背景與目的:胃癌(gastric cancer,GC)是嚴(yán)重危害人類健康的常見惡性腫瘤,位于全球第三大癌癥死亡原因。胃癌具有發(fā)病隱匿和早期癥狀不明顯等特點(diǎn),多數(shù)患者首診時(shí)疾病已進(jìn)入進(jìn)展期,且伴有淋巴結(jié)或遠(yuǎn)處器官的轉(zhuǎn)移,這已成為胃癌防治的難點(diǎn)。因此,通過各種研究技術(shù)和手段深入研究胃癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移以及耐藥的分子機(jī)制,尋找早期診斷的分子標(biāo)志物以及藥物靶標(biāo)已迫在眉睫。最近的研究表明,非編碼RNAs參與了腫瘤轉(zhuǎn)移和惡性轉(zhuǎn)化的過程。MiR-4295是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的微小RNA(microRNA)分子,通過生物信息學(xué)分析,我們發(fā)現(xiàn)miR-4295與lncRNA HOTAIR存在結(jié)合位點(diǎn)。因此,我們的研究就從非編碼RNAs入手,研究微小RNA(miR-4295)和長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA HOTAIR)在胃癌生長(zhǎng)增殖和侵襲遷移中的功能及其機(jī)制。第一部分miR-4295通過PTEN/PI3K/AKT通路調(diào)控胃癌生長(zhǎng)和侵襲遷移的研究方法:本研究采用qRT-PCR檢測(cè)胃癌細(xì)胞系SGC-7901、MGC-803、BGC-823、MKN-28和人胃粘膜上皮細(xì)胞系GES-1中及胃癌組織中miR-4295的表...

【文章頁數(shù)】：197 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞簡(jiǎn)表
前言
第一部分 miR-4295 通過PTEN/PI3K/AKT通路調(diào)控胃癌生長(zhǎng)和侵襲遷移的研究
    第1章 miR-4295在胃癌細(xì)胞系和組織中的表達(dá)
        1.1 引言
        1.2 材料與方法
            1.2.1 材料
            1.2.2 方法
        1.3 結(jié)果
            1.3.1 細(xì)胞總RNA的提取、質(zhì)量和完整性鑒定
            1.3.2 胃癌細(xì)胞中miR-4295表達(dá)水平檢測(cè)
            1.3.3 胃癌組織中miR-4295表達(dá)水平檢測(cè)
            1.3.4 miR-4295與胃癌臨床病理特征相關(guān)性
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第2章 miR-4295對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移的影響
        2.1 引言
        2.2 材料與方法
            2.2.1 材料
            2.2.2 方法
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 miR-4295陽性克隆的測(cè)序結(jié)果
            2.3.2 qRT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞中miR-4295的表達(dá)水平
            2.3.3 miR-4295表達(dá)水平改變對(duì)胃癌細(xì)胞增殖活力、生長(zhǎng)能力的影響
            2.3.4 劃痕及Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-4295 及其inhibitor對(duì)胃癌細(xì)胞遷移的影響
            2.3.5 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-4295 及其inhibitor對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲的影響
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第3章 miR-4295的潛在靶基因篩選
        3.1 引言
        3.2 材料與方法
            3.2.1 材料
            3.2.2 方法
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 miR-4295潛在靶基因的功能通路和蛋白分子互作(PPI)網(wǎng)絡(luò)關(guān)系
            3.3.2 通過TCGA數(shù)據(jù)庫GEPIA分析miR-4295 靶向hubgene在胃癌中的相關(guān)性分析
            3.3.3 通過TCGA數(shù)據(jù)庫GEPIA分析miR-4295 靶向hubgene與胃癌患者的生存分析
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第4章 miR-4295促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖和侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制
        4.1 引言
        4.2 材料與方法
            4.2.1 材料
            4.2.2 方法
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證miR-4295 分別與PTEN及BCL2L11基因的靶向調(diào)控關(guān)系
            4.3.2 q RT-PCR檢測(cè)靶基因m RNA及其下游基因m RNA表達(dá)水平的影響
            4.3.3 miR-4295對(duì)PTEN蛋白及其下游蛋白表達(dá)水平的影響
            4.3.4 miR-4295 聯(lián)合AKT抑制劑對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的影響
            4.3.5 miR-4295 聯(lián)合AKT抑制劑對(duì)胃癌細(xì)胞凋亡的影響
            4.3.6 miR-4295 聯(lián)合AKT抑制劑對(duì)胃癌細(xì)胞遷移的影響
            4.3.7 miR-4295 聯(lián)合AKT抑制劑對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲的影響
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
第二部分 lncRNA HOTAIR在胃癌中的表達(dá)及其功能研究
    第1章 lncRNA HOTAIR在胃癌細(xì)胞系和組織中的表達(dá)
        1.1 引言
        1.2 材料與方法
            1.2.1 材料
            1.2.2 方法
        1.3 結(jié)果
            1.3.1 細(xì)胞總RNA提取、質(zhì)量及完整性鑒定
            1.3.2 胃癌細(xì)胞中HOTAIR表達(dá)水平檢測(cè)
            1.3.3 HOTAIR在 TCGA數(shù)據(jù)庫胃癌組織中表達(dá)情況
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第2章 lncRNA HOTAIR對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移的影響
        2.1 引言
        2.2 材料與方法
            2.2.1 材料
            2.2.2 方法
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 qRT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞中HOTAIR的表達(dá)水平
            2.3.2 下調(diào)HOTAIR對(duì)胃癌細(xì)胞增殖活力、生長(zhǎng)能力的影響
            2.3.3 劃痕及Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HOTAIR對(duì)胃癌細(xì)胞遷移的影響
            2.3.4 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HOTAIR對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲的影響
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第3章 miR-4295與lncRNA HOTAIR相關(guān)性分析
        3.1 引言
        3.2 材料與方法
            3.2.1 材料
            3.2.2 方法
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證miR-4295與HOTAIR的結(jié)合情況
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間主要的研究成果
基金資助
致謝



本文編號(hào)：3769716