本文關(guān)鍵詞：益氣活血方藥配伍治療冠心病療效及作用機(jī)制的系統(tǒng)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：冠心病是臨床上常見(jiàn)的心血管系統(tǒng)疾病之一,應(yīng)當(dāng)屬于祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中“胸痹”、“心痛”等范疇,中醫(yī)認(rèn)為其為本虛標(biāo)實(shí)之證,本虛多為氣虛,標(biāo)實(shí)則多為血瘀。目前開(kāi)展的中醫(yī)藥治療冠心病療效及作用機(jī)制研究,多為單一臨床療效評(píng)價(jià),或藥理作用機(jī)制研究,而較少?gòu)南到y(tǒng)性研究角度,較為全面地,循序漸近地揭示中醫(yī)藥治療冠心病的核心藥物、有效法則、臨床療效、藥理機(jī)制等。故本研究結(jié)合導(dǎo)師多年診療冠心病的臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn),采用中醫(yī)藥文獻(xiàn)數(shù)據(jù)挖掘方法,探索中醫(yī)藥治療冠心病的用藥規(guī)律,通過(guò)搜集整理《中華醫(yī)典》收錄的治療冠心病名藥,篩選出冠心病的主要治則治法為益氣活血法,進(jìn)而采用循證醫(yī)學(xué)的系統(tǒng)評(píng)價(jià)方法,全面獲取益氣活血方藥配伍治療冠心病的臨床隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)研究,評(píng)估現(xiàn)代醫(yī)家應(yīng)用益氣活血方藥配伍治療冠心病的臨床療效及其安全性,最終確定益氣活血方藥配伍治療冠心病的代表藥物黃芪、丹參,并分別提取兩者有效成分黃芪甲苷、丹參酮IIA,采用細(xì)胞生物學(xué),分子生物學(xué)等實(shí)驗(yàn)研究方法,觀(guān)察其對(duì)分化后的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stromal cells,MSCs)間隙連接蛋白(Connexin protein,Cx)表達(dá)、縫隙連接通道(Gap junction channel,GJC)功能調(diào)節(jié)以及促新生血管生成能力的影響,以期為中醫(yī)藥治療冠心病藥物研發(fā)提供研究思路指導(dǎo)及有效干預(yù)措施。第一部分《中華醫(yī)典·名藥》收錄治療冠心病用藥規(guī)律研究1.目的明確《中華醫(yī)典·名藥》胸痹心痛證治用藥特點(diǎn)及主要治則治法。2.研究方法計(jì)算機(jī)檢索《中華醫(yī)典》光盤(pán)版(第5版)名藥部分,以“胸痹”、“心痛”、“心悸”、“怔忡”、“冠心病”、“心絞痛”、“心肌缺血”、“冠狀動(dòng)脈硬化”等為檢索詞,檢索方式為內(nèi)容檢索,通過(guò)制定嚴(yán)格納入及排除標(biāo)準(zhǔn),篩選及整理治療胸痹心痛方藥數(shù)據(jù),建立Excel數(shù)據(jù)庫(kù),采用SPSS19.0軟件統(tǒng)計(jì)分析。3.結(jié)果從《中華醫(yī)典·名藥》檢索到264首方藥約8萬(wàn)字的文獻(xiàn)資料,依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn),篩選出100首符合納排標(biāo)準(zhǔn)的治療冠心病方藥,研究結(jié)果顯示:①胸痹心痛治療法則:以益氣補(bǔ)虛、活血祛瘀為主;②治療胸痹心痛單味中藥使用頻次:由高至低分別為丹參、黃芪、人參、川芎、冰片等;③治療胸痹心痛中藥功效:按功效分為16大類(lèi),補(bǔ)虛類(lèi)中藥高達(dá)(33%),其中以補(bǔ)氣藥所占比重最大(43%),其次為為活血化瘀類(lèi)中藥(14%);④治療胸痹心痛單味中藥性味歸經(jīng):藥味以甘(34%)、辛(30%)味為主。藥性多以溫?zé)釣橹�。歸經(jīng)主入心(23%)、脾(18%)、肝(18%)經(jīng)。4.結(jié)論《中華醫(yī)典·名藥》收錄治療胸痹心痛前三位高頻藥物為丹參、黃芪、人參。其核心治療法則為益氣、活血,兼以理氣,安神。第二部分益氣活血方藥配伍治療冠心病的系統(tǒng)評(píng)價(jià)(Meta分析)1.目的評(píng)價(jià)益氣活血方藥配伍治療冠心病的臨床有效性及安全性。2.研究方法2.1計(jì)算機(jī)檢索中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)(China Biology Medicine disc,CBM)、中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)(CNKI)、維普期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)(VIP)、Pubmed等中英文數(shù)據(jù)庫(kù)(檢索時(shí)間范圍為2010-2014年)。采用循證檢索策略及方法,全面獲取益氣活血方藥配伍治療冠心病的隨機(jī)及半隨機(jī)對(duì)照臨床試驗(yàn),通過(guò)制定嚴(yán)格的納入及排除標(biāo)準(zhǔn),準(zhǔn)確篩選得到目標(biāo)研究文獻(xiàn)。2.2制定文獻(xiàn)資料提取表,由雙人獨(dú)立提取研究基本情況、病患基本信息、合并病信息、干預(yù)措施、臨床療效指標(biāo)等,不一致者由第三方專(zhuān)家組成員裁定。并采用改良Jadad量表評(píng)價(jià)研究文獻(xiàn)質(zhì)量。2.3采用Rev Man 5.3軟件合并分析療效指標(biāo)效應(yīng)量,系統(tǒng)評(píng)價(jià)益氣活血方藥配伍治療冠心病的臨床有效性。2.4采用描述性研究方法評(píng)價(jià)益氣活血方藥配伍治療冠心病的臨床安全性。3.結(jié)果3.1兩名研究者逐一閱讀所檢索到的624篇文獻(xiàn)資料,嚴(yán)格參照納排標(biāo)準(zhǔn)共28篇合計(jì)病例2900例入選,其中治療組1513例,對(duì)照組1387例。采用Rev Man 5.3軟件分析得:在臨床總療效、中醫(yī)證候療效、心絞痛療效、心電圖療效等指標(biāo)改善率方面,西醫(yī)常規(guī)治療基礎(chǔ)加益氣活血方藥配伍治療冠心病,優(yōu)于單純西醫(yī)常規(guī)治療,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.2分析以西醫(yī)常規(guī)治療消心痛為對(duì)照組的631例冠心病病例結(jié)果顯示:西醫(yī)常規(guī)治療消心痛基礎(chǔ)上加用益氣活血方藥配伍,與單純消心痛為主的西醫(yī)常規(guī)治療相比較,其臨床總療效、心電圖療效合并OR[95%CI]值分別為3.74[2.08,6.74]、2.23[1.92,3.85],具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),說(shuō)明在西醫(yī)常規(guī)治療消心痛基礎(chǔ)上加益氣活血方藥配伍的治療組對(duì)冠心病臨床總療效、心電圖療效改善率,優(yōu)于單純以消心痛為主的西醫(yī)常規(guī)治療對(duì)照組。3.3分析以消心痛和阿司匹林聯(lián)合運(yùn)用的西醫(yī)常規(guī)治療為對(duì)照組的1877例冠心病患者,結(jié)果顯示:在以消心痛及阿司匹林合用的西醫(yī)常規(guī)治療基礎(chǔ)上加益氣活血方藥配伍,與單純消心痛及阿司匹林合用的西醫(yī)常規(guī)治療比較,其臨床總療效、中醫(yī)證候療效、心絞痛療效和心電圖療效合并OR[95%CI]值分別為4.48[3.25,6.19]、5.21[2.13,12.75]、2.77[1.57,4.88]、2.57[1.92,3.45],具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),說(shuō)明治療組對(duì)冠心病臨床總療效、中醫(yī)證候療效、心絞痛療效和心電圖療效改善,優(yōu)于以消心痛和阿司匹林為主的西醫(yī)常規(guī)治療對(duì)照組。3.4對(duì)納入研究的2900例冠心病病例進(jìn)行不良反應(yīng)/事件觀(guān)察,益氣活血方藥配伍治療組共出現(xiàn)5例不良反應(yīng)/事件,均為惡心、嘔吐等胃腸道反應(yīng),而單純西醫(yī)常規(guī)治療組出現(xiàn)14例不良反應(yīng)/事件,多表現(xiàn)為頭暈、惡心、無(wú)力等癥狀。4.結(jié)論4.1在西醫(yī)常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用益氣活血方藥配伍治療冠心病,在臨床總療效、中醫(yī)證候療效、心絞痛療效和心電圖療效等方面,優(yōu)于單純以消心痛或消心痛及阿司匹林為主的西醫(yī)常規(guī)治療。4.2益氣活血方藥配伍治療冠心病,不良反應(yīng)較少。第三部分丹參酮IIA、黃芪甲苷及其配伍對(duì)MSCs細(xì)胞連接蛋白表達(dá)及促血管生成作用的研究1.目的從黃芪甲苷、丹參酮IIA及其配伍對(duì)MSCs連接通訊功能的調(diào)節(jié)角度,探討此配伍是否通過(guò)間隙連接蛋白表達(dá),調(diào)節(jié)連接通訊功能而促進(jìn)血管生成,為益氣活血方藥配伍治療冠心病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。2.研究方法2.1采用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)乳鼠MSCs,獲得原代MSCs,倒置顯微鏡下觀(guān)察其形態(tài),流式細(xì)胞儀鑒定MSCs表面分子,并將該細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化,然后采用免疫組化法觀(guān)察誘導(dǎo)后細(xì)胞FⅧ因子表達(dá)。2.2誘導(dǎo)后的內(nèi)皮樣細(xì)胞隨機(jī)分為如下4組并干預(yù)72小時(shí):①空白組;②丹參酮IIA組;③黃芪甲苷組;④合用組。2.3分別采用實(shí)時(shí)定量PCR、Western blot檢測(cè)誘導(dǎo)后MSCs細(xì)胞Cx37、Cx40、Cx43 m RNA及蛋白表達(dá)。2.4劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)內(nèi)皮樣細(xì)胞間隙連接通訊功能。2.5 MTT法檢測(cè)誘導(dǎo)后內(nèi)皮樣細(xì)胞的增殖。2.6流式細(xì)胞儀檢測(cè)誘導(dǎo)后內(nèi)皮樣細(xì)胞的細(xì)胞周期。2.7三維基質(zhì)膠立體培養(yǎng)法檢測(cè)內(nèi)皮樣細(xì)胞的毛細(xì)血管管狀結(jié)構(gòu)形成能力。3.結(jié)果3.1經(jīng)過(guò)全骨髓貼壁法獲得的細(xì)胞呈短梭形、紡錘形,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)提示CD44、CD90分子表達(dá)呈陽(yáng)性,CD45、CD34分子表達(dá)呈陰性,證實(shí)提取的原代細(xì)胞為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,經(jīng)VEGF、b FGF誘導(dǎo)該細(xì)胞,并采用免疫組化法觀(guān)察FⅧ因子表達(dá),結(jié)果提示FⅧ因子相關(guān)抗原表達(dá)呈陽(yáng)性,證實(shí)誘導(dǎo)后細(xì)胞為內(nèi)皮樣細(xì)胞。3.2實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)誘導(dǎo)后MSCs提示:益氣活血合用組、丹參酮IIA組、黃芪甲苷組、空白組均可見(jiàn)Cx37、Cx40、Cx43m RNA的表達(dá),其中合用組表達(dá)最強(qiáng),丹參酮IIA組、黃芪甲苷組、空白組表達(dá)依次減弱,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Western blot檢測(cè)誘導(dǎo)后MSCs的Cx37、Cx40、Cx43蛋白的表達(dá)合用組高于單用組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),黃芪甲苷組略低于丹參酮IIA組,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3.3染料劃痕實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):合用組熒光染料主要出現(xiàn)在劃痕以外的3-4層細(xì)胞內(nèi)且較為明顯;丹參酮IIA組熒光染料則主要出現(xiàn)在劃痕2-3層細(xì)胞中而且亮度較高;黃芪甲苷組熒光染料出現(xiàn)在劃痕1-2層細(xì)胞中亮度較丹參酮IIA組略低;而空白組熒光染料主要出現(xiàn)在劃痕1層細(xì)胞中且亮度最低。其中合用組強(qiáng)于丹參酮IIA組和黃芪甲苷組,后兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.4 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖結(jié)果提示:合用組、丹參酮IIA組、黃芪甲苷組細(xì)胞增殖比例均高于空白組,合用組的增殖能力高于丹參酮IIA組與黃芪甲苷組,而丹參酮IIA組的增殖能力大于黃芪甲苷組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.5流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期結(jié)果顯示合用組、丹參酮IIA組、黃芪甲苷組細(xì)胞S期比例明顯高于空白組,合用組高于單用組,單用組中丹參酮IIA組細(xì)胞S期比例高于黃芪甲苷組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.6三維基質(zhì)膠立體培養(yǎng)法檢測(cè)內(nèi)皮樣細(xì)胞的毛細(xì)血管管狀結(jié)構(gòu)形成能力,其結(jié)果顯示:合用組、丹參酮IIA組、黃芪甲苷組均可見(jiàn)管狀結(jié)構(gòu)形成,其中合用組管狀結(jié)構(gòu)完整性及成管個(gè)數(shù)最好,空白組未見(jiàn)明顯管狀結(jié)構(gòu)形成。4.結(jié)論黃芪甲苷、丹參酮IIA及其配伍均可提高誘導(dǎo)分化后MSCs細(xì)胞Cx37、Cx40和Cx43蛋白及m RNA的表達(dá),調(diào)節(jié)細(xì)胞間隙連接通訊功能,從而促進(jìn)血管的生成。
【關(guān)鍵詞】：中華醫(yī)典 冠心病 用藥規(guī)律 治則治法 益氣活血 冠心病 系統(tǒng)評(píng)價(jià) 有效性 安全性 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 黃芪甲苷 丹參酮ⅡA 間隙連接蛋白
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R285
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-6
• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-18
• 前言18-19
• 文獻(xiàn)回顧19-28
• 第一部分 《中華醫(yī)典·名藥》治療冠心病用藥規(guī)律研究28-40
• 1 資料與方法28-30
• 2 結(jié)果30-39
• 3 討論39-40
• 第二部分 益氣活血方藥配伍治療冠心病的系統(tǒng)評(píng)價(jià)（Meta分析）40-64
• 1 資料與方法40-45
• 2 結(jié)果45-60
• 3 討論60-64
• 第三部分 丹參酮IIA、黃芪甲苷及其配伍對(duì)MSCS細(xì)胞連接蛋白表達(dá)及促血管生成作用的研究64-88
• 1 材料65-66
• 2 方法66-75
• 3 結(jié)果75-85
• 4 討論85-88
• 小結(jié)88-89
• 參考文獻(xiàn)89-99
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果99-100
• 致謝100

  本文關(guān)鍵詞：益氣活血方藥配伍治療冠心病療效及作用機(jī)制的系統(tǒng)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：376761