研究目的探討白藜蘆醇及其與順鉑聯(lián)用通過EMT途徑抑制乳腺癌轉(zhuǎn)移作用效果及其作用機制。研究方法(1)選取裸鼠進行人乳腺癌細胞異種移植瘤模型,觀察白藜蘆醇、順鉑及兩者聯(lián)用后裸鼠瘤體重量和體重的變化;肺組織切片HE染色觀察裸鼠腫瘤肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)的變化;試劑盒賴式法和微板法檢測實驗動物血清中AST、ALT、Cr、BUN的變化;Westrn blot法觀察腫瘤組織轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白表達;(2)體外實驗采用人乳腺癌MDA-MB-231、MDA-MB-436、MDA-MB-453、BT-549細胞模型;TGF-β1誘導(dǎo)乳腺癌細胞株MDA-MB-231細胞EMT模型。白藜蘆醇及其與順鉑聯(lián)用對細胞活力的影響用MTS法檢測;用藥后MDA-MB-231細胞遷移能力的變化用細胞劃痕實驗檢測;用藥后細胞遷移力和侵襲力的變化用Transwell小室檢測;藥物對EMT標志性蛋白及EMT相關(guān)通路蛋白表達的影響用Western blot法檢測;EMT標志物表達通過免疫熒光實驗觀察。研究結(jié)果(1)白藜蘆醇100 mg/kg與模型組相比能夠明顯抑制人乳腺癌MDA-MB-231細胞異種移植瘤裸鼠體內(nèi)腫瘤的生長和肺轉(zhuǎn)移,用藥組腫瘤重量和...

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學位級別】：博士

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摘要
Abstract
引言
    1 中醫(yī)藥及中西藥配伍治療乳腺癌、防治乳腺癌轉(zhuǎn)移的意義
    2 藥物聯(lián)用(配伍)的中醫(yī)藥理論依據(jù)
    3 中醫(yī)藥及中西藥聯(lián)用治療乳腺癌、防治乳腺癌轉(zhuǎn)移的可行性
    4 體內(nèi)、體外模型為實驗研究提供了工具
    5 防治三陰性乳腺癌(Triple-negative breast cancer-TNBC)轉(zhuǎn)移的重要意義
    6 白藜蘆醇在乳腺癌防治和治療中的潛力
    7 順鉑在乳腺癌治療中的重要性和局限性
    8 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化在乳腺癌轉(zhuǎn)移中的重要意義
第一部分 白藜蘆醇抑制乳腺癌細胞發(fā)生EMT并抑制乳腺癌細胞生長和轉(zhuǎn)移
    1 研究目的
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和實驗藥物
        2.2 實驗藥物和主要溶液配制
        2.3 主要儀器
        2.4 細胞培養(yǎng)
        2.5 實驗動物分組與用藥
        2.6 人乳腺癌異種移植瘤裸鼠模型的制備
        2.7 標本采集
        2.8 藥物抑瘤率計算
        2.9 裸鼠肺轉(zhuǎn)移組織H&E染色
        2.10 血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)檢測(微板法)
        2.11 血清中肌酐(CRE)檢測(肌氨酸氧化酶法)
        2.12 血清中尿素氮(BUN)檢測(脲酶法)
        2.13 MTS實驗
        2.14 細胞體外遷移實驗
        2.15 Western blot 實驗
        2.16 免疫熒光實驗
        2.17 統(tǒng)計學處理
    3 實驗結(jié)果
        3.1 白藜蘆醇對體外人乳腺癌細胞增殖和遷移的抑制作用
            3.1.1 白藜蘆醇對MDA-M-231、MDA-MB-436、MDA-MB-453、BT-549 細胞產(chǎn)生抑制作用的效應(yīng)濃度
            3.1.2 白藜蘆醇對MDA-MB-231、MDA-MB-436、MDA-MB-453、BT-549 細胞遷移能力的影響
        3.2 白藜蘆醇對TGF-β1 誘導(dǎo)的MDA-MB-231 細胞EMT的影響
            3.2.1 白藜蘆醇對TGF-β1 誘導(dǎo)發(fā)生EMT的MDA-MB-231 細胞形態(tài)的影響
            3.2.2 白藜蘆醇對TGF-β1 誘導(dǎo)發(fā)生EMT的MDA-MB-231 細胞遷移的影響
            3.2.3 白藜蘆醇對TGF-β1 誘導(dǎo)的乳腺癌細胞上皮和間質(zhì)標記蛋白表達的影響
            3.2.4 白藜蘆醇逆轉(zhuǎn)TGF-β1 誘導(dǎo)的MDA-MB-231 細胞EMT的作用機制
        3.3 白藜蘆醇對MDA-MB-231 異種移植瘤裸鼠體內(nèi)腫瘤生長和肺轉(zhuǎn)移的抑制作用
            3.3.1白藜蘆醇對MDA-MB-231異種移植瘤裸鼠體內(nèi)腫瘤重量的影響
            3.3.2白藜蘆醇對MDA-MB-231異種移植瘤裸鼠體內(nèi)腫瘤肺部轉(zhuǎn)移的影響
            3.3.3 白藜蘆醇影響裸鼠體重的變化
            3.3.4 白藜蘆醇對裸鼠肝腎功能的影響
    4 討論
        4.1 白藜蘆醇逆轉(zhuǎn)乳腺癌細胞發(fā)生EMT,并抑制乳腺癌生長和轉(zhuǎn)移的作用效應(yīng)
        4.2 白藜蘆醇抑制乳腺癌生長和轉(zhuǎn)移的效應(yīng)體現(xiàn)于其抑制體外人乳腺癌細胞增殖和遷移
        4.3 白藜蘆醇逆轉(zhuǎn)乳腺癌細胞發(fā)生EMT的效應(yīng)體現(xiàn)于其逆轉(zhuǎn)體外人乳腺癌細胞形態(tài)變化和抑制細胞遷移
        4.4 白藜蘆醇抑制乳腺癌生長和轉(zhuǎn)移的效應(yīng)體現(xiàn)于其抑制人乳腺癌異種移植瘤裸鼠體內(nèi)腫瘤生長和肺轉(zhuǎn)移
        4.5 白藜蘆醇通過逆轉(zhuǎn)乳腺癌細胞發(fā)生EMT,抑制乳腺癌轉(zhuǎn)移的作用機制在于調(diào)節(jié)PI3K/AKT、Smad、MMPs的表達
    5 小結(jié)
第二部分 白藜蘆醇與順鉑聯(lián)用抑制乳腺癌細胞發(fā)生EMT并抑制乳腺癌細胞轉(zhuǎn)移
    1 研究目的
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和實驗藥物
        2.2 實驗藥物和主要溶液配制
        2.3 主要儀器
        2.4 細胞培養(yǎng)
        2.5 實驗動物分組與用藥
        2.6 人乳腺癌異種移植瘤裸鼠模型的制備、樣本采集、藥物抑瘤率計算方法
        2.7 MTS實驗
        2.8 細胞體外遷移實驗
        2.9 細胞侵襲實驗
        2.10 細胞劃痕實驗
        2.11 免疫熒光實驗
        2.12 Western blot實驗
        2.13 藥物聯(lián)用應(yīng)用效果分析
        2.14 統(tǒng)計學處理
    3 實驗結(jié)果
        3.1 白藜蘆醇與順鉑聯(lián)用對MDA-MB-231 異種移植瘤裸鼠體內(nèi)腫瘤生長的抑制作用及作用機制
            3.1.1 白藜蘆醇與順鉑聯(lián)用對MDA-MB-231 異種移植瘤裸鼠體內(nèi)腫瘤生長的影響
            3.1.2 白藜蘆醇與順鉑聯(lián)用對裸鼠體重的影響
            3.1.3 白藜蘆醇與順鉑聯(lián)用對裸鼠肝腎功能的影響
            3.1.4 白藜蘆醇與順鉑聯(lián)用抑制裸鼠原位移植瘤生長的作用機制
        3.2 白藜蘆醇與順鉑聯(lián)用對體外人乳腺癌細胞侵襲和遷移的抑制作用及其作用機制
            3.2.1 白藜蘆醇、順鉑分別對MDA-MB-231 細胞產(chǎn)生抑制作用的效應(yīng)濃度
            3.2.2 白藜蘆醇與順鉑聯(lián)用對MDA-MB-231 細胞增殖產(chǎn)生協(xié)同作用的藥物濃度
            3.2.3 白藜蘆醇與順鉑聯(lián)用對MDA-MB-231 細胞運動能力的影響
            3.2.4 白藜蘆醇與順鉑聯(lián)用對MDA-MB-231 細胞遷移能力的影響
            3.2.5 白藜蘆醇與順鉑聯(lián)用對MDA-MB-231 細胞侵襲能力的影響
        3.3 白藜蘆醇與順鉑聯(lián)用對TGF-β1 誘導(dǎo)的MDA-MB-231 細胞EMT的影響
            3.3.1 白藜蘆醇與順鉑聯(lián)用對TGF-β1 誘導(dǎo)的乳腺癌細胞上皮和間質(zhì)標記蛋白表達的作用
            3.3.2 白藜蘆醇與順鉑聯(lián)用逆轉(zhuǎn)TGF-β1 誘導(dǎo)的乳腺癌細胞EMT的作用機制
    4 討論
        4.1 白藜蘆醇與順鉑聯(lián)用抑制乳腺癌異種移植瘤生長,減輕順鉑毒副作用
        4.2 白藜蘆醇與順鉑聯(lián)用抑制體外人乳腺癌細胞增殖和轉(zhuǎn)移
        4.3 白藜蘆醇與順鉑聯(lián)用抑制乳腺癌增殖和轉(zhuǎn)移的作用機制在于調(diào)節(jié)PI3K/AKT、Smad、NF-κB、JNK、ERK的表達
    5 小結(jié)
綜合討論
    1 抑制三陰性乳腺癌轉(zhuǎn)移的意義
    2 中醫(yī)藥理論為藥物聯(lián)用提供依據(jù)
    3 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用
    4 本研究的不足之處及展望
創(chuàng)新性
結(jié)語
致謝
參考文獻
附錄一:文獻綜述
    參考文獻
附錄二:博士期間研究成果
附錄三:已發(fā)表文章



本文編號：3751179