目的:觀察肝臟自然殺傷細(xì)胞在乙肝肝硬化及肝癌臨床肝組織樣本中的表型變化特點(diǎn),尋找乙肝肝硬化及肝癌中肝內(nèi)NK細(xì)胞的相關(guān)病理分子;體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)比較分析中藥扶正化瘀方聯(lián)合抗病毒藥物恩替卡韋對(duì)乙肝背景肝纖維化小鼠肝臟自然殺傷細(xì)胞的免疫調(diào)控作用,進(jìn)一步體內(nèi)清除NK細(xì)胞后,觀察聯(lián)合用藥方案對(duì)抗乙肝背景肝纖維化藥效的影響;體外探討說(shuō)明中藥扶正化瘀方通過(guò)提高NK細(xì)胞對(duì)HSC的識(shí)別殺傷活性,抑制HSC活化的抗肝纖維化的免疫調(diào)控機(jī)制。本論文分為四個(gè)部分。方法:1、收集2017年11月至2018年10月期間在上海交通大學(xué)附屬仁濟(jì)醫(yī)院肝移植中心行外科手術(shù)住院患者的肝組織樣本以及術(shù)前臨床基線資料,HE及天狼猩紅病理染色觀察肝組織炎癥及纖維化程度,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各肝組織樣本中NK細(xì)胞的數(shù)量、亞型以及表面激活型受體NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46的表達(dá),Pearson相關(guān)性分析探索NK細(xì)胞數(shù)量、亞型及表面激活型受體的表達(dá)與相應(yīng)臨床基線資料實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)之間的相關(guān)性,以及其與肝纖維化天狼猩紅染色面積參數(shù)的相關(guān)性,通過(guò)免疫組化雙重染色技術(shù)對(duì)激活型NK細(xì)胞與活化HSC進(jìn)行共定位,觀察不同組別的共表達(dá)差異。2...

【文章頁(yè)數(shù)】：132 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
主要縮略語(yǔ)
中文摘要
ABSTRACT
引言
第一部分 肝臟自然殺傷細(xì)胞在乙肝肝硬化及肝癌組織中的表型變化特點(diǎn)
    1 研究對(duì)象
        1.1 病例來(lái)源
        1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)
        1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)
        1.4 分組
    2 觀察指標(biāo)
        2.1 實(shí)驗(yàn)室檢查
        2.2 肝組織病理檢查
        2.3 肝內(nèi)NK細(xì)胞亞型及激活型受體檢測(cè)
    3 材料
        3.1 主要試劑
        3.2 主要儀器設(shè)備
    4 方法
        4.1 組織樣本的處理
        4.2 肝組織病理染色
        4.3 肝內(nèi)NK細(xì)胞亞型及表面激活型受體檢測(cè)
        4.4 石蠟切片免疫組化雙重染色
        4.5 統(tǒng)計(jì)分析
    5 結(jié)果
        5.1 基本資料
        5.2 肝組織病理學(xué)觀察
        5.3 肝內(nèi)NK細(xì)胞亞型及表面激活型受體的表達(dá)特點(diǎn)
        5.4 肝內(nèi)NK細(xì)胞數(shù)量、亞型與臨床基本資料的相關(guān)性分析
        5.5 肝內(nèi)NK細(xì)胞表面激活型受體與臨床基本資料的相關(guān)性分析
        5.6 肝內(nèi)NK細(xì)胞表面激活型受體NKG2D的表達(dá)與纖維化面積相關(guān)性分析
        5.7 肝組織免疫組化雙重染色觀察肝內(nèi)NK細(xì)胞與活化肝星狀細(xì)胞的關(guān)系
    6 分析與討論
第二部分 扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋對(duì)乙肝背景肝纖維化小鼠肝臟自然殺傷細(xì)胞的免疫調(diào)控作用
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 藥物
        1.3 試劑
        1.4 主要儀器設(shè)備
    2 方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)分組、造模及藥物干預(yù)
        2.2 樣品的采集與處理
        2.3 血清病毒學(xué)檢測(cè)
        2.4 血清肝功能檢測(cè)
        2.5 肝組織病理染色
        2.6 肝組織羥脯氨酸含量測(cè)定
        2.7 石蠟切片免疫組化染色
        2.8 Western Blot蛋白免疫印跡雜交
        2.9 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面分子
        2.10 肝組織免疫熒光
        2.11 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋對(duì)乙肝背景肝纖維化小鼠體重及臟器指數(shù)的影響
        3.2 扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋對(duì)乙肝背景肝纖維化小鼠病毒學(xué)指標(biāo)的影響
        3.3 扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋對(duì)乙肝背景肝纖維化小鼠血清肝功能的影響
        3.4 扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋對(duì)乙肝背景肝纖維化小鼠肝組織炎癥病理的影響
        3.5 扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋對(duì)乙肝背景肝纖維化小鼠肝組織膠原沉積的影響
        3.6 扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋對(duì)乙肝背景肝纖維化小鼠肝組織羥脯氨酸含量的影響
        3.7 扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋對(duì)乙肝背景肝纖維化小鼠肝組織α-SMA及I型膠原表達(dá)的影響
        3.8 扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋對(duì)乙肝背景肝纖維化小鼠肝內(nèi)淋巴細(xì)胞分群的影響
        3.9 扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋對(duì)乙肝背景肝纖維化小鼠肝內(nèi)NK細(xì)胞表面激活型受體NKG2D表達(dá)的影響
        3.10 扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋對(duì)乙肝背景肝纖維化小鼠肝組織RAE-1和Desmin表達(dá)的影響
        3.11 扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋對(duì)乙肝背景肝纖維化小鼠肝組織RAE-1和α-SMA表達(dá)的影響
    4 分析與討論
第三部分 體內(nèi)清除自然殺傷細(xì)胞對(duì)扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋抗乙肝背景小鼠肝纖維化藥效的影響
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 藥物
        1.3 主要試劑及儀器設(shè)備
    2 方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)分組、造模及藥物干預(yù)
        2.2 樣品的采集與處理
        2.3 血清病毒學(xué)及肝功能生化檢測(cè)
        2.4 肝組織病理染色
        2.5 肝組織羥脯氨酸含量測(cè)定
        2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面分子
        2.7 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 體內(nèi)清除自然殺傷細(xì)胞后扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋對(duì)乙肝背景肝纖維化小鼠體重及臟器指數(shù)的影響
        3.2 扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋對(duì)Anti-ASGM1清除乙肝背景肝纖維化小鼠肝內(nèi)NK細(xì)胞的拮抗作用
        3.3 體內(nèi)清除自然殺傷細(xì)胞后扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋對(duì)乙肝背景肝纖維化小鼠血清病毒學(xué)指標(biāo)的影響
        3.4 體內(nèi)清除自然殺傷細(xì)胞后扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋對(duì)乙肝背景肝纖維化小鼠血清肝功能的影響
        3.5 體內(nèi)清除自然殺傷細(xì)胞后扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋對(duì)乙肝背景肝纖維化小鼠肝組織炎癥病理的影響
        3.6 體內(nèi)清除自然殺傷細(xì)胞后扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋對(duì)乙肝背景肝纖維化小鼠肝組織膠原沉積的影響
        3.7 體內(nèi)清除自然殺傷細(xì)胞后扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋對(duì)乙肝背景肝纖維化小鼠肝組織羥脯氨酸含量的影響
        3.8 Anti-ASGM1清除乙肝背景肝纖維化小鼠肝內(nèi)NK細(xì)胞后肝內(nèi)主要淋巴細(xì)胞亞群的變化及扶正化瘀方聯(lián)合恩替卡韋的干預(yù)作用
    4 分析與討論
第四部分 扶正化瘀方體外調(diào)節(jié)自然殺傷細(xì)胞功能的抗肝纖維化作用機(jī)制
    1 材料
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 藥物
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器設(shè)備
    2 方法
        2.1 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)與凍存
        2.2 藥物配制
        2.3 藥物對(duì)細(xì)胞的毒性測(cè)定
        2.4 Annexin V/7-AAD復(fù)染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.5 熒光定量PCR檢測(cè)mRNA表達(dá)
        2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面分子
        2.7 ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子分泌水平
        2.8 NK92與CFSE-K562細(xì)胞共培養(yǎng)殺傷體系的建立及藥物評(píng)價(jià)
        2.9 藥物預(yù)孵育的NK92與LX-2共培養(yǎng)
        2.10 細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)
        2.11 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 扶正化瘀方對(duì)NK92細(xì)胞株和LX-2細(xì)胞株的毒性測(cè)定
        3.2 扶正化瘀方對(duì)NK92細(xì)胞株凋亡的影響
        3.3 扶正化瘀方對(duì)NK92細(xì)胞表面激活型受體表達(dá)的影響
        3.4 扶正化瘀方對(duì)NK92細(xì)胞分泌IFN-γ和Granzyme B水平的影響
        3.5 扶正化瘀方對(duì)NK92細(xì)胞株殺傷K562功能的影響
        3.6 扶正化瘀方預(yù)孵育的NK92與LX-2共培養(yǎng)后NK92細(xì)胞表面激活型受體NKG2D的表達(dá)變化
        3.7 扶正化瘀方預(yù)孵育的NK92與LX-2共培養(yǎng)后LX-2細(xì)胞表面配體RAE-1的表達(dá)變化
        3.8 扶正化瘀方預(yù)孵育的NK92與LX-2共培養(yǎng)后LX-2細(xì)胞活化情況
    4 分析與討論
創(chuàng)新點(diǎn)
結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄1 :文獻(xiàn)綜述 基于肝臟免疫微環(huán)境探討中西醫(yī)結(jié)合有效逆轉(zhuǎn)乙肝肝纖維化的目標(biāo)人群特征和作用機(jī)制
        參考文獻(xiàn)
    附錄2 :在校期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文
        在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文1(首頁(yè))
        在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文2(首頁(yè))
        在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文3(首頁(yè))
        在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文4(首頁(yè))
        在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文5(摘要)
        在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文6(Abstract)
        在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文7(Abstract)
    附錄3 :參加學(xué)術(shù)會(huì)議及獲獎(jiǎng)情況



本文編號(hào)：3749779