目的Caspase依賴的細胞凋亡是細胞死亡很重要的方式,同時也是多種抗腫瘤治療共同激活的效應(yīng)途徑。Caspase-8作為起始的凋亡蛋白已經(jīng)廣為人知,但是最近很多研究發(fā)現(xiàn)了caspase-8還有其他的功能。細胞死亡是一個多細胞器參與的生命活動,細胞通過各種方式相互調(diào)節(jié),來清除已經(jīng)發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的損害的細胞。溶酶體,作為細胞回收中心,為腫瘤細胞活躍代謝提供物質(zhì)基礎(chǔ)�？焖俚姆至押颓忠u的癌細胞嚴重依賴有效的溶酶體功能,除此之外,富含蛋白水解酶的溶酶體也輔助參與細胞死亡過程。本研究探究了與腫瘤細胞存亡相關(guān)的caspase-8的非凋亡的功能,通過阻斷正反饋的級聯(lián)放大的凋亡作用,尋找其新的死亡機制。探求其與溶酶體穩(wěn)態(tài)失衡的關(guān)系,溶酶體功能失調(diào)的表現(xiàn)以及調(diào)控方式,caspase-8如何協(xié)同溶酶體促進腫瘤細胞死亡的分子機制,為腫瘤治療提供新的策略。最后為caspase-8衍生短肽靶向溶酶體治療提供理論基礎(chǔ)。方法1.本研究利用CRISPR/Cas9技術(shù),在腫瘤細胞的基因?qū)用嫔弦灰磺贸枰芯康腸aspase蛋白,并通過基因組測序,蛋白水平,以及功能層面上驗證敲除的有效性,消除了Knock down所導(dǎo)致的微... 

【文章頁數(shù)】：124 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

HeLa敲除細胞的驗證敲除的HeLa細胞系在50ng/mlTNF-α聯(lián)合10ug/mlCHX刺激20小時后，顯微鏡觀察拍照(a)，檢測細胞存活(b)；（c）Westernblot檢測HeLa敲除細胞系蛋白水平的表達；（d）敲除的HeLa細胞系在10μMABT737刺激30小時，檢測細

MCF-7敲除細胞的驗證（a）敲除caspase-7的MCF-7細胞系在50ng/mlTNF-α刺激20小時，檢測細胞

在HeLa以及MCF-7中，保護線粒體可以抵抗外源凋亡刺激Westernblot驗證穩(wěn)定降表達Bid和Bax細胞系，蛋白表達情況：HeLa(a)，MCF-7（c）;（b）上述HeLa降表達細胞系在50ng/mlTNF-α聯(lián)合10ug/mlCHX刺激12小時后的細胞存活；（d）穩(wěn)定過表達Bcl-2以及Bcl-xL的MCF-7細胞系兩種

【參考文獻】：
期刊論文
[1]細胞自噬與凋亡的交互作用[J]. 付晶晶,段君凱,李紅.  生命的化學(xué). 2014(05)



本文編號：3708242