本文關(guān)鍵詞：麻黃—桂枝藥對(duì)配伍對(duì)麻黃堿引起的大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒副作用的保護(hù)機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景麻黃湯是中醫(yī)治療風(fēng)寒表實(shí)證的經(jīng)典方劑,在臨床中應(yīng)用廣泛。其中,麻黃和桂枝是發(fā)揮藥效的主要藥味,在原方中的配伍比例為3：2。大量的實(shí)驗(yàn)研究表明,麻黃-桂枝配伍可以增強(qiáng)藥物的發(fā)汗作用,緩解患者的發(fā)熱、鼻塞、咳喘等癥狀。中藥麻黃來(lái)源于麻黃科植物草麻黃Ephedra sinica Stapf\中麻黃Ephedra intermedia Schrenk et C. M. Mey.或木賊麻黃Ephedra equisetina Bge.的干燥草質(zhì)莖。麻黃類生物堿是麻黃的主要有效成分,含量為0.5-2.5%。其中,麻黃堿占30-90%。麻黃在中國(guó)歷史上使用時(shí)間長(zhǎng)久,可用于治療各種呼吸系統(tǒng)疾病。并且,無(wú)論在臨床應(yīng)用中還是病例文獻(xiàn)報(bào)道上都很少有關(guān)于過(guò)量使用麻黃造成毒副作用的記錄�！吨袊�(guó)藥典》一部(2010年版)也未將麻黃列入具有毒性的中藥材。這表明在中醫(yī)理論指導(dǎo)下合理使用麻黃是相對(duì)安全的。然而,現(xiàn)在西方國(guó)家不斷有病例文獻(xiàn)報(bào)道,過(guò)量或長(zhǎng)期使用麻黃容易引起明顯的毒副作用。麻黃堿是苯丙胺類生物堿,在藥理作用上與右旋苯丙胺和甲基苯丙胺相似。它是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮劑,可以引起失眠、精神不安、顫動(dòng)及焦慮。長(zhǎng)期大劑量使用麻黃堿可能會(huì)造成嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)疾病,比如妄想癥、幻覺(jué)及其它精神障礙。有文獻(xiàn)報(bào)道稱,長(zhǎng)期使用麻黃可以造成死亡。我們前期研究發(fā)現(xiàn),長(zhǎng)期灌胃給予大鼠麻黃提取物可以造成明顯的神經(jīng)細(xì)胞凋亡。其中,額葉皮層是毒性反應(yīng)最為敏感的腦區(qū)。桂枝來(lái)源于樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl的干燥嫩枝�！吨袊�(guó)藥典》一部(2010年版)將桂皮醛作為中藥材桂枝的質(zhì)量監(jiān)控指標(biāo)。文獻(xiàn)研究表明,桂皮醛具有鎮(zhèn)靜、抗氧化和抑制神經(jīng)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的作用。并且,桂枝提取物中的其它一些成分也具有類似的神經(jīng)保護(hù)作用,例如香豆素類等。鑒于桂枝提取物具有顯著的神經(jīng)保護(hù)作用,我們推測(cè)麻黃-桂枝配伍使用時(shí),桂枝可能表現(xiàn)出類似的神經(jīng)保護(hù)作用,尤其是對(duì)于額葉皮層區(qū)域。復(fù)方是中醫(yī)藥的重要組成部分和應(yīng)用形式。藥對(duì)通常有兩味中藥組成,是最簡(jiǎn)單的復(fù)方配伍形式�！秱摗泛汀督饏T要略》中記載有大量的藥對(duì)配伍。根據(jù)配伍的作用,可以分為單行、相須、相使、相畏、相殺、相惡、相反等,也叫“七情合和”。但是,在文獻(xiàn)古籍中記載最多、應(yīng)用最廣泛的是相須配伍。相須是指性能功效相類似的兩味中藥配伍使用(一般只討論兩味中藥之間,當(dāng)然也可以多種),可以增強(qiáng)某種或幾種治療效應(yīng),增強(qiáng)治療作用。也就是相對(duì)于單獨(dú)使用其中一味中藥,藥對(duì)配伍可以增強(qiáng)其功效,增強(qiáng)的功效可能是一種也可能不止一種。麻黃-桂枝藥對(duì)在麻黃湯原方中就是經(jīng)典的相須配伍使用的藥對(duì)。有關(guān)麻黃-桂枝藥對(duì)的相須作用,前人已經(jīng)做了大量的研究工作。但是,由于麻黃的毒副作用,目前麻黃的使用只能由具備醫(yī)師資格的專業(yè)人員開(kāi)具處方。然而,我們認(rèn)為麻黃-桂枝藥對(duì)配伍除了具有相須作用外,可能還存在相殺的作用。這也可能是麻黃作為中藥在臨床使用中相對(duì)安全的一個(gè)重要原因。研究目的“七情合和”是中藥配伍的基本理論。藥材之間存在著潛在的協(xié)同或制約合和關(guān)系,除不能配伍使用的相反、相惡外,這些關(guān)系被分解為相須、相使、相畏、相殺。藥對(duì)配伍受藥材性味、歸經(jīng)、功效的影響,其中劑量和配比是關(guān)鍵的影響因素,量的漸變可引起藥材相互關(guān)系的質(zhì)變。我們課題組在中醫(yī)理論指導(dǎo)下,以麻黃作為研究對(duì)象,對(duì)麻黃及麻黃類藥對(duì)、復(fù)方進(jìn)行了長(zhǎng)期大量的實(shí)驗(yàn)研究工作,掌握了其相關(guān)毒理學(xué)、藥理學(xué)、藥動(dòng)學(xué)、藥代學(xué)的一些規(guī)律。前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,麻黃可以影響動(dòng)物的中樞神經(jīng)功能,出現(xiàn)興奮性行為變化。進(jìn)一步研究表明,麻黃對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用與其影響氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)釋放有關(guān)。麻黃可以上調(diào)興奮性氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的釋放,減少抑制性神經(jīng)遞質(zhì)釋放的比例,麻黃堿是其作用的主要成分。麻黃與桂枝配伍使用后,桂枝可以拮抗麻黃引起的興奮性行為學(xué)差異,調(diào)節(jié)氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)的釋放,減弱麻黃引起的興奮性中樞神經(jīng)毒性。本研究在前期工作的基礎(chǔ)上,為進(jìn)一步揭示桂枝的中樞神經(jīng)系統(tǒng)保護(hù)作用,驗(yàn)證麻黃-桂枝配伍使用的合理性,減少麻黃臨床應(yīng)用的不良反應(yīng),特作以下研究。研究方法根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),以SD大鼠作為研究對(duì)象,6g/kg是麻黃灌胃給藥的有效劑量,15g/kg是毒性成分變化的敏感劑量。在此基礎(chǔ)上,以略高于有效劑量作為麻黃毒理給藥劑量的低劑量,等比設(shè)置低、中、高劑量組(7.5、15、30g/kg)。根據(jù)麻黃湯的原方配比,分別設(shè)置麻黃-桂枝3：1組、麻黃-桂枝3：2組、麻黃-桂枝3：4組。按桂枝與麻黃配比的不同,設(shè)置桂枝單味給藥的高、中、低劑量組。另設(shè)生理鹽水空白對(duì)照組和麻黃堿陽(yáng)性對(duì)照組,則本實(shí)驗(yàn)共涉及動(dòng)物給藥組11組,每組動(dòng)物6只。本課題的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)自南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,許可證號(hào)：SCXK(粵)2011-0015。1麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)麻黃堿體外溶出的影響及動(dòng)物給藥劑量的確定建立HPLC測(cè)定水提液中麻黃堿含量的方法,并進(jìn)行方法學(xué)考察。分別測(cè)定單味麻黃和麻黃-桂枝配伍組(3：1,3：2,3：4)水提液的麻黃堿含量,考察藥對(duì)配伍對(duì)體外麻黃堿溶出的影響。在此基礎(chǔ)上,以水提液中麻黃堿含量作為量化指標(biāo),進(jìn)一步通過(guò)濃縮和稀釋等手段,使不同組別供試藥的麻黃堿含量保持一致,確定動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的給藥劑量。2麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)SD大鼠行為學(xué)的影響分別灌胃(ig)給予大鼠生理鹽水和各劑量供試藥,記錄大鼠在ig前及ig后1、2、4、6、8h時(shí)5min內(nèi)的活動(dòng)情況。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中觀察記錄大鼠的行為變化。通過(guò)考察SD大鼠灌胃給藥后8h內(nèi)的行為學(xué)參數(shù)變化,考察不同劑量麻黃、桂枝和麻黃-桂枝配伍組(3：1,3：2,3：4)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用。采用戊巴比妥鈉睡眠試驗(yàn),分別灌胃(ig)給予大鼠生理鹽水和各劑量供試藥。給藥45min后各組分別腹腔注射(ip)2%戊巴比妥鈉40mg/kg,觀察大鼠睡眠情況,記錄睡眠潛伏期、睡眠持續(xù)時(shí)間。麻醉后20min,用手觸摸左右眼睫毛觀察睫毛反射；用針刺激實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腿部肌肉觀察刺痛反應(yīng)。采用高架橋試驗(yàn),分別灌胃(ig)給予大鼠生理鹽水和各劑量供試藥。ig后1h時(shí)將大鼠從中央格面向閉合臂放入迷宮,記錄5mmin內(nèi)的活動(dòng)情況。觀察開(kāi)放臂進(jìn)入次數(shù)(必須有兩只前爪進(jìn)入臂內(nèi))(open arm entry, OE),開(kāi)放臂停留時(shí)間(open arm time, OT),閉合臂進(jìn)入次數(shù)(close arm entry, CE)。計(jì)算開(kāi)放臂進(jìn)入次數(shù)比例及總進(jìn)入次數(shù)。采用曠場(chǎng)試驗(yàn),分別灌胃(ig)給予大鼠生理鹽水和各劑量供試藥,每天一次,連續(xù)ig7天。每次給藥后,記錄大鼠在ig后1h時(shí)5min內(nèi)的活動(dòng)情況,計(jì)算每天的總運(yùn)動(dòng)路程�？疾齑笫笫状谓o藥的跨格數(shù)(水平得分)、站立次數(shù)(垂直得分)、總運(yùn)動(dòng)路程、區(qū)域停留時(shí)間等相關(guān)參數(shù)。3麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)大鼠額葉皮層的組織結(jié)構(gòu)及氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)的影響分別灌胃(ig)給予大鼠生理鹽水和各劑量供試藥,連續(xù)ig7天。末次灌胃給藥結(jié)束后,開(kāi)顱取腦。一部分放入盛有10%中性甲醛的瓶中固定,常規(guī)脫水、透明、石蠟包埋,冠狀切片,每張切片厚3um,選取含額葉皮層的切片進(jìn)行HE染色,考察不同劑量麻黃、桂枝和麻黃-桂枝配伍組(3：1,3：2,3：4)對(duì)大鼠額葉皮層的組織結(jié)構(gòu)的影響；另一部分放于冷凍的生理鹽水中漂洗,研磨勻漿后,采用生物試劑盒測(cè)定額葉皮層組織的丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活力。4麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)大鼠額葉皮層組織中麻黃堿含量及氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)釋放的影響建立UPLC-ESI-MS/MS測(cè)定大鼠額葉皮層組織樣品中麻黃堿和谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)、天冬氨酸(Asp)及甘氨酸(Gly)等氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量的方法,并進(jìn)行方法學(xué)確證。在此基礎(chǔ)初上,分別灌胃(ig)給予大鼠生理鹽水和各劑量供試藥,連續(xù)ig7天,測(cè)定額葉皮層組織中麻黃堿的蓄積情況和氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的含量變化,考察染毒不同時(shí)期麻黃堿對(duì)大鼠額葉皮層氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)釋放的作用,以及藥對(duì)配伍對(duì)其作用的影響。5 PK-PD聯(lián)合模型法研究麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用建立UPLC-ESI-MS/MS測(cè)定大鼠血液透析液和腦透析液樣品中麻黃堿含量及腦透析液中谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)等氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量的方法,并進(jìn)行方法學(xué)確證。借助微透析采樣技術(shù),以麻黃堿在大鼠血液和腦脊液中的濃度變化為藥動(dòng)學(xué)觀察指標(biāo)(PK),以氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的動(dòng)態(tài)變化為藥效學(xué)指標(biāo)(PD),科學(xué)地闡明麻黃堿在大鼠額葉皮層的濃度-效應(yīng)-時(shí)間三維關(guān)系,擬合藥物濃度及其效應(yīng)經(jīng)時(shí)過(guò)程的曲線,考察藥對(duì)配伍對(duì)麻黃堿體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)和藥效動(dòng)力學(xué)的影響。6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理運(yùn)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±SD)表示。多組之間主要藥效學(xué)參數(shù)的均數(shù)比較采用單向方差分析(One-Way ANOVA);第二章中的重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)采用重復(fù)測(cè)量資料的方差分析；麻黃與桂枝間的交互作用及第四章的測(cè)量數(shù)據(jù)采用析因方差分析；雙側(cè)檢驗(yàn)P0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PK-PD模型擬合采用Winnonlin4.0.1軟件進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)麻黃堿體外溶出的影響本部分成功建立了HPLC測(cè)定水提液中麻黃堿含量的方法：色譜柱為苯基柱(Agilent Eclipse XDB—Phenyle,250mmX4.6mm);流動(dòng)相為0.02mo1*L1磷酸二氫鉀溶液—乙腈(96：4)；流速0.6ml min-1;柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。該方法精密度高,重現(xiàn)性和穩(wěn)定性良好；提取回收率符合樣品的檢測(cè)要求；分離度高,無(wú)其它成分的干擾。隨著桂枝配伍比例的增加,麻黃中麻黃堿的體外溶出顯著減少。其中,麻黃-桂枝3：2組和3：4組與麻黃單煎液比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),說(shuō)明藥對(duì)配伍可以影響麻黃毒性成分的溶出。2麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)SD大鼠行為學(xué)的影響麻黃對(duì)SD大鼠具有顯著的中樞興奮作用；桂枝具有顯著的鎮(zhèn)靜作用；麻黃-桂枝藥對(duì)配伍后,隨著桂枝給藥劑量的增加,大鼠的興奮性行為顯著減少。給藥1h后,麻黃低劑量組和中劑量大鼠與生理鹽水組大鼠相比,自主活動(dòng)增加,站立次數(shù)和嗅探次數(shù)減少；麻黃高劑量組大鼠給藥后,大鼠自主行為和探索行為都顯著減少,主要集中在曠場(chǎng)的角落活動(dòng),說(shuō)明高劑量的麻黃已經(jīng)影響了大鼠的正常生理功能。桂枝低劑量組和中劑量組大鼠無(wú)顯著的行為學(xué)變化,桂枝高劑量組大鼠出現(xiàn)了顯著的鎮(zhèn)靜行為,主要表現(xiàn)為給藥時(shí)間在1-4h時(shí)機(jī)警性和自主活動(dòng)減少,站立次數(shù)和嗅探次數(shù)增加。麻黃-桂枝3：1配伍組給藥1-4h時(shí),與生理鹽水組相比興奮性行為顯著,與麻黃堿組大鼠相比行為學(xué)無(wú)顯著差異；麻黃-桂枝3：2和3：4配伍組在給藥1-4h時(shí),與麻黃堿組大鼠相比興奮性作用減弱。戊巴比妥鈉睡眠試驗(yàn)結(jié)果表明,麻黃堿可以延長(zhǎng)戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠潛伏期,縮短睡眠持續(xù)時(shí)間。麻黃的藥理作用與麻黃堿相似,且與麻黃堿含量成正相關(guān)。與生理鹽水組相比,麻黃高、中、低劑量組大鼠睡眠潛伏期顯著延長(zhǎng),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均為0.000)；大鼠的睡眠持續(xù)時(shí)間顯著縮短(P值分別為0.000,0.000,0.049)。與麻黃堿組相比,麻黃低、高、中劑量組大鼠睡眠潛伏期差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.288,0.691,0.103)；麻黃高、中劑量組大鼠睡眠持續(xù)時(shí)間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.625,0.195),麻黃低劑量組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。桂枝可以協(xié)同戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠實(shí)驗(yàn),縮短大鼠的睡眠潛伏期,增加睡眠時(shí)間。但是,與生理鹽水組相比,桂枝低、中劑量組無(wú)明顯變化；桂枝高劑量組睡眠潛伏期無(wú)顯著性差異(P=0.170),睡眠持續(xù)時(shí)間有顯著性差異(P=0.000)。麻黃-桂枝藥對(duì)配伍后,與麻黃堿組相比,隨著桂枝比例的增加大鼠睡眠潛伏期顯著縮短,睡眠持續(xù)時(shí)間顯著延長(zhǎng)。其中,藥對(duì)3：1組睡眠潛伏期平均縮短了78.67s,睡眠持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)了15.17min,差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.005,0.006)；藥對(duì)3：2組睡眠潛伏期平均縮短了88.34s,睡眠持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)了26.00min,差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.004,0.000)；藥對(duì)3：4組睡眠潛伏期平均縮短了95.17s,睡眠持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)了34.83min,差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.002,0.000)。麻黃堿可以減少大鼠進(jìn)入高架橋開(kāi)臂的次數(shù)和停留時(shí)間,增加大鼠的焦慮情緒,但組間無(wú)顯著性差異(F=1.833,P=0.154；F=1.679,P=0.186)。麻黃可以減少大鼠進(jìn)入高架橋開(kāi)臂的次數(shù)和停留時(shí)間,與麻黃堿作用一致,且與給藥劑量成正相關(guān)。與生理鹽水組和麻黃堿組相比,桂枝高、中、低劑量組大鼠進(jìn)入開(kāi)臂的次數(shù)和停留時(shí)間顯著增加,且與桂枝給藥量成正相關(guān)。桂枝低劑量組與生理鹽水組相比,開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)平均增加1.00次,開(kāi)臂停留時(shí)間增加6.23s,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.044,0.006)；桂枝中劑量組大鼠開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)平均增加2.50次,開(kāi)臂停留時(shí)間增加9.00s,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均為0.000)；桂枝高劑量組大鼠開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)平均增加4.67次,開(kāi)臂停留時(shí)間增加15.67s,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均為0.000)。麻黃-桂枝藥對(duì)配伍后,相比麻黃堿組,藥對(duì)配伍組大鼠進(jìn)入高架橋開(kāi)臂的次數(shù)和停留時(shí)間顯著增加,說(shuō)明桂枝緩解了麻黃堿引起的焦慮情緒。但是,藥對(duì)配伍組與生理鹽水組和麻黃堿組大鼠相比,進(jìn)入高架橋開(kāi)臂的次數(shù)均無(wú)顯著性差異(P值分別為0.087,0.660,0.193；1.000,0.193,0.005)。不同組別大鼠進(jìn)入開(kāi)臂的停留時(shí)間,組間無(wú)顯著性差異(F=1.836,P=0.153)。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中,麻黃堿組大鼠自主活動(dòng)顯著增加,探索性行為顯著減少,進(jìn)入中央?yún)^(qū)域的次數(shù)和站立次數(shù)顯著減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均為0.000)；與生理鹽水組相比,麻黃低劑量組大鼠的自主活動(dòng)增加,探索性行為減少；麻黃中劑量組大鼠的自主活動(dòng)顯著增加(P=0.000),探索性行為減少,外圍停留時(shí)間顯著增加(P=0.014)。與麻黃堿組相比,麻黃低劑量組大鼠的運(yùn)動(dòng)距離和外圍停留時(shí)間較少(P值均為0.000),而麻黃中劑量組大鼠的運(yùn)動(dòng)距離和外圍停留時(shí)間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.716,0.155)。桂枝低劑量組大鼠自主活動(dòng)顯著減少(P=0.020),站立次數(shù)和跨格數(shù)增加,但是差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.257,0.064)；桂枝中劑量組大鼠自主活動(dòng)顯著減少,平均運(yùn)動(dòng)距離減少4.84m(P=0.001),跨格數(shù)增加(P=0.034)；桂枝高劑量組大鼠自主活動(dòng)顯著減少(P=0.000),站立次數(shù)平均增加6.50次,跨格數(shù)增加7.50次,中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間顯著增加(P值分別為0.041,0.000,0.000)。與生理鹽水組相比,藥對(duì)3：1組大鼠運(yùn)動(dòng)距離平均增加6.03m,站立次數(shù)減少9.53次,外圍停留時(shí)間增加,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.000,0.000,0.006)；藥對(duì)3：2組大鼠運(yùn)動(dòng)距離平均增加2.95m,站立次數(shù)減少6.17次,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.042,0.014)；而藥對(duì)3：4組大鼠的自主活動(dòng)和探索性行為均無(wú)顯著變化。與麻黃堿組相比,藥對(duì)3：1組大鼠的自主活動(dòng)顯著減少,平均運(yùn)動(dòng)距離減少3.82m,差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.010)。探索活動(dòng)顯著增加,站立次數(shù)增加4.50次,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.065)；藥對(duì)3：2組大鼠平均運(yùn)動(dòng)距離減少6.90m,站立次數(shù)增加8.00次,外圍停留時(shí)間顯著減少,差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.000,0.002)；藥對(duì)3：4組大鼠平均運(yùn)動(dòng)距離減11.39m,站立次數(shù)增加11.33次,外圍停留時(shí)間顯著減少,差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均為0.000)。3麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)大鼠額葉皮層的組織結(jié)構(gòu)及氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)的影響HE染色結(jié)果表明,生理鹽水組大鼠正常的神經(jīng)細(xì)胞,胞漿豐富,胞核清晰。麻黃堿組大鼠的神經(jīng)細(xì)胞核深染,固縮成三角形或不規(guī)則形,核仁不顯著或消失,染色質(zhì)邊集而使細(xì)胞核呈半月形(或新月形),為細(xì)胞凋亡的早期形態(tài)學(xué)改變。桂枝高、中、低劑量組大鼠的神經(jīng)細(xì)胞與生理鹽水組相比無(wú)顯著差異。麻黃低劑量組大鼠出現(xiàn)細(xì)胞核深染的現(xiàn)象,而中、高劑量組大鼠出現(xiàn)了顯著的核仁收縮現(xiàn)象。麻黃-桂枝3：1配伍組大鼠局部出現(xiàn)細(xì)胞核收縮現(xiàn)象,3：2配伍組部分細(xì)胞有核仁深染現(xiàn)象,3：4配伍組無(wú)顯著的細(xì)胞凋亡特征。麻黃堿組大鼠額葉皮層組織的MDA和NO含量顯著增加,SOD、CAT和GSH-Px活力顯著下降(P值均為0.000)。麻黃高、中、低劑量組大鼠額葉皮層組織的MDA和含量顯著增加,NO含量顯著增加,SOD、CAT和GSH-Px活力顯著降低。桂枝對(duì)大鼠額葉皮層無(wú)明顯的毒副作用,MDA和NO含量以及SOD、CAT和GSH-Px活力均無(wú)明顯變化。與麻黃堿組相比,藥對(duì)3：1配伍組大鼠的MAD含量,以及SOD、CAT和GSH-Px活力無(wú)顯著差異(P值分別為0.535,0.929,0.198,0.175),NO含量增加顯著(P=0.006)；藥對(duì)3：2配伍組大鼠的MDA和NO含量顯著減少,SOD、CAT增加顯著(P值分別為0.005,0.000,0.014,0.028),GSH-Px活力無(wú)顯著變化(P=0.078)；藥對(duì)3：4配伍組大鼠的MDA和NO含量顯著減少,SOD、CAT和GSH-Px活力顯著增加,差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均為0.000)。4麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)大鼠額葉皮層組織中麻黃堿蓄積及氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)釋放的影響本部分成功建立了UPLC-ESI-MS/MS測(cè)定大鼠額葉皮層組織樣品中麻黃堿和谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)、天冬氨酸(Asp)及甘氨酸(Gly)等氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量的方法,并進(jìn)行了方法學(xué)確證。麻黃-桂枝藥對(duì)配伍后影響了麻黃堿在大鼠額葉皮層的吸收分布,隨著桂枝配伍比例的升高,麻黃堿在額葉皮層的分布和代謝顯著加快,減少了麻黃堿的蓄積。同時(shí),通過(guò)測(cè)定不同給藥天數(shù)麻黃堿在大鼠額葉皮層的含量,證明單煎液和配伍組麻黃堿的代謝過(guò)程不隨給藥天數(shù)的不同發(fā)生變化。麻黃堿可以引起大鼠額葉皮層發(fā)生興奮性變化,迅速升高興奮性氨基酸含量,并且代償性出現(xiàn)抑制性氨基酸含量升高,最終導(dǎo)致氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)比例失調(diào)。其中,Glu和GABA含量變化相對(duì)Gly和Asp變化更加敏感。麻黃-桂枝藥對(duì)配伍后,桂枝可以抑制麻黃堿誘導(dǎo)的興奮性毒性。5 PK-PD聯(lián)合模型法研究麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用本部分成功建立了UPLC-ESI-MS/MS測(cè)定大鼠血液透析液和腦透析液樣品中麻黃堿含量及腦透析液中谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)等氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量的方法,并進(jìn)行了方法學(xué)確證。不同組別間血液藥動(dòng)學(xué)參數(shù)AUC、Tmax和Cmax無(wú)顯著性差異；配伍組與麻黃堿組和麻黃組相比,T1/2和MRT顯著縮短,Vz/F顯著降低,CLz/F顯著增加。不同組別間腦透析液中麻黃堿的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)AUC和Cmax無(wú)顯著性差異；配伍組與麻黃堿組和麻黃組相比,Tmax、T1/2和MRT顯著縮短,VZ/F顯著降低；與麻黃堿組相比,配伍組CLz/F顯著增加。通過(guò)PK-PD模型擬合,麻黃堿藥效指標(biāo)的最佳藥效動(dòng)力學(xué)模型為Sigmoid-Emax模型。以麻黃堿在大鼠腦脊液中的濃度變化為藥動(dòng)學(xué)觀察指標(biāo)(PK),以氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量的動(dòng)態(tài)變化為藥效學(xué)指標(biāo)(PD),各組Glu的E-C曲線均呈順時(shí)針環(huán),各組GABA的E-C曲線均呈逆時(shí)針環(huán)。結(jié)論1通過(guò)考察藥對(duì)配伍對(duì)麻黃堿體外溶出的影響,表明麻黃-桂枝藥對(duì)配伍后麻黃堿的體外溶出顯著降低,呈現(xiàn)規(guī)律性變化,可能是藥對(duì)配伍減毒的作用機(jī)制之一。2通過(guò)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)和戊巴比妥鈉睡眠試驗(yàn)等實(shí)驗(yàn),表明桂枝和麻黃均可影響大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能,在一定劑量范圍內(nèi)與給藥量成正相關(guān)。麻黃可以興奮大鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng),出現(xiàn)自主活動(dòng)增加、焦躁不安的興奮性毒副作用。桂枝具有鎮(zhèn)靜和抗焦慮作用,可以增加大鼠的探索性活動(dòng)。麻黃-桂枝藥對(duì)配伍后,桂枝可以拮抗麻黃的興奮性毒副作用,使大鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能趨于正常。麻黃堿是麻黃產(chǎn)生興奮性毒性的主要成分。3通過(guò)病理切片制作和氧化應(yīng)激指標(biāo)測(cè)定,表明連續(xù)口服麻黃堿可以造成大鼠額葉皮層部位的組織損傷,出現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞凋亡、氧化應(yīng)激產(chǎn)物增加、抗氧化酶活力降低的毒性反應(yīng)。桂枝對(duì)大鼠額葉皮層無(wú)顯著的毒副作用。麻黃-桂枝藥對(duì)配伍以后,麻黃堿誘導(dǎo)的毒性反應(yīng)顯著得到抑制。4通過(guò)測(cè)定組織中麻黃堿和氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的含量變化,表明麻黃堿可以引起興奮性氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)升高,多次灌胃給予大鼠麻黃堿可以產(chǎn)生耐受性；麻黃-桂枝藥對(duì)配伍后,興奮性氨基酸含量降低,抑制性氨基酸含量升高,說(shuō)明桂枝可以抑制麻黃堿誘導(dǎo)的興奮性毒性。5通過(guò)PK-PD模型擬合,麻黃堿藥效指標(biāo)的最佳藥效動(dòng)力學(xué)模型為Sigmoid-Emax模型。E-C曲線表明不同配伍組大鼠對(duì)麻黃堿均產(chǎn)生了顯著的耐受性,桂枝可以抑制麻黃堿引起的興奮性變化。
【關(guān)鍵詞】：麻黃 桂枝 藥對(duì) 中樞神經(jīng) 神經(jīng)保護(hù)
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5
【目錄】：

• 摘要4-14
• ABSTRACT14-28
• 前言28-39
• 第一章 麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)麻黃堿體外溶出的影響39-51
• 1 材料與儀器40-41
• 1.1 藥材40
• 1.2試劑40
• 1.3儀器與耗材40
• 1.4 藥液的制備40-41
• 2 方法41-43
• 3 結(jié)果與分析43-48
• 4 討論48-50
• 本章小結(jié)50-51
• 第二章 行為學(xué)考察51-88
• 第一節(jié) 單次灌胃給藥對(duì)大鼠中樞神經(jīng)功能行為參數(shù)的影響52-56
• 1 材料與儀器52-53
• 2 動(dòng)物及分組53
• 3 方法53-54
• 4 結(jié)果與分析54-55
• 5 討論55-56
• 第二節(jié) 戊巴比妥鈉睡眠實(shí)驗(yàn)56-63
• 1 材料與儀器56
• 2 動(dòng)物及分組56
• 3 方法56-57
• 4 結(jié)果與分析57-61
• 5 討論61-63
• 第三節(jié) 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)63-71
• 1 材料與儀器63
• 2 動(dòng)物及分組63
• 3 方法63-64
• 4 結(jié)果與分析64-69
• 5 討論69-71
• 第四節(jié) 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)71-86
• 1 材料與儀器71
• 2 動(dòng)物及分組71
• 3 方法71-72
• 4 結(jié)果與分析72-85
• 5 討論85-86
• 本章小結(jié)86-88
• 第三章 麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)大鼠額葉皮層的組織結(jié)構(gòu)及氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)的影響88-110
• 第一節(jié) 麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)大鼠額葉皮層組織結(jié)構(gòu)的影響89-95
• 1 材料與儀器89-90
• 2 動(dòng)物及分組90
• 3 方法90-91
• 4 結(jié)果與分析91-93
• 5 討論93-95
• 第二節(jié) 麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)大鼠額葉皮層氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)的影響95-109
• 1 材料與儀器95-96
• 2 動(dòng)物及分組96
• 3 方法96-101
• 4 結(jié)果與分析101-108
• 5 討論108-109
• 本章小結(jié)109-110
• 第四章 麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)大鼠額葉皮層組織中麻黃堿蓄積及氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)釋放的影響110-153
• 第一節(jié) 麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)大鼠額葉皮層組織中麻黃堿蓄積的影響111-124
• 1 材料與儀器111-113
• 2 動(dòng)物及分組113
• 3 方法113-115
• 4 結(jié)果與分析115-121
• 5 討論121-124
• 第二節(jié) 麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)大鼠額葉皮層組織中氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)釋放的影響124-152
• 1 材料與儀器124
• 2 動(dòng)物及分組124-125
• 3 方法125-127
• 4 結(jié)果與分析127-150
• 5 討論150-152
• 本章小結(jié)152-153
• 第五章 PK-PD聯(lián)合模型法研究麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用153-188
• 第一節(jié) 麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)大鼠血液中麻黃堿藥代動(dòng)力學(xué)的影響154-168
• 1 材料與儀器154-155
• 2 動(dòng)物及分組155-156
• 3 方法156-159
• 4 結(jié)果與分析159-165
• 5 討論165-168
• 第二節(jié) 麻黃-桂枝藥對(duì)配伍對(duì)大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用的PK-PD聯(lián)合模型分析168-187
• 1 材料與儀器168-169
• 2 動(dòng)物及分組169
• 3 方法169-172
• 4 結(jié)果與分析172-183
• 5 討論183-187
• 本章小結(jié)187-188
• 全文總結(jié)188-190
• 參考文獻(xiàn)190-197
• 附錄197-199
• 博士研究生期間成果199-200
• 致謝200-202
• 統(tǒng)計(jì)學(xué)證明202

  本文關(guān)鍵詞：麻黃—桂枝藥對(duì)配伍對(duì)麻黃堿引起的大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒副作用的保護(hù)機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：366752