第一部分UPEC誘導(dǎo)大鼠睪丸巨噬細(xì)胞分泌PK2【目的】探究PK2在UPEC誘導(dǎo)的睪丸炎中,在巨噬細(xì)胞上的定位及表達(dá)情況。【方法】構(gòu)建UPEC大鼠睪丸炎模型:將細(xì)菌懸液由雙側(cè)輸精管逆行注射,同時(shí)用相同方法注入等體積的生理鹽水設(shè)置對照組。各組大鼠建模7天后,對睪丸進(jìn)行UPEC基因Pap C及菌落鑒定以確認(rèn)建模是否成功。電鏡檢測UPEC在睪丸中的定位情況。分離睪丸巨噬細(xì)胞,對細(xì)胞內(nèi)PK2的表達(dá)情況進(jìn)行定位及定量的分析,同時(shí)用ELISA檢測間質(zhì)液及細(xì)胞培養(yǎng)上清中PK2的表達(dá)水平�！窘Y(jié)果】各組大鼠處理7天后,感染組睪丸體積較對照組縮小,質(zhì)量減輕,組織切片內(nèi)可見生精小管上皮變薄,間質(zhì)中大量巨噬細(xì)胞浸潤,精子數(shù)量及前向運(yùn)動(dòng)率均降低。Pap C基因在對照組中無表達(dá),但可表達(dá)于感染組睪丸中。感染組睪丸間質(zhì)液涂布于平板,次日可見平板上菌落生長,而對照組間質(zhì)液涂布的平板上無菌落生長。電鏡結(jié)果顯示,對照組大鼠睪丸間質(zhì)部充盈著豐富的間質(zhì)液且巨噬細(xì)胞數(shù)量較少,而感染組的間質(zhì)中可見大量巨噬細(xì)胞浸潤,且可觀察到UPEC侵入間質(zhì)區(qū)域。免疫熒光結(jié)果顯示,在對照組中,PK2主要在巨噬細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)表達(dá),而在感染組中,PK2...

【文章頁數(shù)】：125 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
前言
摘要
ABSTRACT
第一部分 UPEC誘導(dǎo)大鼠睪丸巨噬細(xì)胞分泌PK2
    1 前言
    2 材料(對象)與方法
        2.1 主要儀器及試劑
            2.1.1 主要儀器
            2.1.2 主要試劑
        2.2 實(shí)驗(yàn)對象及分組
            2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組
            2.2.3 標(biāo)本取材
        2.3 主要實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 細(xì)菌培養(yǎng)與定量
            2.3.2 UPEC誘導(dǎo)的大鼠睪丸炎模型鑒定
            2.3.3 睪丸組織形態(tài)學(xué)HE染色
            2.3.4 精液檢測
            2.3.5 QRT-PCR檢測睪丸巨噬細(xì)胞內(nèi)PK2的MRNA表達(dá)水平
            2.3.6 Western blot檢測巨噬細(xì)胞及上清中PK2 蛋白表達(dá)水平
            2.3.7 ELISA檢測上清及間質(zhì)液中PK2 濃度
            2.3.8 免疫熒光檢測PK2 在睪丸巨噬細(xì)胞內(nèi)定位情況
            2.3.9 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 UPEC睪丸炎大鼠模型鑒定
            3.1.1 大鼠睪丸外觀及質(zhì)量變化
            3.1.2 大鼠睪丸組織學(xué)變化情況
            3.1.3 精子質(zhì)量變化情況
            3.1.4 睪丸組織內(nèi)UPEC基因鑒定
            3.1.5 睪丸間質(zhì)液內(nèi)UPEC鑒定
            3.1.6 UPEC在睪丸內(nèi)的定位情況
        3.2 PK2 在睪丸巨噬細(xì)胞中的表達(dá)情況
            3.2.1 PK2 在睪丸巨噬細(xì)胞中的定位情況
            3.2.2 PK2 在各組大鼠睪丸巨噬細(xì)胞及培養(yǎng)上清的表達(dá)情況
        3.3 大鼠睪丸巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清及睪丸間質(zhì)液中PK2 的分泌情況
            3.3.1 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中各組大鼠細(xì)胞上清及間質(zhì)液中PK2 分泌情況
            3.3.2 UPEC體外刺激巨噬細(xì)胞分泌PK2 情況
    4 討論
    5 實(shí)驗(yàn)小結(jié)
第二部分 PKR-A抑制UPEC誘導(dǎo)的睪丸炎性損傷
    1 前言
    2 材料(對象)與方法
        2.1 主要儀器與試劑
            2.1.1 主要儀器
            2.1.2 主要試劑
        2.2 實(shí)驗(yàn)對象及分組
            2.2.1 PKR-A配制
            2.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組
        2.3 主要實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 睪丸組織形態(tài)學(xué) HE 染色(同第一部分 2.3.3)
            2.3.2 精液檢測(同第一部分 2.3.4)
            2.3.3 血清睪酮水平檢測
            2.3.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測睪丸巨噬細(xì)胞亞型比例
            2.3.5 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 睪丸組織形態(tài)學(xué)HE染色
        3.2 精液常規(guī)
        3.3 血清睪酮水平
        3.4 睪丸巨噬細(xì)胞亞型比例變化情況
    4 討論
    5 實(shí)驗(yàn)小結(jié)
第三部分 PK2 通過促進(jìn)NLRP3 通路活化促進(jìn)IL-1β分泌
    1 前言
    2 材料(對象)與方法
        2.1 主要儀器及試劑
            2.1.1 主要儀器
            2.1.2 主要試劑
        2.2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)分組
        2.3 睪丸原代巨噬細(xì)胞的分離培養(yǎng)及體外感染/干預(yù)模型的構(gòu)建
            2.3.1 細(xì)胞體外感染模型
            2.3.2 PK2 體外干預(yù)方法
        2.4 主要實(shí)驗(yàn)方法
            2.4.1 ELISA檢測睪丸間質(zhì)液及細(xì)胞培養(yǎng)上清中的IL-1β
            2.4.2 Caspase-1 活性檢測試劑盒檢測細(xì)胞內(nèi)caspase-1 活性的表達(dá)
            2.4.3 Western blot檢測NLRP3 通路相關(guān)因子在不同處理后的變化
            2.4.4 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
            3.1.1 感染及干預(yù)后睪丸間質(zhì)液中IL-1β的表達(dá)變化
            3.1.2 感染及干預(yù)后睪丸巨噬細(xì)胞caspase-1 活性水平
            3.1.3 感染及干預(yù)后睪丸巨噬細(xì)胞NLRP3 通路相關(guān)因子的表達(dá)情況
        3.2 體外實(shí)驗(yàn)
            3.2.1 UPEC及外源性PK2 對巨噬細(xì)胞分泌IL-1β的影響
            3.2.2 UPEC 及外源性 PK2 對巨噬細(xì)胞表達(dá) NLRP3 和 caspase-1 的影響
            3.2.3 NLRP3及caspase-1 抑制劑對睪丸巨噬細(xì)胞分泌IL-1β的影響
            3.2.4 NLRP3及caspase-1 抑制劑對巨噬細(xì)胞表達(dá)NLRP3和caspase-1 的影響
    4 討論
    5 實(shí)驗(yàn)小結(jié)
第四部分 睪丸巨噬細(xì)胞釋放IL-1β抑制睪酮合成
    1 前言
    2 材料(對象)與方法
        2.1 主要儀器及試劑
            2.1.1 主要儀器
            2.1.2 主要試劑
        2.2 實(shí)驗(yàn)對象及分組
            2.2.1 原代睪丸間質(zhì)細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
            2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組
        2.3 主要實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 CCK8 試劑盒檢測細(xì)胞活性
            2.3.2 化學(xué)發(fā)光法檢測間質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)上清中睪酮濃度(同第一部分 2.3.5)
            2.3.3 qRT-PCR 檢測間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)睪酮合成相關(guān)酶基因表達(dá)(同第一部分2.3.6)
            2.3.4 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞活性
            3.1.1 不同濃度IL-1β對間質(zhì)細(xì)胞活性的影響
            3.1.2 不同處理的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清對間質(zhì)細(xì)胞活性的影響
        3.2 間質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)上清中睪酮濃度
            3.2.1 不同濃度IL-1β對間質(zhì)細(xì)胞分泌睪酮的影響
            3.2.2 不同處理的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清對間質(zhì)細(xì)胞分泌睪酮的影響
        3.3 間質(zhì)細(xì)胞中睪酮合成相關(guān)酶的基因表達(dá)情況
            3.3.1 不同濃度IL-1β對間質(zhì)細(xì)胞中睪酮合成相關(guān)酶基因表達(dá)的影響
            3.3.2 不同處理的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清對間質(zhì)細(xì)胞中睪酮合成相關(guān)酶基因表達(dá)的影響
    4 討論
    5 實(shí)驗(yàn)小結(jié)
全文總結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄1 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表論文情況
附錄2 主要英文縮略詞一覽表



本文編號(hào)：3749506