惡性腫瘤是威脅人類健康和生命的主要疾病之一,除傳統(tǒng)的手術(shù)及放化療外,利用腫瘤免疫療法激發(fā)T細(xì)胞的殺傷活性來控制腫瘤生長(zhǎng)已成為臨床治療中不可或缺的手段之一。T細(xì)胞可及時(shí)識(shí)別并清除體內(nèi)異物或癌變細(xì)胞,在抗腫瘤免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要功能。T細(xì)胞活化需要兩個(gè)信號(hào)的協(xié)同作用,除了 T細(xì)胞受體（TCR）與抗原肽-MHC分子復(fù)合物結(jié)合產(chǎn)生的第一刺激信號(hào)外,還需要T細(xì)胞表面的協(xié)同刺激分子提供第二刺激信號(hào)。免疫檢查點(diǎn)是免疫系統(tǒng)中起抑制作用的第二刺激信號(hào)分子,可抑制T細(xì)胞的活性,避免引起過激的免疫反應(yīng),在機(jī)體免疫應(yīng)答過程中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用。PD-1（Programmed Death 1）,又稱程序性死亡受體-1,是目前研究較為成熟的免疫檢查點(diǎn)分子,屬于免疫球蛋白超家族,主要表達(dá)于T細(xì)胞表面。PD-1的配體為PD-L1（Programmed Death-Ligand 1）,又稱程序性死亡配體-1。PD-L1存在不同的糖基化修飾形式,主要表達(dá)于抗原提呈細(xì)胞（APC）或腫瘤細(xì)胞表面。PD-1與PD-L1的胞外相互作用可抑制T細(xì)胞殺傷反應(yīng),導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞免疫逃逸,近年來PD-1/PD-L1已成為臨床上治療不同類型癌癥的... 

【文章頁數(shù)】：163 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 引言
第二章 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 主要儀器
    2.2 主要試劑
    2.3 主要耗材
    2.4 細(xì)菌株
    2.5 細(xì)胞系
    2.6 質(zhì)粒
第三章 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 細(xì)胞處理
    3.2 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)
    3.3 蛋白質(zhì)斑點(diǎn)印跡(Dotblot)
    3.4 免疫共沉淀(Co-IP)
    3.5 鄰位連接技術(shù)(Duolink PLA)
    3.6 細(xì)胞膜蛋白提取
    3.7 常規(guī)質(zhì)粒構(gòu)建
    3.8 基因敲低質(zhì)粒構(gòu)建
    3.9 體外激酶實(shí)驗(yàn)
    3.10 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞(PDM)的提取
    3.11 小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞(BMDM)的提取
    3.12 藥物體內(nèi)抗腫瘤療效檢測(cè)
第四章 結(jié)果和討論
    4.1 PD-L1膜蛋白藥物篩選模型的建立以及效果驗(yàn)證
        4.1.1 確定糖基化PD-L1膜蛋白為高通量篩選目標(biāo)蛋白
        4.1.2 PD-L1膜蛋白藥物篩選模型的建立
        4.1.3 PD-L1膜蛋白藥物篩選模型的可行性檢測(cè)
        4.1.4 PD-L1膜蛋白藥物篩選結(jié)果
        4.1.5 篩選藥物負(fù)向調(diào)控PD-L1膜蛋白水平以及PD-1/PD-L1相互作用
    4.2 EGFR調(diào)控PD-L1膜蛋白降解以及與PD-1的相互作用
        4.2.1 EGFR抑制劑降低H1975細(xì)胞PD-L1膜蛋白水平
        4.2.2 EGFR抑制劑增強(qiáng)H1975細(xì)胞PD-L1膜蛋白降解
        4.2.3 EGFR正向調(diào)控PD-L1膜蛋白水平
        4.2.4 ES-072相較于AZD9291的優(yōu)勢(shì)
        4.2.5 ES-072主要通過EGFR信號(hào)通路增強(qiáng)對(duì)PD-L1膜蛋白的降解
    4.3 S279/S283磷酸化調(diào)控PD-L1膜蛋白降解以及與PD-1的相互作用
        4.3.1 PD-L1膜蛋白降解依賴于磷酸化
        4.3.2 質(zhì)譜鑒定PD-L1膜蛋白磷酸化位點(diǎn)
        4.3.3 ES-072介導(dǎo)的PD-L1膜蛋白降解依賴其胞內(nèi)段S279/S283磷酸化
        4.3.4 S279/S283調(diào)控PD-L1膜蛋白與K48泛素的相互作用
        4.3.5 S279/S283調(diào)控PD-L1膜蛋白和PD-1之間的相互作用
    4.4 PD-L1膜蛋白是GSK3α的直接磷酸化底物
        4.4.1 GSK3β并非糖基化PD-L1膜蛋白的激酶
        4.4.2 GSK3α可能為糖基化PD-L1膜蛋白的激酶
        4.4.3 GSK3α與糖基化PD-L1以及非糖基化PD-L1都存在相互作用
        4.4.4 p-PD-L1(S279)抗體的功能驗(yàn)證
        4.4.5 GSK3α直接磷酸化PD-L1膜蛋白,作用位點(diǎn)為S279/S283
        4.4.6 GSK3α負(fù)向調(diào)控PD-L1膜蛋白水平
        4.4.7 GSK3α負(fù)向調(diào)控PD-L1膜蛋白和PD-1之間的相互作用
    4.5 ES-072體內(nèi)抗腫瘤效果
        4.5.1 EGFR抑制劑降低TAM中PD-L1膜蛋白水平
        4.5.2 ES-072有效控制小鼠體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)
        4.5.3 ES-072有效控制人體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)
    4.6 本研究闡述的模型
    4.7 總結(jié)和討論
參考文獻(xiàn)(References)
附錄1 常用緩沖液及培養(yǎng)基配方
附錄2 質(zhì)粒克隆所用引物
附錄3 siRNA序列
第五章 綜述 免疫檢查點(diǎn)阻斷法治療肺癌:當(dāng)前局勢(shì)和未來展望
    參考文獻(xiàn)(References)
作者簡(jiǎn)歷及博士期間科研成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]非小細(xì)胞肺癌的免疫治療現(xiàn)狀[J]. 田林曉,李小光.  中外醫(yī)療. 2015(31)



本文編號(hào)：3715744