背景:�；视图っ窤GK位于人類染色體7q34區(qū)域,是一個(gè)多功能的脂質(zhì)激酶,通過(guò)催化�；视土姿峄a(chǎn)生溶血磷脂酸(LPA),從而參與到人體眾多生物學(xué)過(guò)程中。最近多項(xiàng)證據(jù)表明,AGK表達(dá)失調(diào)與各種人類癌癥的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。本課題研究了AGK對(duì)胃癌細(xì)胞增殖和癌變的影響,并深入研究了其中的分子作用機(jī)制。方法:采用免疫組織化學(xué)和蛋白質(zhì)印跡分析檢測(cè)了胃癌細(xì)胞系和胃癌組織中的AGK表達(dá)情況;基于免疫組化的結(jié)果分析了AGK表達(dá)水平與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系。通過(guò)檢測(cè)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)變標(biāo)志物以及CCK-8,集落形成,transwell侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)以及異種移植模型明確AGK在胃癌中的生物學(xué)功能。之后,在胃癌細(xì)胞和組織中分析AGK和YAP1之間的相關(guān)性,并通過(guò)熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn),染色質(zhì)免疫共沉淀,免疫熒光和qRT-PCR等實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究?jī)烧咧g的相互作用機(jī)制。結(jié)果:免疫組化和western blot實(shí)驗(yàn)均顯示AGK的表達(dá)在胃癌細(xì)胞系和組織樣品中上調(diào),高表達(dá)AGK蛋白與胃癌患者組織分化不佳(P=0.009)并且與胃癌患者預(yù)后不良密切相關(guān)。過(guò)表達(dá)AGK能促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖、侵襲能力和上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)變標(biāo)志物...

【文章頁(yè)數(shù)】：116 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
前言
第一部分 AGK在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義
    1.引言
    2.材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.結(jié)果
        3.1 AGK在胃癌中表達(dá)水平改變的分析
        3.2 AGK在胃癌及癌旁組織中蛋白表達(dá)水平的差異
        3.3 胃癌組織中AGK的表達(dá)水平與患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系
        3.4 胃癌組織中AGK高表達(dá)患者預(yù)后不佳
    4.討論
    5.結(jié)論
第二部分 AGK對(duì)人胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的研究
    1.引言
    2.材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.結(jié)果
        3.1 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染效率檢驗(yàn)
        3.2 AGK促進(jìn)胃癌細(xì)胞惡性增殖
        3.3 AGK促進(jìn)胃癌細(xì)胞侵襲和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)
        3.4 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)干擾AGK的表達(dá)對(duì)瘤體生長(zhǎng)及Hippo-YAP通路的影響
    4.討論
    5.結(jié)論
第三部分 AGK與 YAP1 之間關(guān)系及相互作用機(jī)制探討
    1.引言
    2.材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.結(jié)果
        3.1 AGK與 YAP1 蛋白表達(dá)呈正相關(guān)
        3.2 YAP1 正向調(diào)控AGK的表達(dá)
        3.3 AGK是 YAP1/TEADs下游轉(zhuǎn)錄靶基因
        3.4 YAP1/TEADs通過(guò)TEAD結(jié)合位點(diǎn)1(TRE1)與AGK啟動(dòng)子結(jié)合
        3.5 AGK抑制Hippo-YAP1 信號(hào)通路提高TEADs轉(zhuǎn)錄活性
        3.6 AGK過(guò)表達(dá)能縮短LATS1/2 蛋白的半衰期
    4.討論
    5.結(jié)論
全文總結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的主要成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3754389