乳腺癌是女性最高發(fā)的癌癥類型。GATA轉(zhuǎn)錄因子家族成員在發(fā)育和癌癥中都起著重要作用。典型的GATA轉(zhuǎn)錄因子家族成員GATA1-6參與誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞的分化和調(diào)節(jié)腫瘤干細(xì)胞功能。轉(zhuǎn)錄抑制因子GATA結(jié)合蛋白1(TRPS1)是非典型的GATA轉(zhuǎn)錄因子家族成員,TRPS1能夠抑制軟骨細(xì)胞促分化過(guò)程,暗示TRPS1在腫瘤干細(xì)胞中發(fā)揮重要作用,然而TRPS1是如何調(diào)控腫瘤細(xì)胞干性維持和腫瘤發(fā)生起始過(guò)程還不清楚。腫瘤干細(xì)胞在癌癥中廣泛分布并在癌癥發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。SOX轉(zhuǎn)錄因子家族成員SOX2是腫瘤干細(xì)胞干性維持和腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵調(diào)控因子。SOX2在乳腺癌的發(fā)生、增殖、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等過(guò)程中均發(fā)生重要作用,然而SOX2基因表達(dá)被如何調(diào)控尚未被揭示。TRPS1是非典型的GATA轉(zhuǎn)錄因子家族成員,通常作為轉(zhuǎn)錄抑制因子調(diào)控靶基因的表達(dá)。本論文研究利用生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)TRPS1為潛在的調(diào)控SOX2表達(dá)的因子,進(jìn)一步通過(guò)染色質(zhì)免疫共沉淀和熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)等結(jié)果證實(shí)TRPS1能夠直接結(jié)合在SOX2的啟動(dòng)子區(qū)域并且抑制啟動(dòng)子區(qū)域的轉(zhuǎn)錄活性。在體外細(xì)胞水平的實(shí)驗(yàn)中,通過(guò)體外反映細(xì)胞干性的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ臀⑶蝮w實(shí)...

【文章頁(yè)數(shù)】：107 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略詞表
緒論
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 乳腺癌的研究進(jìn)展
        1.1.1 乳腺癌是一種高發(fā)的惡性腫瘤
        1.1.2 乳腺癌的分子分型
        1.1.3 乳腺癌的臨床分期
        1.1.4 乳腺癌的診療現(xiàn)狀和面臨的挑戰(zhàn)
    1.2 乳腺癌轉(zhuǎn)錄調(diào)控的研究進(jìn)展
        1.2.1 轉(zhuǎn)錄因子在乳腺癌中發(fā)揮調(diào)控作用的研究進(jìn)展
        1.2.2 非編碼RNA在乳腺癌中發(fā)揮調(diào)控作用的研究進(jìn)展
    1.3 GATA家族成員在乳腺癌中的研究進(jìn)展
        1.3.1 GATA家族概述
        1.3.2 GATA家族經(jīng)典成員的生物學(xué)功能
        1.3.3 GATA家族經(jīng)典成員在乳腺癌中的研究進(jìn)展
        1.3.4 非典型GATA家族成員TRPS1 的生物學(xué)功能
        1.3.5 TRPS1 在乳腺癌中的研究進(jìn)展
    1.4 SOX2 的研究進(jìn)展
        1.4.1 SOX基因家族概述
        1.4.2 SOX2 概述和生物學(xué)功能
        1.4.3 SOX2 在乳腺癌中的研究進(jìn)展
    1.5 乳腺癌干細(xì)胞研究進(jìn)展
        1.5.1 干細(xì)胞概述
        1.5.2 腫瘤干細(xì)胞概述
        1.5.3 乳腺癌干細(xì)胞概述
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 細(xì)胞系
        2.1.2 小干擾RNA
        2.1.3 質(zhì)粒
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染相關(guān)試劑
        2.2.2 RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄及實(shí)時(shí)熒光定量PCR相關(guān)試劑
        2.2.3 蛋白質(zhì)免疫印跡相關(guān)試劑
        2.2.4 染色質(zhì)免疫共沉淀相關(guān)試劑
        2.2.5 熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑盒
        2.2.6 微球體實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 流式細(xì)胞分析和分選
        2.2.8 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 生化、分子實(shí)驗(yàn)試劑
    2.3 常用溶液配方
    2.4 實(shí)驗(yàn)耗材和儀器
        2.4.1 實(shí)驗(yàn)耗材
        2.4.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.5 實(shí)驗(yàn)方法
        2.5.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.5.1.1 細(xì)胞復(fù)蘇
            2.5.1.2 細(xì)胞傳代
            2.5.1.3 細(xì)胞凍存
        2.5.2 siRNA轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞
        2.5.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞
        2.5.4 乳腺癌細(xì)胞總RNA的提取
        2.5.5 RNA逆轉(zhuǎn)錄為c DNA
        2.5.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.5.7 蛋白質(zhì)免疫印跡
            2.5.7.1 腫瘤細(xì)胞內(nèi)總蛋白的提取和制備
            2.5.7.2 蛋白樣品定量
            2.5.7.3 SDS-PAGE凝膠電泳
            2.5.7.4 轉(zhuǎn)膜與封閉
            2.5.7.5 抗體孵育與顯色
        2.5.8 質(zhì)粒的構(gòu)建
            2.5.8.1 感受態(tài)細(xì)胞的制備
            2.5.8.2 目的片段的擴(kuò)增
            2.5.8.3 目的片段與質(zhì)粒載體的酶切反應(yīng)
            2.5.8.4 目的片段與質(zhì)粒載體的連接
            2.5.8.5 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
        2.5.9 定點(diǎn)突變質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.5.10 慢病毒包裝系統(tǒng)
        2.5.11 染色質(zhì)免疫共沉淀
        2.5.12 熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
        2.5.13 微球體實(shí)驗(yàn)
        2.5.14 流式細(xì)胞分析和分選
        2.5.15 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)
        2.5.16 臨床樣本分析
        2.5.17 統(tǒng)計(jì)分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論
    引言
    3.1 TRPS1 抑制SOX2 的表達(dá)
        3.1.1 從數(shù)據(jù)庫(kù)中挖掘調(diào)控SOX2 的轉(zhuǎn)錄因子TRPS
        3.1.2 T47D和 MCF7中TRPS1 抑制SOX2 的表達(dá)
    3.2 TRPS1 錨定在SOX2 的啟動(dòng)子區(qū)域并發(fā)揮轉(zhuǎn)錄抑制作用
        3.2.1 TRPS1 直接結(jié)合在SOX2 的啟動(dòng)子區(qū)域
        3.2.2 TRPS1對(duì)SOX2 的啟動(dòng)子區(qū)域發(fā)揮轉(zhuǎn)錄抑制作用
        3.2.3 小結(jié)
    3.3 在體外TRPS1 通過(guò)抑制SOX2 的表達(dá)抑制腫瘤細(xì)胞干性
        3.3.1 TRPS1 通過(guò)SOX2 實(shí)現(xiàn)對(duì)乳腺癌細(xì)胞干性調(diào)控
        3.3.2 構(gòu)建MCF7 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系
        3.3.3 TRPS1 調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的成球能力
        3.3.4 TRPS1 調(diào)控腫瘤細(xì)胞中CD44+/CD24-細(xì)胞群體
        3.3.5 乳腺癌患者樣本中TRPS1和SOX2 表達(dá)情況
        3.3.6 小結(jié)
    3.4 在裸鼠體內(nèi)TRPS1 通過(guò)抑制SOX2 的表達(dá)抑制腫瘤發(fā)生的起始過(guò)程
        3.4.1 TRPS1 對(duì)腫瘤發(fā)生階段的影響
        3.4.2 TRPS1 對(duì)腫瘤生長(zhǎng)階段的影響
        3.4.3 小結(jié)
    3.5 討論
結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3769852