生命早期是腸道微生物群正確建立的關(guān)鍵時期,腸道菌群的早期定植又直接影響著嬰兒免疫系統(tǒng)的發(fā)育和成熟,進(jìn)而對機(jī)體健康產(chǎn)生短期,中期甚至是長期的影響。在這一生命階段,母嬰垂直傳播在新生兒腸道微生物初始定植中發(fā)揮關(guān)鍵作用,而在眾多傳播途徑中:羊水、陰道、空腔、皮膚、母乳等,尤以母乳喂養(yǎng)最為主要。乳酸菌,作為人體腸道菌群中一類重要的益生菌,與宿主的健康密切相關(guān):某些特定的菌株已被證明具有免疫調(diào)節(jié)、緩解氧化應(yīng)激、抑制炎癥性腸病等功能,并且有報道認(rèn)為:機(jī)體和腸道微生物之間具有特異性的相互選擇關(guān)系:當(dāng)菌株的來源和其應(yīng)用到對象保持一致時,就會顯著增強(qiáng)菌株對機(jī)體益生功能的特異性和有效性,即:最理想的益生菌最好是來源于人體本身。本研究采集純母乳喂養(yǎng)嬰兒新鮮糞便,從中分離出一系列乳酸菌株,并以抗人工消化液能力、耐膽鹽能力、黏附能力等為指標(biāo),篩選出一株具有潛在益生功能的乳酸菌,通過對其16S rRNA進(jìn)行測序并結(jié)合生理生化試驗結(jié)果初步確定為植物乳桿菌,命名BF₁5,同時通過體外試驗對該菌株的安全性(抗生素敏感性、有害代謝產(chǎn)物、溶血性等)及益生功能(免疫調(diào)節(jié)、抗氧化能力)進(jìn)行了初步評估;進(jìn)一...

【文章頁數(shù)】：158 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1 文獻(xiàn)綜述
        1.1 母乳嬰兒源益生菌
            1.1.1 通過母乳喂養(yǎng)母親腸道菌群在母親-新生兒之間的垂直轉(zhuǎn)移
            1.1.2 益生菌與嬰兒健康
            1.1.3 母乳嬰兒源益生菌的國內(nèi)外研究進(jìn)展
        1.2 益生菌與腸道性疾病:潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)
            1.2.1 腸道穩(wěn)態(tài)維持免疫機(jī)制
            1.2.2 炎癥性腸病中腸道菌群與宿主免疫反應(yīng)的影響因素
            1.2.3 針對IBD腸道菌群的潛在治療方案
            1.2.4 益生菌對潰瘍性結(jié)腸炎的保護(hù)機(jī)制
            1.2.5 組學(xué)在炎癥性腸病中的應(yīng)用
            1.2.6 益生菌緩解潰瘍性結(jié)腸炎及其作用機(jī)制的國內(nèi)外研究進(jìn)展
    2 本研究的目的意義、研究內(nèi)容及技術(shù)路線
        2.1 研究的目的及意義
        2.2 研究內(nèi)容
        2.3 技術(shù)路線
    3 本研究預(yù)期創(chuàng)新點
第二章 母乳嬰兒源益生菌的篩選及初步評價
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
            1.1.1 樣品來源及采集標(biāo)準(zhǔn)
            1.1.2 菌株來源
            1.1.3 主要試劑
            1.1.4 主要儀器與設(shè)備
            1.1.5 主要培養(yǎng)基的配制
        1.2 試驗方法
            1.2.1 樣本采集
            1.2.2 乳酸菌的分離、純化及保藏
            1.2.3 具有潛在益生特性乳酸菌的篩選
            1.2.4 菌株的鑒定
            1.2.5 菌株體外安全性評價
            1.2.6 菌株體外益生特性評價
        1.3 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果與分析
        2.1 菌株的篩選
            2.1.1 耐酸菌株的篩選
            2.1.2 菌株對人工消化液耐受性
            2.1.3 菌株對膽鹽的耐受性
            2.1.4 菌株對Caco-2細(xì)胞的黏附性能
        2.2 菌株BF₁5的鑒定
            2.2.1 BF₁5的菌落、菌體形態(tài)及生理生化特性
            2.2.2 BF₁5的16S rRNA基因序列分析
        2.3 菌株BF₁5的安全性評價
            2.3.1 藥敏試驗
            2.3.2 質(zhì)粒驗證
            2.3.3 有害代謝產(chǎn)物
            2.3.4 溶血試驗
        2.4 菌株BF₁5體外益生功能評價
            2.4.1 BF₁5體外對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖作用的影響
            2.4.2 菌株H₂O₂耐受能力
            2.4.3 BF₁5體外抗氧化能力評價
    3 討論
        3.1 益生菌的初篩及鑒定
        3.2 菌株BF₁5的體外安全性評價
        3.3 菌株BF₁5的體外益生功能評價
>            3.3.1 BF₁5體外免疫調(diào)節(jié)能力_</li>
            3.3.2 BF₁5體外抗氧化能力
    本章小結(jié)
第三章 母乳嬰兒源益生菌:植物乳桿菌BF₁5通過調(diào)節(jié)腸道菌群緩解環(huán)磷酰胺誘發(fā)免疫抑制的研究
    第一節(jié) 植物乳桿菌BF₁5在小鼠體內(nèi)的定植能力研究
        1 材料與方法
            1.1 試驗材料
                1.1.1 菌株來源
                1.1.2 試劑及工具酶
                1.1.3 主要儀器與設(shè)備
                1.1.4 試驗動物
            1.2 試驗方法
                1.2.1 菌懸液的制備
                1.2.2 小鼠的飼養(yǎng)及分組
                1.2.3 基因組DNA提取
                1.2.4 細(xì)菌rpo B可變區(qū)的PCR擴(kuò)增
                1.2.5 BF₁5腸道定植的檢測
        2 結(jié)果與分析
            2.1 樣品基因組提取及基于rpo B特異性引物的PCR擴(kuò)增
            2.2 BF₁5在小鼠腸道定植情況的DGGE電泳圖譜分析
        3 討論
    第二節(jié) 植物乳桿菌BF₁5通過調(diào)節(jié)腸道菌群緩解環(huán)磷酰胺誘發(fā)的小鼠免疫抑制的研究
        1 材料與方法
            1.1 試驗材料
                1.1.1 菌株來源
                1.1.2 主要試劑
                1.1.3 主要儀器與設(shè)備
                1.1.4 試驗動物
            1.2 試驗方法
                1.2.1 BF₁5對免疫抑制小鼠的調(diào)節(jié)功能測定
                1.2.2 BF₁5對免疫抑制小鼠腸道菌群影響的測定
            1.3 數(shù)據(jù)處理
        2 結(jié)果與分析
            2.1 BF₁5對免疫抑制小鼠免疫功能的影響
            2.2 BF₁5對免疫抑制小鼠腸道菌群的影響
                2.2.1 不同處理組樣本提取基因組的質(zhì)量評估
                2.2.2 不同處理組樣本高通量測序質(zhì)量評估
                2.2.3 不同處理組樣本腸道菌群分布情況
                2.2.4 不同處理組樣本腸道菌群結(jié)構(gòu)組成
                2.2.5 基于picmst 16S測序的腸道菌群功能預(yù)測
        3 討論
            3.1 BF₁5對免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)能力
            3.2 BF₁5對免疫抑制小鼠腸道菌群的影響
                3.2.1 對免疫抑制小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)組成的影響
                3.2.2 對腸道微生物群落功能的影響
    本章小結(jié)
第四章 母乳嬰兒源益生菌:植物乳桿菌BF₁5干預(yù)炎癥性腸病及其作用機(jī)理研究
    第一節(jié) 植物乳桿菌BF₁5緩解DSS誘導(dǎo)小鼠潰瘍性結(jié)腸炎的效應(yīng)評價
        1 材料與方法
            1.1 材料與試劑
                1.1.1 菌株
                1.1.2 主要試劑
                1.1.3 主要儀器與設(shè)備
                1.1.4 試驗動物
            1.2 試驗方法
                1.2.1 動物模型的優(yōu)化
                1.2.2 BF₁5緩解DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎癥能力的測定
            1.3 數(shù)據(jù)處理
        2 結(jié)果與分析
            2.1 動物模型的優(yōu)化
                2.1.1 DAI評分
                2.1.2 結(jié)腸長度及組織學(xué)損傷的評估
                2.1.3 考馬斯亮藍(lán)法測定樣品蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線
                2.1.4 氧化應(yīng)激及能量代謝指標(biāo)
                2.1.5 血清中炎癥因子及sIgA含量的測定
                2.1.6 兩組UC模型各指標(biāo)數(shù)據(jù)離散度比較
            2.2 BF₁5對DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎癥的緩解作用
                2.2.1 DAI評分
                2.2.2 小鼠結(jié)腸長度及組織學(xué)損傷評價
                2.2.3 氧化應(yīng)激及能量代謝指標(biāo)的評價
                2.2.4 炎癥因子及sIgA含量的評價
        3 討論
            3.1 DSS誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎模型的優(yōu)化
            3.2 BF₁5緩解DSS誘導(dǎo)UC
                3.2.1 BF₁5對UC小鼠及結(jié)腸炎癥的緩解
                3.2.2 BF₁5對UC小鼠結(jié)腸氧化損傷及能量代謝障礙的影響
                3.2.3 BF₁5對UC小鼠免疫功能的影響
    第二節(jié) 植物乳桿菌BF₁5對DSS誘導(dǎo)小鼠腸道菌群紊亂調(diào)節(jié)的研究
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 主要試劑與儀器
                1.1.2 試驗動物
            1.2 方法
                1.2.1 菌懸液的制備
                1.2.2 動物分組
                1.2.3 糞便樣品采集
                1.2.4 高通量測序試驗流程
                1.2.5 生物信息學(xué)分析及數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)處理
        2 結(jié)果與分析
            2.1 不同處理組樣本基因組質(zhì)量評估
            2.2 不同處理組樣本高通量測序質(zhì)量評估
            2.3 不同處理組腸道菌群分布情況
            2.4 不同處理組小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)組成
            2.5 基于picmst 16s測序的腸道菌群功能預(yù)測
        3 討論
            3.1 BF₁5對腸道微生物群落結(jié)構(gòu)的影響
            3.2 BF₁5對腸道微生物群落功能的影響
    第三節(jié) 基于蛋白質(zhì)組學(xué)解析植物乳桿菌BF₁5通過調(diào)節(jié)腸道菌群緩解潰瘍性結(jié)腸炎的作用機(jī)制研究
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 主要試劑與儀器
                1.1.2 試驗動物
            1.2 方法
                1.2.1 菌懸液的制備
                1.2.2 動物分組
                1.2.3 結(jié)腸組織的采集
                1.2.4 不同處理組樣本差異表達(dá)蛋白測序流程
                1.2.5 蛋白質(zhì)組學(xué)的生物信息學(xué)分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 蛋白定量及質(zhì)量檢測
            2.2 差異蛋白的鑒定與定量
            2.3 差異表達(dá)蛋白主成分分析
            2.4 結(jié)腸組織中UC差異表達(dá)蛋白的生物信息學(xué)分析
                2.4.1 GO注釋與GO富集分析
                2.4.2 KEGG注釋與KEGG富集分析
            2.5 結(jié)腸組織中益生菌(BF₁5/LGG)干預(yù)UC差異表達(dá)蛋白的生物信息學(xué)分析
                2.5.1 益生菌(BF₁5/LGG)干預(yù)UC差異表達(dá)蛋白的GO注釋
                2.5.2 益生菌(BF₁5/LGG)干預(yù)UC差異表達(dá)蛋白的GO富集
                2.5.3 益生菌(BF₁5/LGG)干預(yù)UC差異表達(dá)蛋白KEGG注釋富集分析
            2.6 UC和益生菌(BF₁5/LGG)干預(yù)UC小鼠的結(jié)腸蛋白質(zhì)組學(xué)聯(lián)合分析
                2.6.1 結(jié)腸組織中UC和益生菌(BF₁5/LGG)干預(yù)UC差異表達(dá)蛋白聯(lián)合分析
                2.6.2 結(jié)腸組織中UC與益生菌(BF₁5/LGG)干預(yù)UC差異表達(dá)蛋白KEGG富集通路聯(lián)合分析
        3 討論
            3.1 益生菌(BF₁5/LGG)干預(yù)UC直接回調(diào)蛋白
            3.2 益生菌(BF₁5/LGG)干預(yù)UC直接作用的信號通路:抗原的加工與提呈
    本章小結(jié)
第五章 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
在校期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文
作者簡介
致謝



本文編號：3757858