脫毛備皮,剪開頸部皮膚,行氣管插管。建立有效呼吸支持后,開胸,剪開心包,暴露左冠狀動脈前降支。用6-0或7-0的無損縫合線進(jìn)行冠狀動脈結(jié)扎,結(jié)扎成功后,左心室前壁顏色變白并且室壁運(yùn)動異常,顯示造模成功,然后逐層關(guān)胸。11超聲學(xué)檢測術(shù)前及術(shù)后28天,將異氟烷麻醉的小鼠進(jìn)行經(jīng)胸超聲心動圖檢測評估左心室功能。選取頻率為35MHz的712型超聲探頭進(jìn)行的心臟大小和功能參數(shù)的采集,用高分辨率超聲Vevo 770系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。探頭放置于小鼠左前胸,在心臟乳頭肌水平進(jìn)行M型超聲檢測,測量舒張末期左心室內(nèi)徑(LVIDd)、收縮末期左室內(nèi)徑(LVIDs).系統(tǒng)自動計(jì)算射血分?jǐn)?shù)、短軸縮短率。12組織學(xué)檢測術(shù)后28天處死相應(yīng)小鼠,使用小鼠左心室冰凍和石蠟切片進(jìn)行組織學(xué)分析。冰凍切片觀察DiI的表達(dá)。制備5μm石蠟切片行Masson三色染色及免疫組化染色。用Masson染色進(jìn)行梗死面積測量,使用免疫組化染色法檢測相關(guān)指標(biāo)的陽性率。13凋亡檢測使用原位末端凋亡檢測試劑盒檢測梗死周邊區(qū)細(xì)胞的凋亡率,細(xì)胞核完全被染色的細(xì)胞被認(rèn)為是凋亡細(xì)胞。14統(tǒng)計(jì)分析所有統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)均使用SPSS 16.0軟件分析。計(jì)量資料以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示。統(tǒng)計(jì)分析兩組比較采用t檢驗(yàn)、多組比較采用單因素方差分析(one-way ANO VA)方法,先檢驗(yàn)方差齊性,若方差齊,使用LSD檢驗(yàn)；若方差不齊,使用Dunnett'sT3檢驗(yàn)。P0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1小鼠基因型鑒定結(jié)果野生型小鼠瓊脂糖凝膠電泳后顯像示只有800bp的條帶,per2-／-小鼠顯像示只有400bp條帶,雜合子顯像有400bp和800bp兩個(gè)條帶。2野生型小鼠和per2-／-小鼠外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞的數(shù)量存在顯著性差異野生型小鼠外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞在6點(diǎn)處于較低水平,12點(diǎn)時(shí)升至較高水平,隨之下降,18點(diǎn)時(shí)較12點(diǎn)有明顯下降,但高于6點(diǎn)水平。呈現(xiàn)出節(jié)律性變化。而per2-／-小鼠外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞的數(shù)量的節(jié)律性變化消失,在12點(diǎn)和18點(diǎn)時(shí)內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量明顯低于野生型小鼠在這兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)的數(shù)量。3內(nèi)皮祖細(xì)胞被成功分離并培養(yǎng)骨髓來源的單個(gè)核細(xì)胞在采用EGM-2培養(yǎng)基培養(yǎng)4天即可見集落樣細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)瓶。7天后,這些細(xì)胞能夠攝取DiI-AcLDL以及荊豆凝集素,大量細(xì)胞表面表達(dá)CD34、VEGFR2,少量表達(dá)CD45表面標(biāo)記物。4 Per2 mRNA表達(dá)野生型小鼠骨髓來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞表達(dá)per2的mRNA,而per2-／-小鼠骨髓來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞不表達(dá)。5 Per2蛋白表達(dá)免疫熒光試驗(yàn)檢測到野生型小鼠骨髓來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞有per2蛋白表達(dá)。6兩種內(nèi)皮祖細(xì)胞的功能檢測結(jié)果Per2-／-小鼠骨髓來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞的增殖功能、遷移功能、以及成管、粘附功能較野生小鼠明顯下降。LY294002 (PI3K信號通路抑制劑)能夠抑制野生型內(nèi)皮祖細(xì)胞的增殖功能。采用胰島素樣生長因子-1(insulin like growth factorIGF-1)刺激per2-／-內(nèi)皮祖細(xì)胞其增殖功能得以恢復(fù),但遷移、成管、粘附功能未恢復(fù)。7 PI3K/Akt/Foxo3a 及 CXCR4蛋白表達(dá)結(jié)果Per2-／-的內(nèi)皮祖細(xì)胞PI3K/Akt/Foxo3a蛋白表達(dá)明顯受到抑制,CXCR4表達(dá)量明顯下降,采用IGF-1刺激后PI3K/Akt/Foxo3a的磷酸化表達(dá)量有所上調(diào),但CXCR4的表達(dá)未發(fā)生改變。8 Per2蛋白和CXCR4之間相互作用的檢測結(jié)果Per2和CXCR4蛋白間存在直接相互作用。9心梗后4周心臟上DiI表達(dá)的結(jié)果野生型內(nèi)皮祖細(xì)胞治療組心臟上DiI的數(shù)量明顯高于Per2-／-內(nèi)皮祖細(xì)胞治療組,且野生型內(nèi)皮祖細(xì)胞治療組能明顯觀察到標(biāo)記的內(nèi)皮祖細(xì)胞在血管上的表達(dá)。10小鼠心梗模型的建立結(jié)果成功構(gòu)建小鼠心梗模型。11超聲學(xué)檢測結(jié)果Per2-/-內(nèi)皮祖細(xì)胞治療組心功能明顯低于野生型內(nèi)皮祖細(xì)胞治療組。12心梗面積及免疫組化檢測結(jié)果Per2-/-內(nèi)皮祖細(xì)胞治療組心臟梗死面積明顯大于野生型內(nèi)皮祖細(xì)胞治療組。并且Per2-/-內(nèi)皮祖細(xì)胞治療組心臟上的凋亡細(xì)胞數(shù)量明顯多于野生型內(nèi)皮祖細(xì)胞治療組。Per2-/-內(nèi)皮祖細(xì)胞治療組心臟上的血管新生及動脈新生數(shù)量明顯少于野生型內(nèi)皮祖細(xì)胞治療組。結(jié)論1.per2基因能夠調(diào)節(jié)小鼠外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量的節(jié)律性變化。2.per2基因能夠影響內(nèi)皮祖細(xì)胞的增殖、遷移、成管、粘附功能。3.per2基因通過PI3K/Akt/FoxO3信號通路及CXCR4影響內(nèi)皮祖細(xì)胞的上述功能。4.per2基因能夠影響內(nèi)皮祖細(xì)胞心梗后的血管新生。背景在過去的兩個(gè)世紀(jì)中,微血管對于心梗后的康復(fù)是非常重要的。人類和動物的實(shí)驗(yàn)都證實(shí)了心梗后會使得一群來源于骨髓單個(gè)核細(xì)胞的內(nèi)皮祖細(xì)胞發(fā)生動員增加,這群細(xì)胞可以分化為內(nèi)皮細(xì)胞并能夠歸巢到缺血部位產(chǎn)生新的血管并進(jìn)行組織修復(fù)。研究表明：循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞的數(shù)量和功能是進(jìn)展性的心血管事件以及冠心病預(yù)后的重要指征。心梗后大量新生血管的發(fā)生及功能的完整化會改善心梗后心臟上的血流,增加心功能,降低左室重塑,減輕心梗帶來的危害。目前已證實(shí)他汀類降脂藥可動員骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞至外周血中,其作用機(jī)制主要是通過磷脂酰肌醇-3羥基酶／蛋白激酶B (PI3K/Akt)信號通路實(shí)現(xiàn)的。流行病學(xué)研究表明：心血管疾病的發(fā)生存在著明顯的節(jié)律性,同時(shí)晝夜節(jié)律的破壞會導(dǎo)致心血管事件發(fā)生率的增加,可見,晝夜節(jié)律和心血管事件之間存在著密切關(guān)系。我們在第一部分實(shí)驗(yàn)中提到,Wang cy等人在2008年研究得出：per2基因突變會使得下肢缺血誘導(dǎo)的內(nèi)皮祖細(xì)胞的血管新生減少。然而,心梗后節(jié)律基因調(diào)控的骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的動員及血管新生的研究尚缺乏有力的證據(jù)。心肌梗死后心臟上處于一種缺氧的狀態(tài),國內(nèi)外均有研究表明：短暫的缺氧刺激能夠增加內(nèi)皮祖細(xì)胞的粘附能力、遷移能力、增殖能力及成管能力。而Per2基因調(diào)控缺氧狀態(tài)下的內(nèi)皮祖細(xì)胞的功能尚缺乏有力的實(shí)驗(yàn)研究數(shù)據(jù)。根據(jù)節(jié)律基因調(diào)控細(xì)胞周期和腫瘤生長,Per2基因可能會參與缺血缺氧損傷后骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞功能的改變。我們在前面的實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)充分證實(shí)Per2對內(nèi)皮祖細(xì)胞功能的重要性,但對心梗后Per2對骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的動員及缺氧狀態(tài)下內(nèi)皮祖細(xì)胞功能的改變尚未進(jìn)行研究,因此我們在這一部分提出下面的假說：Per2基因可能通過某些機(jī)制參與了心梗后的骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的動員；Per2可能通過某些機(jī)制對缺氧后內(nèi)皮祖細(xì)胞的功能改變有著相關(guān)的調(diào)節(jié)作用。目的1體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察Per2對心肌梗死后外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞的動員情況；2體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察Per2調(diào)節(jié)血管新生在缺血心臟中的表達(dá)情況；3體外實(shí)驗(yàn)觀察Per2對骨髓來源內(nèi)皮祖細(xì)胞在缺氧狀態(tài)下的遷移、成管功能的影響；4探索Per2增強(qiáng)缺氧狀態(tài)下骨髓來源內(nèi)皮祖細(xì)胞的遷移、成管功能的機(jī)制。方法1.動物分組及心梗模型建立將48只野生型小鼠及40只Per2-/-小鼠分別分為對照組和心梗模型組。采用結(jié)扎左冠狀動脈前降支造成心梗模型。2.超聲學(xué)檢測于術(shù)前及梗死后28天行超聲學(xué)檢測,在心臟乳頭肌水平進(jìn)行M型超聲檢測,測量舒張末期左心室內(nèi)徑(LVIDd)、收縮末期左室內(nèi)徑(LVIDs)。由系統(tǒng)自動算出左室射血分?jǐn)?shù)、左室短軸縮短率。3.外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量的動員檢測于心梗后3天采用心尖取血方式獲得外周血,孵育流式抗體,檢測心梗后小鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的動員數(shù)量。4.骨髓微環(huán)境檢測于心梗后3天,獲得小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞,裂解提取蛋白,進(jìn)行蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn),觀察Akt及ERK的磷酸化水平。5.組織病理學(xué)檢測心梗后28天,麻醉小鼠,獲取小鼠心臟組織,進(jìn)行甲醛灌注固定、組織脫水、浸蠟切片。制備5μm石蠟切片用于Masson三色染色及免疫組化染色。使用Masson染色計(jì)算左心室梗死百分比；使用免疫組化染色法檢測相關(guān)指標(biāo)的陽性率。6.細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定分離小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞,采用EGM-2培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。7天后進(jìn)行內(nèi)皮祖細(xì)胞的相關(guān)鑒定。7.細(xì)胞在缺氧狀態(tài)下的功能學(xué)檢測將培養(yǎng)7天的內(nèi)皮祖細(xì)胞進(jìn)行transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)及基質(zhì)膠成管實(shí)驗(yàn),上述實(shí)驗(yàn)于缺氧狀態(tài)下進(jìn)行。8.蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測將培養(yǎng)7天的內(nèi)皮祖細(xì)胞進(jìn)行缺氧誘導(dǎo)培養(yǎng)24小時(shí),提取蛋白,進(jìn)行蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn),進(jìn)而檢測相關(guān)信號通路在缺氧后的表達(dá)情況。9.數(shù)據(jù)分析數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)誤表示。用SPSS 16.0軟件做統(tǒng)計(jì)分析。兩組間比較采用T檢驗(yàn)。多組間比較使用單因素方差分析(one-way ANO VA)方法,檢驗(yàn)方差是否齊性,若數(shù)據(jù)方差齊,使用LSD檢驗(yàn)；若數(shù)據(jù)方差不齊,使用Dunnett's T3檢驗(yàn)。P0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.小鼠模型建立情況成功構(gòu)建小鼠心肌梗死模型。2.超聲學(xué)對心功能檢測的結(jié)果心梗后28天,per2-／-小鼠心功能明顯低于野生型小鼠心功能。3.外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞心梗后動員情況心梗后3天,兩組小鼠相對于對照組外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量均有明顯上升,但per2-／-小鼠外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞動員的比例明顯低于野生型小鼠。4.骨髓微環(huán)境檢測結(jié)果心梗后3天,野生型小鼠相對于對照組骨髓Akt及ERK出現(xiàn)明顯磷酸化,但per2-／-小鼠骨髓上述信號通路的磷酸化不明顯。5.心梗面積及心臟上內(nèi)皮祖細(xì)胞及血管新生檢測結(jié)果心梗后28天,per2-／-小鼠心梗面積明顯大于野生型小鼠,心臟上內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量及新生血管數(shù)量卻明顯少于野生型小鼠。6.內(nèi)皮祖細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定結(jié)果于培養(yǎng)7天后成功獲得內(nèi)皮祖細(xì)胞,這些細(xì)胞能夠攝取乙�；兔芏戎鞍准扒G豆凝集素。同時(shí)大多數(shù)細(xì)胞外膜能夠表達(dá)CD3、CD31及VEGFR2。7.細(xì)胞缺氧狀態(tài)下功能檢測結(jié)果缺氧狀態(tài)下,Per2-/-抑制了缺氧誘導(dǎo)的內(nèi)皮祖細(xì)胞的功能激活,使得敲除基因后的內(nèi)皮祖細(xì)胞的遷移及成管功能明顯低于野生型小鼠的內(nèi)皮祖細(xì)胞。8.蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)相關(guān)機(jī)制的檢測結(jié)果缺氧能夠增加野生型小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞的Per2蛋白表達(dá),并能激活P13K／Akt信號通路,但Per2-/-抑制了該信號通路的激活,從而可能通過該信號通路抑制了缺氧狀態(tài)下的內(nèi)皮祖細(xì)胞的功能。結(jié)論1.Per2基因能夠調(diào)節(jié)小鼠心梗后的骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的動員；2.Per2基因通過調(diào)節(jié)內(nèi)皮祖細(xì)胞的動員及缺氧狀態(tài)下的功能進(jìn)而影響心肌梗死后心臟上的血管新生；3.Per2基因可能通過調(diào)節(jié)P13K/Akt信號通路影響缺氧狀態(tài)下的內(nèi)皮祖細(xì)胞的功能。
【關(guān)鍵詞】：period 2基因 心肌梗死 血管新生 內(nèi)皮祖細(xì)胞 內(nèi)皮祖細(xì)胞動員 缺氧 period 2基因 心肌梗死 血管新生
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R542.22
【目錄】：

• 論文I 節(jié)律基因period 2調(diào)節(jié)內(nèi)皮祖細(xì)胞的功能在心肌梗死中的作用6-84
• 中文摘要6-12
• 英文摘要12-17
• 符號說明17-20
• 前言20-23
• 材料和方法23-49
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-51
• 討論51-61
• 結(jié)論61
• 創(chuàng)新點(diǎn)和限制性61-62
• 附表62-63
• 附圖63-70
• 參考文獻(xiàn)70-84
• 論文2 節(jié)律基因Period 2對小鼠也肌梗死后缺氧誘導(dǎo)的骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞動員和功能的作用及機(jī)制研究84-132
• 中文摘要84-88
• 英文摘要88-92
• 符號說明92-94
• 前言94-95
• 材料方法95-117
• 討論117-120
• 創(chuàng)新點(diǎn)和限制性120-121
• 結(jié)論121-122
• 附圖122-128
• 參考文獻(xiàn)128-132
• 致謝132-133
• 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表SCI論文133-134
• 附件134-135
• SCI論文1135-162
• SCI論文2162-184

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李燕,高平進(jìn),朱鼎良;內(nèi)皮祖細(xì)胞研究進(jìn)展[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2002年03期

2 孫燕,夏春林,何炎,施嬋宏,萬明輝;體外培養(yǎng)獲取高純度O-2A祖細(xì)胞[J];解剖學(xué)研究;2002年04期

3 袁紅豐;內(nèi)皮祖細(xì)胞研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊;2002年06期

4 楊申淼,劉開彥,陸道培;外周血造血干/祖細(xì)胞動員與采集時(shí)動態(tài)快速監(jiān)測造血祖細(xì)胞的意義[J];中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2003年03期

5 孫燕,王R

本文編號：377016