乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）慢性感染是肝細(xì)胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）發(fā)生和發(fā)展的主要誘導(dǎo)因素之一。雖然乙肝疫苗的普及大大減少了新感染的數(shù)量,而核苷類似物和干擾素等抗病毒藥物的治療也極大地降低了感染患者的死亡率。但由于現(xiàn)有的藥物不能完全清除HBV感染過程中產(chǎn)生的共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（covalently closed circular DNA,cccDNA）,導(dǎo)致目前全世界仍有超過3.5億慢性乙肝病毒感染者,每年約88.7萬人死于HBV引起的肝硬化、肝癌及其并發(fā)癥。故為探索乙型肝炎和肝癌的新的治療靶點(diǎn)和開發(fā)新的治療藥物提供理論依據(jù),需要進(jìn)一步研究HBV的持續(xù)性復(fù)制和致病機(jī)制。越來越多的證據(jù)表明微小RNA（microRNAs,miRNAs）參與HBV復(fù)制和HBV相關(guān)肝癌的發(fā)生。miRNA是一類短的、內(nèi)源性的非編碼RNA,可通過與靶基因mRNA的3’-非翻譯區(qū)（3’-Untranslated regions,3’-UTR）上的種子序列互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合,調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄后水平。有研究表明,HBV可上調(diào)或下調(diào)胞內(nèi)多種miRNAs的表達(dá)... 

【文章頁數(shù)】：151 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 研究背景
    1.1 乙型肝炎病毒(HBV)研究現(xiàn)狀概述
        1.1.1 HBV的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 HBV的基因組結(jié)構(gòu)和編碼的蛋白
        1.1.3 HBV的感染周期
        1.1.4 HBx的功能研究
    1.2 HBV利用自噬反應(yīng)促進(jìn)自身復(fù)制
        1.2.1 自噬的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 自噬的分類
        1.2.3 自噬反應(yīng)發(fā)生的過程
        1.2.4 HBV利用自噬促進(jìn)自身復(fù)制
    1.3 miRNA在 HBV誘導(dǎo)自噬反應(yīng)中的研究進(jìn)展
        1.3.1 miRNA的發(fā)現(xiàn)
        1.3.2 miRNA的產(chǎn)生和功能
        1.3.3 miRNA與自噬
        1.3.4 miRNA與 HBV
        1.3.5 miRNA在 HBV誘導(dǎo)自噬反應(yīng)中的調(diào)控作用
    1.4 NF-κB信號(hào)通路的研究進(jìn)展
        1.4.1 NF-κB信號(hào)通路的組成
        1.4.2 NF-κB信號(hào)通路的類別
        1.4.3 HBV/HBx調(diào)控NF-κB信號(hào)通路的活性
        1.4.4 NF-κB信號(hào)通路與自噬
    1.5 XIAP的研究進(jìn)展
    1.6 本章小結(jié)
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)相關(guān)儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.2.1 細(xì)胞,細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.2 表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.3 化學(xué)藥品,抗體和其他試劑
        2.2.4 細(xì)胞/組織/血清中的RNA提取
        2.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)試劑
        2.2.6 免疫印跡(western blot)所用試劑
        2.2.7 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)所用材料
        2.2.8 共聚焦和透射電鏡觀察自噬體所用材料
        2.2.9 酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)檢測(cè)試劑盒
        2.2.10 Southern blot and Northern blot所用試劑
        2.2.11 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(Co-IP)
        2.2.12 染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)實(shí)驗(yàn)所用試劑
        2.2.13 小鼠尾靜脈高壓注射相關(guān)材料
        2.2.14 本研究所用引物列表
    2.3 實(shí)驗(yàn)步驟
        2.3.1 細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn)
        2.3.2 質(zhì)粒的構(gòu)建與擴(kuò)增
        2.3.3 RNA的提取
        2.3.4 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)
        2.3.5 免疫印跡(western blot)
        2.3.6 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        2.3.7 激光共聚焦顯微鏡觀察自噬體
        2.3.8 ELISA檢測(cè)HBV抗原分泌
        2.3.9 Southern blot 和 Northern blot 實(shí)驗(yàn)
        2.3.10 Co-IP 實(shí)驗(yàn)
        2.3.11 CHIP 實(shí)驗(yàn)
        2.3.12 Balb/C小鼠尾靜脈高壓注射
        2.3.13 HBV病毒的濃縮與定量
        2.3.14 HBV病毒感染人原代肝細(xì)胞
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 HBV感染抑制miR-192-3p的表達(dá)
        3.1.1 研究背景
        3.1.2 HBV濃度梯度抑制miR-192-3p的分泌
        3.1.3 HBV濃度梯度抑制miR-192-3p的胞內(nèi)表達(dá)
        3.1.4 HBV通過HBx抑制miR-192-3p轉(zhuǎn)錄
        3.1.5 c-Myc顯著抑制miR-192-3p的水平
        3.1.6 HBx通過穩(wěn)定c-Myc表達(dá)而抑制miR-192-3p的水平
        3.1.7 HBx與c-Myc共同結(jié)合miR-192 的啟動(dòng)子
    3.2 HBV抑制miR-192-3p而上調(diào)XIAP的表達(dá)
        3.2.1 研究背景
        3.2.2 篩選miR-192-3p的靶基因
        3.2.3 確證XIAP作為miR-192-3p的靶基因
        3.2.4 HBV抑制miR-192-3p而上調(diào)XIAP的表達(dá)
    3.3 HBV通過miR-192-3p-XIAP軸誘導(dǎo)自噬
        3.3.1 研究背景
        3.3.2 HBV誘導(dǎo)自噬發(fā)生
        3.3.3 miR-192-3p抑制自噬反應(yīng)但不影響自噬流
        3.3.4 miR-192-3p抑制HBV誘導(dǎo)的自噬反應(yīng)
        3.3.5 XIAP誘導(dǎo)自噬
        3.3.6 Anti-miR-192-3p通過上調(diào)XIAP而促進(jìn)自噬
        3.3.7 HBV調(diào)控miR-192-3p-XIAP軸誘導(dǎo)自噬
    3.4 HBV通過miR-192-3p-XIAP誘導(dǎo)自噬而促進(jìn)HBV復(fù)制
        3.4.1 研究背景
        3.4.2 miR-192-3p抑制HBV殼體化DNA的水平和抗原分泌
        3.4.3 XIAP促進(jìn)HBV復(fù)制
        3.4.4 Anti-miR-192-3p通過上調(diào)XIAP而促進(jìn)病毒復(fù)制
        3.4.5 HBV調(diào)控miR-192-3p-XIAP軸誘導(dǎo)HBV自身復(fù)制
    3.5 HBV通過miR-192-3p-XIAP軸調(diào)控NF-ΚB通路誘導(dǎo)自噬而促進(jìn)HBV復(fù)制
        3.5.1 研究背景
        3.5.2 miR-192-3p靶向XIAP抑制NF-κB信號(hào)通路
        3.5.3 HBV通過miR-192-3p上調(diào)XIAP激活NF-κB信號(hào)通路
        3.5.4 SC-514 抑制NF-κB信號(hào)通路減弱了HBV誘導(dǎo)的自噬和HBV病毒復(fù)制
        3.5.5 SN50 抑制NF-κB信號(hào)通路減弱了HBV誘導(dǎo)的自噬和HBV病毒復(fù)制
    3.6 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)HBV通過miR-192- 3p-XIAP軸誘導(dǎo)自噬并且促進(jìn)其自身的復(fù)制
        3.6.1 研究背景
        3.6.2 在小鼠體內(nèi)HBV急性感染抑制miR-192-3p的表達(dá)
        3.6.3 在小鼠體內(nèi)HBV-miR-192-3p-XIAP軸誘導(dǎo)自噬
        3.6.4 在小鼠體內(nèi)HBV通過miR-192-3p-XIAP軸促進(jìn)自身復(fù)制
    3.7 HBV病毒感染人的原代肝細(xì)胞后抑制miR-192-3p而上調(diào)XIAP水平進(jìn)而誘導(dǎo)自噬并且促進(jìn)其自身的復(fù)制
        3.7.1 研究背景
        3.7.2 HBV感染原代肝細(xì)胞抑制miR-192-3p的表達(dá)
        3.7.3 HBV感染原代肝細(xì)胞促進(jìn)XIAP的轉(zhuǎn)錄
        3.7.4 miR-192-3p抑制HBV感染原代肝細(xì)胞誘導(dǎo)的自噬
第四章 總結(jié)與討論
參考文獻(xiàn)
攻博期間發(fā)表的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3727202