研究目的:在我國(guó),胃癌是一種高發(fā)病率的惡性腫瘤嚴(yán)重危害人民健康。蛋白質(zhì)的糖基化修飾是一種重要的翻譯后修飾,在腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中均伴有蛋白質(zhì)異常糖基化修飾的產(chǎn)生。然而異常的糖基化修飾在腫瘤進(jìn)程中的作用有待進(jìn)一步闡明。因此,本研究以胃癌細(xì)胞及不同分期胃癌患者組織為研究對(duì)象,篩選與胃癌相關(guān)的異常糖基化修飾,解析糖鏈結(jié)構(gòu),分析異常糖基化的合成通路以及其對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的影響,本研究將為闡明異常糖基化修飾在胃癌發(fā)展中的作用機(jī)制提供幫助。方法:1.利用凝集素芯片分析胃癌細(xì)胞/胃癌組織的糖蛋白糖鏈譜,篩選與胃癌相關(guān)的異常糖蛋白糖鏈,隨后通過凝集素組織化學(xué)以及凝集素細(xì)胞化學(xué)方法在細(xì)胞水平上驗(yàn)證篩選的異常糖蛋白糖鏈;2.構(gòu)建朝鮮槐凝集素(Maackia amurensis I,MAL-I)-磁性微粒復(fù)合物,分別從胃癌細(xì)胞/胃癌組織蛋白中分離MAL-I特異性識(shí)別的糖蛋白并釋放糖鏈,借助基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF-MS)技術(shù)解析N-聚糖結(jié)構(gòu),比較分析胃癌...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語對(duì)照表
第一章 緒論
    1.1 胃癌
        1.1.1 胃癌的流行病調(diào)查
        1.1.2 胃癌分類與分型
        1.1.3 胃癌的形成原因
            1.1.3.1 幽門螺旋桿菌與胃癌
            1.1.3.2 胃癌患者遺傳因素
    1.2 糖組學(xué)
        1.2.1 糖組學(xué)概念
        1.2.2 糖與蛋白質(zhì)糖基化
        1.2.3 腫瘤發(fā)展過程中蛋白質(zhì)的異常糖基化
        1.2.4 乳糖胺的合成及其生物學(xué)功能
    1.3 胃癌相關(guān)蛋白質(zhì)異常糖基化研究現(xiàn)狀
        1.3.1 胃癌發(fā)展過程中異常表達(dá)的糖基轉(zhuǎn)移酶
        1.3.2 胃癌發(fā)展過程中結(jié)構(gòu)發(fā)生改變的糖蛋白糖鏈
    1.4 本研究目的意義與技術(shù)路線
第二章 胃癌細(xì)胞糖蛋白糖鏈譜研究
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)主要儀器
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及耗材
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)溶液配制方法
        2.2.4 數(shù)據(jù)采集及分析軟件
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 胃癌及正常細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.2 細(xì)胞總蛋白提取
        2.3.3 環(huán)氧化修飾片基的準(zhǔn)備
        2.3.4 凝集素芯片的點(diǎn)制
        2.3.5 細(xì)胞蛋白熒光標(biāo)記與孵育
        2.3.6 芯片數(shù)據(jù)處理
        2.3.7 凝集素細(xì)胞化學(xué)
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 胃癌及正常細(xì)胞糖蛋白糖鏈譜分析
        2.4.2 凝集素組化驗(yàn)證
    2.5 本章小結(jié)與討論
第三章 不同分期胃癌組織糖蛋白糖鏈譜研究
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)主要儀器
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及耗材
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)溶液配制方法
        3.2.4 數(shù)據(jù)采集及分析軟件
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 胃癌組織及癌旁組織樣本收集及臨床信息整理
        3.3.2 組織總蛋白提取
        3.3.3 凝集素芯片制備及數(shù)據(jù)處理
        3.3.4 凝集素組化驗(yàn)證
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 胃癌與癌旁組織糖蛋白糖鏈譜比較分析
        3.4.2 凝集素組化驗(yàn)證
    3.5 本章小結(jié)與討論
第四章 胃癌細(xì)胞及胃癌組織中含LacNAc結(jié)構(gòu)N-聚糖的分離及鑒定
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)主要儀器
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及耗材
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)溶液配制方法
        4.2.4 數(shù)據(jù)采集及分析軟件
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 凝集素磁性微粒復(fù)合物制備
        4.3.2 糖蛋白的分離純化
        4.3.3 糖蛋白PNGase F酶解
        4.3.4 N-聚糖脫鹽純化
        4.3.5 N-聚糖質(zhì)譜解析
        4.3.6 質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 胃癌細(xì)胞MAL-I分離糖蛋白N-聚糖質(zhì)譜解析結(jié)果
        4.4.2 胃癌組織MAL-I分離糖蛋白N-聚糖質(zhì)譜鑒定結(jié)果
    4.5 本章小結(jié)與討論
第五章 胃癌相關(guān)異常糖蛋白糖鏈的合成通路研究
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)主要儀器
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及耗材
        5.2.3 實(shí)驗(yàn)溶液配制方法
        5.2.4 數(shù)據(jù)采集及分析軟件
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.0 胃癌組織RNA提取
        5.3.1 糖相關(guān)基因芯片制備
        5.3.2 糖相關(guān)基因芯片靶標(biāo)制備
        5.3.3 糖相關(guān)基因芯片雜交及數(shù)據(jù)分析
        5.3.4 Real-Time PCR驗(yàn)證
        5.3.5 免疫印跡分析
    5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.4.1 不同分期胃癌組織糖相關(guān)基因表達(dá)分析
        5.4.2 RT-PCR驗(yàn)證
        5.4.3 差異表達(dá)糖相關(guān)基因代謝通路
        5.4.4 差異表達(dá)糖相關(guān)基因功能分析
        5.4.5 B4GALT3 表達(dá)升高與LacNAc的異常積累相關(guān)
        5.4.6 結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)分析B4GALT3 在胃癌中的表達(dá)水平
    5.5 本章小結(jié)與討論
第六章 糖基轉(zhuǎn)移酶B4GALT3 表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞的影響
    6.1 引言
    6.2 實(shí)驗(yàn)材料
        6.2.1 實(shí)驗(yàn)主要儀器
        6.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及耗材
        6.2.3 實(shí)驗(yàn)溶液配制方法
        6.2.4 數(shù)據(jù)采集及分析軟件
    6.3 實(shí)驗(yàn)方法
        6.3.1 B4GALT3 干擾及過表達(dá)慢病毒質(zhì)粒
        6.3.2 質(zhì)粒擴(kuò)增與提取
        6.3.3 慢病毒包裝與濃縮
        6.3.4 測(cè)量病毒滴度
        6.3.5 慢病毒轉(zhuǎn)染
        6.3.6 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞篩選
        6.3.7 免疫印跡分析干擾及過表達(dá)效果
        6.3.8 凝集素芯片分析B4GALT3 表達(dá)對(duì)MAL-I識(shí)別的LacNAc的影響
        6.3.9 B4GALT3 表達(dá)對(duì)SGC-7901 增殖能力的影響
        6.3.10 B4GALT3 表達(dá)對(duì)SGC-7901 遷移及侵襲能力的影響
        6.3.11 B4GALT3 表達(dá)對(duì)SGC-7901 克隆形成能力的影響
    6.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        6.4.1 轉(zhuǎn)染效果鑒定
        6.4.2 B4GALT3 表達(dá)影響胃癌細(xì)胞LacNAc合成
        6.4.3 B4GALT3 表達(dá)不影響SGC-7901 增殖能力
        6.4.4 B4GALT3 促進(jìn)SGC-7901 遷移能力
        6.4.5 B4GALT3 促進(jìn)SGC-7901 侵襲能力
        6.4.6 B4GALT3 促進(jìn)SGC-7901 克隆形成能力
    6.5 本章小結(jié)與討論
全文總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀博士學(xué)位期間取得科研成果
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3739015