背景與目的:胃癌(gastric cancer,GC)是嚴重危害人類健康的常見惡性腫瘤,位于全球第三大癌癥死亡原因。胃癌具有發(fā)病隱匿和早期癥狀不明顯等特點,多數患者首診時疾病已進入進展期,且伴有淋巴結或遠處器官的轉移,這已成為胃癌防治的難點。因此,通過各種研究技術和手段深入研究胃癌發(fā)生、發(fā)展、轉移以及耐藥的分子機制,尋找早期診斷的分子標志物以及藥物靶標已迫在眉睫。最近的研究表明,非編碼RNAs參與了腫瘤轉移和惡性轉化的過程。MiR-4295是一個新發(fā)現(xiàn)的微小RNA(microRNA)分子,通過生物信息學分析,我們發(fā)現(xiàn)miR-4295與lncRNA HOTAIR存在結合位點。因此,我們的研究就從非編碼RNAs入手,研究微小RNA(miR-4295)和長鏈非編碼RNA(lncRNA HOTAIR)在胃癌生長增殖和侵襲遷移中的功能及其機制。第一部分miR-4295通過PTEN/PI3K/AKT通路調控胃癌生長和侵襲遷移的研究方法:本研究采用qRT-PCR檢測胃癌細胞系SGC-7901、MGC-803、BGC-823、MKN-28和人胃粘膜上皮細胞系GES-1中及胃癌組織中miR-4295的表...

【文章頁數】：197 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞簡表
前言
第一部分 miR-4295 通過PTEN/PI3K/AKT通路調控胃癌生長和侵襲遷移的研究
    第1章 miR-4295在胃癌細胞系和組織中的表達
        1.1 引言
        1.2 材料與方法
            1.2.1 材料
            1.2.2 方法
        1.3 結果
            1.3.1 細胞總RNA的提取、質量和完整性鑒定
            1.3.2 胃癌細胞中miR-4295表達水平檢測
            1.3.3 胃癌組織中miR-4295表達水平檢測
            1.3.4 miR-4295與胃癌臨床病理特征相關性
        1.4 討論
        1.5 小結
    第2章 miR-4295對胃癌細胞增殖、侵襲和遷移的影響
        2.1 引言
        2.2 材料與方法
            2.2.1 材料
            2.2.2 方法
        2.3 結果
            2.3.1 miR-4295陽性克隆的測序結果
            2.3.2 qRT-PCR檢測轉染胃癌細胞中miR-4295的表達水平
            2.3.3 miR-4295表達水平改變對胃癌細胞增殖活力、生長能力的影響
            2.3.4 劃痕及Transwell實驗檢測miR-4295 及其inhibitor對胃癌細胞遷移的影響
            2.3.5 Transwell實驗檢測miR-4295 及其inhibitor對胃癌細胞侵襲的影響
        2.4 討論
        2.5 小結
    第3章 miR-4295的潛在靶基因篩選
        3.1 引言
        3.2 材料與方法
            3.2.1 材料
            3.2.2 方法
        3.3 結果
            3.3.1 miR-4295潛在靶基因的功能通路和蛋白分子互作(PPI)網絡關系
            3.3.2 通過TCGA數據庫GEPIA分析miR-4295 靶向hubgene在胃癌中的相關性分析
            3.3.3 通過TCGA數據庫GEPIA分析miR-4295 靶向hubgene與胃癌患者的生存分析
        3.4 討論
        3.5 小結
    第4章 miR-4295促進胃癌細胞增殖和侵襲轉移的分子機制
        4.1 引言
        4.2 材料與方法
            4.2.1 材料
            4.2.2 方法
        4.3 結果
            4.3.1 雙熒光素酶報告系統(tǒng)驗證miR-4295 分別與PTEN及BCL2L11基因的靶向調控關系
            4.3.2 q RT-PCR檢測靶基因m RNA及其下游基因m RNA表達水平的影響
            4.3.3 miR-4295對PTEN蛋白及其下游蛋白表達水平的影響
            4.3.4 miR-4295 聯(lián)合AKT抑制劑對胃癌細胞增殖的影響
            4.3.5 miR-4295 聯(lián)合AKT抑制劑對胃癌細胞凋亡的影響
            4.3.6 miR-4295 聯(lián)合AKT抑制劑對胃癌細胞遷移的影響
            4.3.7 miR-4295 聯(lián)合AKT抑制劑對胃癌細胞侵襲的影響
        4.4 討論
        4.5 小結
第二部分 lncRNA HOTAIR在胃癌中的表達及其功能研究
    第1章 lncRNA HOTAIR在胃癌細胞系和組織中的表達
        1.1 引言
        1.2 材料與方法
            1.2.1 材料
            1.2.2 方法
        1.3 結果
            1.3.1 細胞總RNA提取、質量及完整性鑒定
            1.3.2 胃癌細胞中HOTAIR表達水平檢測
            1.3.3 HOTAIR在 TCGA數據庫胃癌組織中表達情況
        1.4 討論
        1.5 小結
    第2章 lncRNA HOTAIR對胃癌細胞增殖、侵襲和遷移的影響
        2.1 引言
        2.2 材料與方法
            2.2.1 材料
            2.2.2 方法
        2.3 結果
            2.3.1 qRT-PCR檢測轉染胃癌細胞中HOTAIR的表達水平
            2.3.2 下調HOTAIR對胃癌細胞增殖活力、生長能力的影響
            2.3.3 劃痕及Transwell實驗檢測HOTAIR對胃癌細胞遷移的影響
            2.3.4 Transwell實驗檢測HOTAIR對胃癌細胞侵襲的影響
        2.4 討論
        2.5 小結
    第3章 miR-4295與lncRNA HOTAIR相關性分析
        3.1 引言
        3.2 材料與方法
            3.2.1 材料
            3.2.2 方法
        3.3 結果
            3.3.1 雙熒光素酶報告系統(tǒng)驗證miR-4295與HOTAIR的結合情況
        3.4 討論
        3.5 小結
全文總結
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間主要的研究成果
基金資助
致謝



本文編號：3769716