目的:研究缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)mRNA在肝癌組織和癌旁組織或正常肝組織中的表達差異,及其與肝癌患者生存預(yù)后和臨床病理特征的相關(guān)性,進一步明確HIF1α在人肝癌細胞SK-Hep1和Hep-3B中的功能。其后體外實驗研究天冬多糖常氧和缺氧下對人肝癌細胞SK-Hep1和Hep-3B增殖,遷移,侵襲和血管形成的影響,并進一步探討天冬多糖體外常氧和缺氧下對HIF1α/VEGF信號通路相關(guān)蛋白表達的影響。最后體內(nèi)實驗驗證天冬多糖對裸鼠皮下肝癌細胞移植瘤生長及HIF1α/VEGF信號通路相關(guān)蛋白表達的影響。方法:利用Oncomine和GSE14520數(shù)據(jù)庫分析人肝癌組織和癌旁組織或正常人肝組織中HIF1αmRNA表達差異。并用The Human Protein Atlas數(shù)據(jù)庫免疫組化和12對人肝癌組織和癌旁組織免疫印跡進一步驗證。通過GSE14520數(shù)據(jù)庫分析HIF1αmRNA不同表達對肝癌患者總生存期(OS)和無復(fù)發(fā)生存期(RFS)的影響,及其與臨床病理特征的相關(guān)性。構(gòu)建HIF1α過表達和RNA干擾慢病毒肝癌細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株研究HIF1α對人肝癌細胞(SK-Hep1和Hep-3B)增殖、遷移...

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
英文縮略語
中文摘要
Abstract
引言
第一部分 HIF1α mRNA高表達與肝癌患者臨床預(yù)后相關(guān)性的研究分析
    1 材料
        1.1 肝癌患者癌組織和癌旁組織收集
        1.2 細胞株
        1.3 主要試劑和耗材
        1.4 實驗主要儀器
        1.5 主要試劑配制
    2 方法
        2.1 數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)分析
        2.2 細胞培養(yǎng)
        2.3 人肝癌細胞病毒感染
        2.4 QRT-PCR實驗
        2.5 免疫印跡實驗
        2.6 CCK-8實驗
        2.7 創(chuàng)傷愈合實驗
        2.8 Transwell基質(zhì)膠侵襲實驗
        2.9 HUVEC基質(zhì)膠血管形成實驗
        2.10 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 肝癌組織中HIF1α表達明顯上調(diào)
        3.2 HIF1αmRNA表達水平與肝癌患者臨床病理特征的相關(guān)性
        3.3 HIF1αmRNA過表達對肝癌患者生存預(yù)后的影響
        3.4 HIF1α過表達和RNA干擾慢病毒穩(wěn)轉(zhuǎn)人肝癌細胞株的構(gòu)建
        3.5 HIF1α過表達促進了人肝癌細胞的增殖、遷移、侵襲和血管形成
        3.6 HIF1αRNA干擾抑制了人肝癌細胞的增殖、遷移、侵襲和血管形成
    4 分析與討論
第二部分 體外天冬多糖通過HIF1α/VEGF信號通路抑制肝癌細胞遷移、侵襲和血管形成
    1 材料
        1.1 細胞株
        1.2 主要試劑和耗材
        1.3 實驗主要儀器
    2 實驗方法
        2.1 天冬多糖儲備液的配置
        2.2 細胞培養(yǎng)
        2.3 CCK-8實驗
        2.4 創(chuàng)傷愈合實驗
        2.5 Transwell基質(zhì)膠侵襲實驗
        2.6 HUVEC基質(zhì)膠血管形成實驗
        2.7 ELISA實驗
        2.8 QRT-PCR實驗
        2.9 免疫印跡實驗
        2.10 免疫熒光實驗
        2.11 統(tǒng)計方法
    3 結(jié)果
        3.1 天冬多糖抑制人肝癌細胞的增殖
        3.2 天冬多糖抑制人肝癌細胞的遷移和侵襲
        3.3 天冬多糖抑制人肝癌細胞誘導(dǎo)的HUVEC細胞血管形成
        3.4 天冬多糖抑制人肝癌細胞HIF1α和 VEGF的表達
        3.5 天冬多糖調(diào)節(jié)MAPK和 PI3K信號通路抑制人肝癌細胞HIF1α表達
    4 分析與討論
第三部分 體外缺氧下天冬多糖通過HIF1α/VEGF信號通路抑制肝癌細胞遷移、侵襲和血管形成
    1 材料
        1.1 細胞株
        1.2 主要試劑和耗材
        1.3 實驗主要儀器
        1.4 部分試劑的配制
    2 方法
        2.1 天冬多糖儲備液的配置
        2.2 細胞培養(yǎng)
        2.3 CCK-8實驗
        2.4 Transwell遷移實驗
        2.5 Transwell基質(zhì)膠侵襲實驗
        2.6 HUVEC細胞基質(zhì)膠血管形成實驗
        2.7 ELISA實驗
        2.8 免疫印跡實驗
        2.9 免疫熒光實驗
        2.10 統(tǒng)計方法
    3 結(jié)果
        3.1 天冬多糖常氧和缺氧條件下可明顯地抑制人肝癌細胞的增殖
        3.2 天冬多糖缺氧條件下可明顯地抑制人肝癌細胞的遷移
        3.3 冬多糖缺氧條件下可明顯地抑制人肝癌細胞的侵襲
        3.4 天冬多糖缺氧條件下可明顯地抑制人肝癌細胞誘導(dǎo)的HUVEC細胞血管形成
        3.5 天冬多糖缺氧條件下可明顯地抑制人肝癌細胞HIF1α和 VEGF蛋白的表達
        3.6 天冬多糖缺氧條件下通過調(diào)節(jié)MAPK和 PI3K信號通路抑制人肝癌細胞HIF1α蛋白的表達
    4 分析與討論
第四部分 體內(nèi)實驗研究天冬多糖通過HIF1α/VEGF信號通路抑制肝癌血管形成的機制
    1 材料
        1.1 細胞株
        1.2 動物及飼料
        1.3 主要試劑及耗材
        1.4 實驗主要儀器
        1.5 部分試劑的配制
    2 方法
        2.1 天冬多糖儲備液的配置
        2.2 細胞培養(yǎng)
        2.3 裸鼠皮下成瘤實驗的實施
        2.4 裸鼠腫瘤組織的病理檢測
        2.5 免疫印跡檢測
        2.6 統(tǒng)計學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 天冬多糖抑制裸鼠皮下肝癌移植瘤的生長
        3.2 天冬多糖抑制裸鼠皮下肝癌移植瘤血管生成
        3.3 天冬多糖通過抑制MAPK和 PI3K信號通路抑制裸鼠皮下肝癌移植瘤的血管形成
    4 分析與討論
        4.1 目前國內(nèi)外肝癌臨床抗血管生成治療研究現(xiàn)狀
        4.2 目前國內(nèi)外中醫(yī)藥抑制腫瘤血管生成體內(nèi)實驗研究現(xiàn)狀
        4.3 天冬多糖通過HIF1α/VEGF信號通路抗血管生成抑制荷肝癌小鼠腫瘤生長
創(chuàng)新點
結(jié)論
致謝
參考文獻
附錄
    附錄1 已發(fā)表綜述全文 中藥多糖調(diào)節(jié)腫瘤免疫應(yīng)答研究進展
        參考文獻
    附錄2 在校期間第一作者發(fā)表或投稿論文
    附錄3 在讀期間科研工作情況



本文編號：3738588