本文關鍵詞：高糖和氧化型低密度脂蛋白對晶狀體囊膜上皮細胞鈣庫操控鈣內(nèi)流、增殖和調亡的影響及其機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：糖尿病是常見的嚴重威脅人類健康和生活質量的重要的慢性疾病,僅次于心腦血管系統(tǒng)疾病和惡性腫瘤�；疾r機體長期處于高糖環(huán)境,導致大血管、微血管受損并且危及心、腦、腎、周圍神經(jīng)、眼睛、足等,糖尿病主要的并發(fā)癥有糖尿病腎病,心血管系統(tǒng)的病變等,其在眼部的并發(fā)癥主要有糖尿病性視網(wǎng)膜病變、與糖尿病相關的葡萄膜炎以及糖尿病性白內(nèi)障等。糖尿病引發(fā)白內(nèi)障是多種因素綜合作用的結果,目前認為主要包括:滲透壓的改變、晶狀體蛋白糖基化反應、氧化損傷等。糖尿病時,由于組織細胞長期處于高血糖的環(huán)境接受高糖刺激,使得組織細胞中的活性物質生成增多,超過抗氧化物質的清除能力,氧化與抗氧化的平衡失調,產(chǎn)生氧化應激,氧化應激可以直接造成細胞的鈣信號、凋亡和增殖改變。高脂血癥是脂肪代謝或轉運異常導致的血漿中一種或多種脂質高于正常值的一種全身性疾病,在諸多的流行病學調查研究中證實了高脂血癥與白內(nèi)障的發(fā)生有著密切的關聯(lián)。低密度脂蛋白的多少是目前診斷高脂血癥的主要標準,高脂血癥時,機體常常出現(xiàn)高氧化狀態(tài),血漿中氧化型低密度脂蛋白增多,氧化型低密度脂蛋白是高脂血癥患者動脈粥樣硬化的最重要危險因素之一。許多研究顯示高血脂可以影響細胞的鈣信號、增殖和凋亡。鈣離子在細胞增殖和凋亡中有重要的調節(jié)作用。Ca2+主要分布在細胞內(nèi)液和細胞外液中。在細胞內(nèi),Ca2+主要儲存在內(nèi)質網(wǎng)/肌漿網(wǎng)中,通過內(nèi)質網(wǎng)/肌漿網(wǎng)膜上的離子泵和離子通道調控其吸收和釋放,從而形成精細的Ca2+濃度調控體系。在細胞內(nèi),Ca2+作為重要的第二信使對細胞產(chǎn)生生理病理反應具有重要意義。近年來的研究結果顯示鈣庫操控的鈣通道廣泛分布于各種組織細胞,在調控細胞的生理病理功能中有重要作用,Orai和STIM是介導鈣庫操控的鈣內(nèi)流兩個重要的蛋白。本研究分為以下兩部分來闡明高糖和氧化型低密度脂蛋白對晶狀體囊膜上皮細胞鈣庫操控鈣內(nèi)流、增殖和凋亡的影響及其機制。通過本項研究,可以明確高血糖和氧化型低密度脂蛋白對晶狀體囊膜上皮細胞鈣信號和增殖凋亡的作用及其分子機制,有助于了解高血糖和氧化型低密度脂蛋白在白內(nèi)障發(fā)病中的可能作用和機制,為將來的治療提供一定的理論依據(jù),為藥物篩選提供靶點,為臨床治療提供潛在的新的治療方法。1.高糖培養(yǎng)對晶狀體囊膜上皮細胞鈣庫操控鈣內(nèi)流、增殖和凋亡的影響鈣庫操控鈣內(nèi)流是細胞內(nèi)鈣庫中的鈣離子耗竭后激活了細胞膜上鈣庫操控的Ca2+通道,介導細胞外Ca2+內(nèi)流。鈣庫操控鈣內(nèi)流是近年來新發(fā)現(xiàn)的Ca2+內(nèi)流的重要方式,而且,鈣庫操控鈣內(nèi)流介導的鈣信號可能是細胞內(nèi)外信息交流新的重要途徑,對細胞的增殖和凋亡都有重要的調節(jié)作用。本研究采用高糖培養(yǎng)晶狀體囊膜上皮細胞株HLEpi C細胞模擬體內(nèi)的高血糖環(huán)境,檢測了高糖培養(yǎng)對HLEpi C細胞鈣庫操控鈣內(nèi)流和增殖凋亡的影響。結果發(fā)現(xiàn):(1)糖尿病白內(nèi)障患者的晶狀體囊膜上皮細胞Orai1的表達顯著增多;(2)鈣成像實驗發(fā)現(xiàn)高糖培養(yǎng)1、3、7、14天后,三磷酸腺苷(ATP)和鈣庫上的鈣泵抑制劑毒胡蘿卜素(TG)介導的鈣庫操縱的鈣內(nèi)流都顯著增強;(3)免疫蛋白印跡結果顯示,高糖培養(yǎng)的HLEpi C細胞STIM1、Orai3顯著升高,Orai2沒有顯著改變,而Orai1出現(xiàn)明顯降低;(4)Orai1和STIM1 si RNA顯著抑制了HLEpi C細胞Orai1和STIM1蛋白的表達,同時也顯著抑制了TG介導的鈣庫操縱的鈣內(nèi)流;(5)高糖培養(yǎng)7天后HLEpi C細胞的增殖和凋亡都顯著增強。這些結果表明高糖培養(yǎng)引起的增強的鈣庫操控鈣內(nèi)流可能是由于高糖環(huán)境誘發(fā)HLEpi C細胞表達更多的介導鈣庫操控鈣內(nèi)流相關蛋白造成,高糖培養(yǎng)導致的增強的鈣庫操控鈣內(nèi)流可能是引起HLEpi C細胞增殖和凋亡增強的一個重要原因。2.氧化型低密度脂蛋白對晶狀體囊膜上皮細胞鈣庫操控鈣內(nèi)流、增殖和凋亡的影響氧化型低密度脂蛋白也可以影響細胞的鈣信號、增殖和凋亡。本研究采用硫酸銅氧化低密度脂蛋白制備氧化型低密度脂蛋白,然后根據(jù)文獻使用100μg/ml氧化型低密度脂蛋白處理HLEpi C細胞24h,檢測HLEpi C細胞的鈣庫操控鈣內(nèi)流、增殖和凋亡。通過實驗發(fā)現(xiàn):(1)TG介導的鈣庫操控鈣內(nèi)流明顯增強;(2)免疫蛋白印跡顯示,氧化型低密度脂蛋白處理的晶狀體囊膜上皮細胞Orai3和STIM1蛋白表達顯著升高,而Orai1和Orai2表達卻沒有顯著改變;(3)CCK8細胞增殖結果顯示,氧化型低密度脂蛋白處理的細胞增殖明顯增強;(4)TUNEL實驗結果也顯示,氧化低密度脂蛋白處理的HLEpi C細胞凋亡顯著增強。這些結果說明氧化型低密度脂蛋白可以導致HLEpi C細胞表達鈣庫操控鈣內(nèi)流相關蛋白增強,從而引起鈣庫操控鈣內(nèi)流增強,而且鈣庫操控鈣內(nèi)流增強可能是引起HLEpi C細胞增殖和凋亡增強的原因之一。
【關鍵詞】：晶狀體囊膜上皮細胞 高血糖 氧化型低密度脂蛋白 鈣庫操縱鈣內(nèi)流 增殖
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R587.2;R776.1
【目錄】：

• 中英文縮寫詞對照表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 第一部分 高糖培養(yǎng)對晶狀體囊膜上皮細胞鈣庫操控鈣內(nèi)流、增殖和凋亡的影響14-42
• 1．前言14-19
• 2．實驗材料19-21
• 3．實驗方法21-28
• 4．結果28-35
• 5．討論35-42
• 第二部分 氧化型低密度脂蛋白對晶狀體囊膜上皮細胞鈣庫操控鈣內(nèi)流、增殖和凋亡的影響42-57
• 1．前言42-46
• 2．實驗材料46-48
• 3．實驗方法48-50
• 4．結果50-54
• 5．討論54-57
• 結論57-58
• 參考文獻58-73
• 附錄73-75
• 致謝75-76
• 綜述76-85
• 參考文獻82-85

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 袁媛;邱霞;;糖尿病性白內(nèi)障發(fā)病機制及治療研究進展[J];轉化醫(yī)學雜志;2014年04期

2 任秀君;馬惠芳;圖婭;;電針對高脂血癥合并腦缺血大鼠室管膜下區(qū)神經(jīng)干細胞分化的影響[J];針刺研究;2010年05期

3 李艷偉;于曉玲;申玉超;;阿托伐他汀對ox-LDL誘導的人臍靜脈內(nèi)皮細胞中Wnt信號通路及相關因子表達的影響[J];中國藥房;2014年17期

  本文關鍵詞：高糖和氧化型低密度脂蛋白對晶狀體囊膜上皮細胞鈣庫操控鈣內(nèi)流、增殖和調亡的影響及其機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：374395