本文關(guān)鍵詞：大鼠放射性腦損傷模型早期分子靶向示蹤研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分早期放射性腦損傷大鼠腦組織內(nèi)ICAM-1蛋白的表達(dá)目的研究細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)在早期放射性腦損傷大鼠模型中的表達(dá),并為后續(xù)分子靶向示蹤影像研究確定掃描的時(shí)間點(diǎn)。方法選擇健康SD大鼠40只,按隨機(jī)數(shù)字表法分為兩組:空白對(duì)照組(麻醉后不照射,共20只)和照射組(采用30Gy電子線單次全腦照射SD大鼠,建立放射性腦損傷模型,共20只),分別于照射后1d、2d、3d、5d和7d將大鼠處死,取大鼠腦組織。通過(guò)HE染色在光鏡下觀察腦組織的病理學(xué)變化,采用Western blot方法檢測(cè)全腦ICAM-1總蛋白含量的改變情況,應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法并結(jié)合計(jì)算機(jī)視圖處理軟件檢測(cè)腦血管內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1蛋白積分光密度值變化。結(jié)果照射組腦組織在觀察期主要?dú)v經(jīng)了腦血管源性水腫、血管內(nèi)膜細(xì)胞受損、早期血栓形成等病理變化過(guò)程。與空白對(duì)照組比較,ICAM-1總蛋白在照射后1d時(shí)表達(dá)即出現(xiàn)增高,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),ICAM-1的表達(dá)逐漸增多,照射后3d時(shí)其表達(dá)達(dá)到高峰,其后ICAM-1表達(dá)略降低,7d時(shí)仍高于對(duì)照組水平。照射1d后腦組織即出現(xiàn)ICAM-1染色陽(yáng)性的血管內(nèi)皮細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞。血管內(nèi)皮細(xì)胞在照后3d ICAM-1蛋白光密度值到達(dá)峰值,與空白組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-12.006,P0.01);照后3d膠質(zhì)及神經(jīng)細(xì)胞ICAM蛋白光密度值也達(dá)到峰值,與空白對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-18.741,P0.01)。結(jié)論在放射性腦損傷模型中,ICAM-1蛋白在損傷急性期升高;腦血管內(nèi)皮細(xì)胞、膠質(zhì)及神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)的ICAM-1蛋白在觀察期內(nèi)持續(xù)高表達(dá),并參與了急性期內(nèi)誘導(dǎo)水腫、血管通透性增加、形成血栓等相關(guān)事件。第二部分分子靶向示蹤劑的合成目的利用小鼠抗大鼠細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)單克隆抗體與微米量級(jí)氧化鐵顆粒(MPIO)進(jìn)行連接,合成特異性分子靶向示蹤劑抗ICAM-MPIO。方法將MPIO、ICAM-1單克隆抗體和可溶于水的碳二亞胺(EDC)按照1:10的摩爾比混合于磷酸緩沖液(PBS,0.01M,Ph=7.4)中,然后在渦旋條件下緩慢加入EDC,將上述混合溶液置于旋轉(zhuǎn)混合架上,轉(zhuǎn)速調(diào)至60rpm,室溫下反應(yīng)2~3小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后,采用離心分離進(jìn)行純化,用PBS緩沖液至少清洗三次以除去未反應(yīng)的抗體和EDC,最后將產(chǎn)物分散在含有1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS緩沖液中。4℃靜置過(guò)夜后置于4℃下保存。結(jié)果應(yīng)用免疫熒光共聚焦顯微鏡觀察抗體與MPIO二者的連接情況。ICAM-1抗體攜帶的紅色熒光與MPIO內(nèi)攜帶的綠色熒光進(jìn)行融合顯像,可以見到二者在大小、形態(tài)及位置上基本吻合,ICAM-1抗體成功連接至MPIO微球表面。結(jié)論ICAM-1抗體可以與MPIO進(jìn)行連接,合成帶有分子靶向性的造影劑。第三部分分子靶向示蹤劑的活體動(dòng)物成像實(shí)驗(yàn)?zāi)康难芯糠肿影邢蛟煊皠┰谠缙诖笫蠓派湫阅X損傷模型中的顯像特點(diǎn),確定其是否可以早期顯示放射性腦損傷。方法采用健康SD大鼠12只,體重200±50g,建立放射性腦損傷動(dòng)物模型,按隨機(jī)數(shù)字表法分為靶向組(注射抗ICAM-MPIO)、非靶向組(注射MPIO)、競(jìng)爭(zhēng)抑制組(注射抗ICAM-MPIO前給予ICAM-1抗體注射)和正常對(duì)照組(注射抗ICAM-MPIO),每組3只。采用高場(chǎng)強(qiáng)磁共振儀(7.0T)對(duì)大鼠進(jìn)行掃描,采集T1WI、T2WI和T2-map序列,評(píng)價(jià)抗ICAM-MPIO對(duì)早期放射性腦損傷大鼠的靶向性,以及特異性靶向造影劑在磁共振影像上的表現(xiàn)。掃描完成后對(duì)大鼠取腦,并行普魯士藍(lán)染色實(shí)驗(yàn),觀察MPIO顆粒在腦內(nèi)的分布情況。結(jié)果活體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示抗ICAM-MPIO對(duì)早期放射性腦損傷具有明顯的靶向作用。靶向組注射抗ICAM-MPIO后引起T2信號(hào)明顯的減低,通過(guò)對(duì)腦組織T2值的測(cè)量,照射靶向組腦組織的T2信號(hào)值較非靶向組、競(jìng)爭(zhēng)抑制組和正常對(duì)照組的T2信號(hào)值明顯降低(P0.05)。普魯士藍(lán)染色在靶向組大鼠腦組織內(nèi)見到明顯藍(lán)染的鐵顆粒。結(jié)論利用分子靶向示蹤劑抗ICAM-MPIO可以有效的觀察早期放射性腦損傷,可以作為早期觀察和評(píng)價(jià)放射性腦損傷的手段之一。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)胞間粘附分子-1 放射性腦損傷大鼠模型 蛋白表達(dá) 微米級(jí)超順磁性氧化鐵顆粒 細(xì)胞間粘附分子-1 分子靶向造影劑 放射性腦損傷 大鼠模型 分子靶向磁共振成像
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R-332;R730.55
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明10-11
• 前言11-16
• 研究現(xiàn)狀、成果11-14
• 研究目的、方法14-16
• 第一部分 早期放射性腦損傷大鼠腦組織ICAM-1 的表達(dá)16-43
• 1.1 對(duì)象與方法16-27
• 1.2 結(jié)果27-34
• 1.3 討論34-37
• 1.4 小結(jié)37-38
• 參考文獻(xiàn)38-43
• 第二部分 分子靶向示蹤劑的合成43-57
• 2.1 材料與方法43-44
• 2.2 結(jié)果44-45
• 2.3 討論45-52
• 2.4 小結(jié)52
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 第三部分 分子靶向示蹤劑的活體動(dòng)物成像實(shí)驗(yàn)57-74
• 3.1 對(duì)象與方法57-60
• 3.2 結(jié)果60-64
• 3.3 討論64-69
• 3.4 小結(jié)69-70
• 參考文獻(xiàn)70-74
• 全文結(jié)論74-75
• 論文創(chuàng)新點(diǎn)75-76
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明76-77
• 綜述77-101
• 參考文獻(xiàn)87-101
• 致謝101-102

【共引文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：大鼠放射性腦損傷模型早期分子靶向示蹤研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：373989