研究背景及意義:皮膚是機體最大的外部器官,極易遭受各類創(chuàng)傷。因此,皮膚的損傷修復一直是醫(yī)學領域研究的熱點與難點問題。皮膚創(chuàng)面的愈合是一個復雜的過程,包括了止血期、炎癥期、增殖期和重塑期在內有序發(fā)生并且相繼重疊的四個階段。除了傳統(tǒng)的皮片/皮瓣移植外,組織工程皮膚、生長因子、光治療等新型手段也被應用于皮膚創(chuàng)傷的修復治療。但由于治療費用昂貴,材料儲存條件苛刻,治療效果因人而異,涉及醫(yī)學倫理問題,存在潛在致癌風險等一系列缺陷以及患者與日俱增的需求,研究并開發(fā)新的皮膚缺損治療方法具有重要的意義。巨噬細胞作為免疫系統(tǒng)的重要組成部分,不僅能夠快速應答、抵御外界物質對機體的入侵,同時在多種組織器官的損傷后修復和再生過程中發(fā)揮關鍵的調控作用。巨噬細胞除了能夠在外周神經(jīng)、腦、腎臟、肌肉及骨骼損傷過程中分泌生長因子,激活信號通路并促進其修復過程,還通過發(fā)揮其吞噬作用,清除受損的壞死組織,防止損傷進一步擴大。缺乏巨噬細胞會直接干擾有尾兩棲類脊椎動物附肢再生過程中芽基組織的生成,進而影響整個修復過程,使受損部位不能夠再生出正常附肢。但在皮膚組織損傷修復過程中,巨噬細胞發(fā)揮的作用尚不明確。基于這些背景,本研究首先... 

【文章頁數(shù)】：143 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語對照表
第一章 緒論
    1.1 皮膚組織的基本結構與損傷修復
        1.1.1 皮膚的生理和解剖學結構
        1.1.2 皮膚損傷修復過程
    1.2 巨噬細胞
        1.2.1 巨噬細胞的發(fā)育
        1.2.2 巨噬細胞的分類
        1.2.3 皮膚組織內的巨噬細胞
    1.3 巨噬細胞與組織修復及再生
        1.3.1 巨噬細胞與神經(jīng)及血管再生
        1.3.2 巨噬細胞與骨損傷愈合
        1.3.3 巨噬細胞與臟器損傷修復
        1.3.4 巨噬細胞與肌肉損傷修復
        1.3.5 巨噬細胞與附肢再生
    1.4 皮膚損傷修復的治療手段及優(yōu)缺點
        1.4.1 移植及組織工程皮膚
        1.4.2 生長因子局部給藥治療
        1.4.3 細胞療法
        1.4.4 其他治療方式
    1.5 本實驗的研究意義與技術路線
第二章 巨噬細胞在皮膚傷口愈合過程中的分布情況觀察
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗主要儀器
        2.2.2 實驗試劑及耗材
        2.2.3 實驗主要溶液配制方法
        2.2.4 數(shù)據(jù)采集及分析軟件
    2.3 實驗方法
        2.3.1 皮膚缺損及皮膚組織樣品的收集
        2.3.2 皮膚組織樣品的石蠟包埋與切片
        2.3.3 免疫組織化學染色
        2.3.4 組織切片的H&E染色
        2.3.5 大體照片的拍攝及修復面積數(shù)據(jù)統(tǒng)計方式
    2.4 實驗結果
        2.4.1 小鼠背部皮膚缺損后的愈合情況觀察
        2.4.2 小鼠背部皮膚缺損的再上皮化過程觀察
        2.4.3 小鼠皮膚修復過程中的巨噬細胞分布情況
    2.5 本章小結與討論
第三章 巨噬細胞在皮膚傷口愈合過程中的作用及其機理
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗主要儀器
        3.2.2 實驗試劑及耗材
        3.2.3 實驗主要溶液配制方法
        3.2.4 數(shù)據(jù)采集及分析軟件
    3.3 實驗方法
        3.3.1 巨噬細胞剔除小鼠皮膚缺損模型的建立
        3.3.2 皮膚組織樣品的收集
        3.3.3 皮膚組織樣品的石蠟包埋與切片
        3.3.4 免疫組織化學染色(HRP顯色)
        3.3.5 組織切片的H&E染色
        3.3.6 組織切片的Masson三色染色
        3.3.7 組織切片的天狼星紅染色
        3.3.8 組織總RNA的提取及c DNA的合成
        3.3.9 引物設計及相關基因表達水平的RT-qPCR檢測
        3.3.10 組織總蛋白的提取及處理
        3.3.11 ELISA法檢測相關蛋白水平表達量
    3.4 實驗結果
        3.4.1 剔除巨噬細胞組小鼠的皮膚缺損修復率統(tǒng)計結果
        3.4.2 剔除巨噬細胞組小鼠的再上皮化情況
        3.4.3 剔除巨噬細胞組小鼠的膠原沉積分析
        3.4.4 剔除巨噬細胞組小鼠的白細胞分布情況
        3.4.5 剔除巨噬細胞組小鼠修復過程中相關基因的表達分析
        3.4.6 剔除巨噬細胞組小鼠修復相關因子蛋白水平表達分析
    3.5 本章小結與討論
第四章 注射 GM-CSF 對小鼠皮膚缺損修復的影響
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 實驗主要儀器
        4.2.2 實驗試劑及耗材
        4.2.3 實驗溶液配制方法
        4.2.4 數(shù)據(jù)采集及分析軟件
    4.3 實驗方法
        4.3.1 巨噬細胞升高小鼠皮膚缺損模型的建立
        4.3.2 皮膚組織樣品的收集
        4.3.3 皮膚組織樣品的石蠟包埋與切片
        4.3.4 免疫組織化學染色
        4.3.5 組織切片的H&E染色
        4.3.6 組織切片的Masson染色
        4.3.7 組織總RNA的提取及c DNA的合成
        4.3.8 引物設計及相關基因表達水平的RT-qPCR檢測
        4.3.9 外周血流式細胞樣品的處理
    4.4 實驗結果
        4.4.1 注射GM-CSF后小鼠外周血單核-巨噬細胞數(shù)目變化情況
        4.4.2 GM-CSF注射組小鼠皮膚缺損修復率統(tǒng)計
        4.4.3 GM-CSF注射組小鼠再上皮化情況
        4.4.4 GM-CSF注射組小鼠膠原沉積情況
        4.4.5 GM-CSF注射組小鼠白細胞分布情況
        4.4.6 GM-CSF注射組小鼠修復相關因子的基因水平表達分析
    4.5 本章小結與討論
第五章 GM-CSF作用下小鼠修復過程中的蛋白組學研究
    5.1 引言
    5.2 實驗材料
        5.2.1 實驗主要儀器
        5.2.2 實驗試劑及耗材
        5.2.3 實驗溶液配制方法
        5.2.4 數(shù)據(jù)采集及分析軟件
    5.3 實驗方法
        5.3.1 組織樣品的收集
        5.3.2 組織總蛋白的提取
        5.3.3 蛋白BCA定量
        5.3.4 多肽段樣品的準備
    5.4 實驗結果
        5.4.1 GO注釋及基因功能富集分析
        5.4.2 KEGG通路分析
        5.4.3 蛋白-蛋白互作分析
    5.5 本章小結與討論
全文總結與展望
參考文獻
附錄
攻讀博士學位期間取得科研成果
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]皮膚創(chuàng)面修復治療的研究進展[J]. 孫桂芳,張曉芬,陳亞峰,奉典旭.  醫(yī)學綜述. 2015(18)
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[3]Meek植皮法治療特大面積燒傷[J]. 徐慶連,蔡晨,余又新,唐益忠,胡德林,劉晟,戚偉偉,時婕.  中國修復重建外科雜志. 2010(06)
[4]皮片和皮瓣移植在面部、頸部、手部及其他功能部位燒傷瘢痕修復中的應用[J]. 張會生.  中國組織工程研究與臨床康復. 2007(25)



本文編號：3697621