惡性腫瘤是威脅人類健康和生命的主要疾病之一,除傳統(tǒng)的手術及放化療外,利用腫瘤免疫療法激發(fā)T細胞的殺傷活性來控制腫瘤生長已成為臨床治療中不可或缺的手段之一。T細胞可及時識別并清除體內異物或癌變細胞,在抗腫瘤免疫反應中發(fā)揮重要功能。T細胞活化需要兩個信號的協(xié)同作用,除了 T細胞受體（TCR）與抗原肽-MHC分子復合物結合產生的第一刺激信號外,還需要T細胞表面的協(xié)同刺激分子提供第二刺激信號。免疫檢查點是免疫系統(tǒng)中起抑制作用的第二刺激信號分子,可抑制T細胞的活性,避免引起過激的免疫反應,在機體免疫應答過程中發(fā)揮關鍵調節(jié)作用。PD-1（Programmed Death 1）,又稱程序性死亡受體-1,是目前研究較為成熟的免疫檢查點分子,屬于免疫球蛋白超家族,主要表達于T細胞表面。PD-1的配體為PD-L1（Programmed Death-Ligand 1）,又稱程序性死亡配體-1。PD-L1存在不同的糖基化修飾形式,主要表達于抗原提呈細胞（APC）或腫瘤細胞表面。PD-1與PD-L1的胞外相互作用可抑制T細胞殺傷反應,導致腫瘤細胞免疫逃逸,近年來PD-1/PD-L1已成為臨床上治療不同類型癌癥的... 

【文章頁數(shù)】：163 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 引言
第二章 實驗材料
    2.1 主要儀器
    2.2 主要試劑
    2.3 主要耗材
    2.4 細菌株
    2.5 細胞系
    2.6 質粒
第三章 實驗方法
    3.1 細胞處理
    3.2 蛋白質免疫印跡(Western blot)
    3.3 蛋白質斑點印跡(Dotblot)
    3.4 免疫共沉淀(Co-IP)
    3.5 鄰位連接技術(Duolink PLA)
    3.6 細胞膜蛋白提取
    3.7 常規(guī)質粒構建
    3.8 基因敲低質粒構建
    3.9 體外激酶實驗
    3.10 小鼠腹腔巨噬細胞(PDM)的提取
    3.11 小鼠骨髓來源巨噬細胞(BMDM)的提取
    3.12 藥物體內抗腫瘤療效檢測
第四章 結果和討論
    4.1 PD-L1膜蛋白藥物篩選模型的建立以及效果驗證
        4.1.1 確定糖基化PD-L1膜蛋白為高通量篩選目標蛋白
        4.1.2 PD-L1膜蛋白藥物篩選模型的建立
        4.1.3 PD-L1膜蛋白藥物篩選模型的可行性檢測
        4.1.4 PD-L1膜蛋白藥物篩選結果
        4.1.5 篩選藥物負向調控PD-L1膜蛋白水平以及PD-1/PD-L1相互作用
    4.2 EGFR調控PD-L1膜蛋白降解以及與PD-1的相互作用
        4.2.1 EGFR抑制劑降低H1975細胞PD-L1膜蛋白水平
        4.2.2 EGFR抑制劑增強H1975細胞PD-L1膜蛋白降解
        4.2.3 EGFR正向調控PD-L1膜蛋白水平
        4.2.4 ES-072相較于AZD9291的優(yōu)勢
        4.2.5 ES-072主要通過EGFR信號通路增強對PD-L1膜蛋白的降解
    4.3 S279/S283磷酸化調控PD-L1膜蛋白降解以及與PD-1的相互作用
        4.3.1 PD-L1膜蛋白降解依賴于磷酸化
        4.3.2 質譜鑒定PD-L1膜蛋白磷酸化位點
        4.3.3 ES-072介導的PD-L1膜蛋白降解依賴其胞內段S279/S283磷酸化
        4.3.4 S279/S283調控PD-L1膜蛋白與K48泛素的相互作用
        4.3.5 S279/S283調控PD-L1膜蛋白和PD-1之間的相互作用
    4.4 PD-L1膜蛋白是GSK3α的直接磷酸化底物
        4.4.1 GSK3β并非糖基化PD-L1膜蛋白的激酶
        4.4.2 GSK3α可能為糖基化PD-L1膜蛋白的激酶
        4.4.3 GSK3α與糖基化PD-L1以及非糖基化PD-L1都存在相互作用
        4.4.4 p-PD-L1(S279)抗體的功能驗證
        4.4.5 GSK3α直接磷酸化PD-L1膜蛋白,作用位點為S279/S283
        4.4.6 GSK3α負向調控PD-L1膜蛋白水平
        4.4.7 GSK3α負向調控PD-L1膜蛋白和PD-1之間的相互作用
    4.5 ES-072體內抗腫瘤效果
        4.5.1 EGFR抑制劑降低TAM中PD-L1膜蛋白水平
        4.5.2 ES-072有效控制小鼠體內腫瘤生長
        4.5.3 ES-072有效控制人體內腫瘤生長
    4.6 本研究闡述的模型
    4.7 總結和討論
參考文獻(References)
附錄1 常用緩沖液及培養(yǎng)基配方
附錄2 質粒克隆所用引物
附錄3 siRNA序列
第五章 綜述 免疫檢查點阻斷法治療肺癌:當前局勢和未來展望
    參考文獻(References)
作者簡歷及博士期間科研成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]非小細胞肺癌的免疫治療現(xiàn)狀[J]. 田林曉,李小光.  中外醫(yī)療. 2015(31)



本文編號：3715744