研究背景腫瘤來(lái)源的外泌體能夠通過(guò)促進(jìn)腫瘤血管新生、誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞的分化、參與腫瘤微環(huán)境中的免疫調(diào)控促進(jìn)腫瘤的免疫逃逸、塑造未來(lái)轉(zhuǎn)移靶器官的微環(huán)境以實(shí)現(xiàn)自身轉(zhuǎn)移等多種方式,調(diào)控腫瘤微環(huán)境,進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。腫瘤血管生成是腫瘤微環(huán)境一個(gè)重要的特征,在腫瘤的進(jìn)展中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。然而腫瘤在發(fā)展過(guò)程中在促進(jìn)血管新生的同時(shí),也同時(shí)伴隨著原有及新生血管的破壞。外泌體如何破壞血管及其機(jī)制目前仍缺乏研究。實(shí)驗(yàn)?zāi)康谋緦?shí)驗(yàn)擬研究HeLa細(xì)胞來(lái)源的外泌體對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)的緊密連接蛋白_帶狀閉合蛋白1(Zona Occludens-1,ZO-1)及封閉蛋白5(Claudin-5,CLDN-5)蛋白表達(dá)水平的影響,并探討其背后的機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法使用超速離心法超離提純HeLa細(xì)胞分泌的外泌體,并使用二喹啉甲酸法(bicinchoninic acid,BCA)定量Hela細(xì)胞外泌體。采用電鏡、免疫印跡法(Western bloting,WB)及粒徑分析檢測(cè)外泌體的特性。分離培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),...

【文章頁(yè)數(shù)】：120 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
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縮略詞表
1 引言
2 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及人體組織標(biāo)本
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及耗材
    2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.4 RT-PCR引物列表
    2.5 一抗及二抗列表
3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)
    3.2 HELA細(xì)胞及人宮頸內(nèi)膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)及條件培養(yǎng)基獲取
    3.3 細(xì)胞外泌體提取
    3.4 外泌體電鏡鑒定
    3.5 外泌體PKH26染色及細(xì)胞內(nèi)吞
    3.6 細(xì)胞分組及處理
    3.7 細(xì)胞增殖能力檢測(cè)
    3.8 細(xì)胞成血管能力檢測(cè)
    3.9 免疫熒光染色
    3.10 蛋白印記
    3.11 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    3.12 內(nèi)皮細(xì)胞層通透性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
    3.13 腫瘤細(xì)胞穿透內(nèi)皮細(xì)胞層遷移實(shí)驗(yàn)
    3.14 經(jīng)外泌體作用后的HUVEC電鏡檢測(cè)
    3.15 外泌體在體內(nèi)對(duì)動(dòng)物血管通透性的檢測(cè)
    3.16 外泌體對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的檢測(cè)
    3.17 外泌體微小RNA(MIRNA)測(cè)序
    3.18 MIRNA測(cè)序結(jié)果數(shù)據(jù)分析
    3.19 受體HUVEC細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及分析
    3.20 小干擾RNA轉(zhuǎn)染
    3.21 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 分離培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)及鑒定
    4.2 外泌體的鑒定
    4.3 細(xì)胞對(duì)外泌體的內(nèi)吞實(shí)驗(yàn)
    4.4 EXO^HELA對(duì)HUVEC細(xì)胞增殖的影響
    4.5 EXO^HELA體外對(duì)HUVEC內(nèi)皮細(xì)胞層通透性的影響
    4.6 EXO^HELA對(duì)HUVEC細(xì)胞ZO-1及CLDN5蛋白及MRNA水平的影響
    4.7 EXO^HELA在動(dòng)物體內(nèi)增加血管的通透性
    4.8 EXO^HELA減少肺血管緊密連接蛋白水平
    4.9 EXO^HELA在動(dòng)物體內(nèi)促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移
    4.10 EXO^HELA經(jīng)TRITON X100透膜處理后的功能變化
    4.11 EXO^HELA的MIR測(cè)序結(jié)果
    4.12 抑制EXO^HELA的MIR成分并不改善HUVEC的緊密連接蛋白
    4.13 EXO^HELA誘發(fā)細(xì)胞自噬
    4.14 EXO^HELA不通過(guò)泛素化導(dǎo)致緊密連接蛋白降解
    4.15 受體HUVEC細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序
    4.16 EXO^HELA被HUVEC內(nèi)吞后部分可向內(nèi)質(zhì)網(wǎng)方向聚集
    4.17 EXO^HELA誘導(dǎo)HUVEC發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
    4.18 PERK敲減之后能夠改善內(nèi)皮細(xì)胞的緊密連接蛋白水平
5 討論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷及在讀期間所取得的科研成果



本文編號(hào)：3758141