本文關(guān)鍵詞：PI3K抑制劑聯(lián)合組蛋白去乙�；敢种苿⿲θ橄侔﹨f(xié)同殺傷作用的分子機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景：乳腺癌是全球女性最常見的惡性腫瘤之一。近年來我國乳腺癌的發(fā)病率上升趨勢明顯,高居女性惡性腫瘤發(fā)病率的第一位。盡管手術(shù)治療和術(shù)后多種輔助化療對患者的預(yù)后有明顯的改善,但是乳腺癌仍具有較高的復(fù)發(fā)率和死亡率。研究表明,乳腺癌的增殖及耐藥是導(dǎo)致患者死亡的主要原因。因此,明確乳腺癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制,尋找有效的治療靶點(diǎn)是延長乳腺癌患者生存時(shí)間的關(guān)鍵。分子靶向治療是當(dāng)今乳腺癌藥物治療的最新發(fā)展方向,目前已有分子靶向相關(guān)藥物應(yīng)用于臨床。最近研究表明,與單靶向治療相比,多靶點(diǎn)藥物聯(lián)合應(yīng)用顯示出更有效的治療作用。NVP-BEZ235是PI3K/mTOR雙靶點(diǎn)抑制劑,可有效抑制多種腫瘤的增殖；曲古霉素(TSA)為組蛋白去乙�；敢种苿�,是新型的抗腫瘤藥物。有關(guān)BEZ235與TSA聯(lián)合應(yīng)用在非小細(xì)胞肺癌及胰腺癌中的研究已有報(bào)道,但在乳腺癌中的作用及機(jī)制尚不清楚。前期研究發(fā)現(xiàn),PI3K通路及蛋白乙�；揎椩谌橄侔┑陌l(fā)生發(fā)展中起重要的作用,因此,深入研究BEZ235與TSA兩種抑制劑聯(lián)合應(yīng)用對乳腺癌的抑制作用及其分子機(jī)制有重要的臨床指導(dǎo)意義。研究目的：本研究通過體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測BEZ235和TSA聯(lián)合用藥對乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,并探討其協(xié)同抑制腫瘤增殖的作用及可能的分子機(jī)制,為乳腺癌靶向治療提供新的藥物選擇方案。材料和方法：通過MTT法觀察BEZ235、TSA單獨(dú)或聯(lián)合用藥對不同乳腺癌細(xì)胞系T47D, SKBR3, MDA-MB-231, MCF-7, MDA-MB-468, MDA-MB-453增殖情況的影響,分析BEZ235與TSA聯(lián)合用藥的協(xié)同作用；通過平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測聯(lián)合用藥對乳腺癌細(xì)胞增殖的抑制作用；通過劃痕實(shí)驗(yàn)觀察聯(lián)合用藥對細(xì)胞遷移能力的影響；通過基因芯片篩查發(fā)現(xiàn)單獨(dú)用藥與聯(lián)合用藥組乳腺癌細(xì)胞的差異基因表達(dá)譜,初步明確聯(lián)合用藥的可能作用機(jī)理；采用流式細(xì)胞術(shù)及Hoechst33342細(xì)胞核染色法檢測藥物處理后的乳腺癌細(xì)胞凋亡率的變化；Western blot方法檢測BEZ235及TSA處理后PI3K/Akt信號(hào)通路及HDAC相關(guān)蛋白的改變,并進(jìn)一步分析聯(lián)合用藥誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡與自噬相關(guān)因子的變化。結(jié)果：MTT結(jié)果顯示,BEZ235與TSA可協(xié)同抑制乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、T47D細(xì)胞的增殖；平板克隆實(shí)驗(yàn)顯示聯(lián)合用藥后,MCF-7、T47D細(xì)胞克隆形成能力明顯下降；劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明聯(lián)合用藥可明顯抑制MCF-7和T47D細(xì)胞的遷移能力；聯(lián)合基因芯片檢測結(jié)果表明聯(lián)合用藥可明顯改變?nèi)橄侔┘?xì)胞MCF-7生存及死亡信號(hào)通路相關(guān)mRNA表達(dá)情況；Hoechst33342染色結(jié)果顯示聯(lián)合用藥可誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞MCF-7、T47D的凋亡,同時(shí)流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果表明聯(lián)合用藥主要促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的晚期凋亡；Western blot結(jié)果顯示BEZ235及TSA聯(lián)合用藥可進(jìn)一步下調(diào)PBK/Akt/mTOR信號(hào)通路蛋白,上調(diào)PARP蛋白的表達(dá)及降低Bcl-2/bax比值,通過促進(jìn)caspase-3、8、9蛋白的活化誘導(dǎo)凋亡；同時(shí),聯(lián)合用藥可增加自噬標(biāo)志蛋白LC3B、Beclin1的表達(dá),經(jīng)過自噬抑制劑3-MA處理30分鐘后,聯(lián)合用藥組的LC3B表達(dá)下降,而caspase3和PARP的表達(dá)明顯增強(qiáng)。結(jié)論：1)BEZ235與TSA聯(lián)合用藥可協(xié)同抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖、克隆形成及遷移能力：2)BEZ235與TSA聯(lián)合用藥對乳腺癌細(xì)胞的協(xié)同抑制作用與PI3K/Akt/mTOR通路進(jìn)一步抑制有關(guān)；3)BEZ235與TSA聯(lián)合用藥協(xié)同抑制乳腺癌的作用與依賴caspase途徑誘導(dǎo)凋亡和促進(jìn)自噬形成均密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：乳腺癌 BEZ235 曲古抑菌素A 凋亡 自噬
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-13
• ABBREVIATIONS13-15
• 1. INTRODUCTION15-22
• 2. MATERIALS AND METHODS22-30
• 2.1 Materials22-24
• 2.1.1 Experimental reagents and instruments22-24
• 2.1.2 Cell culture24
• 2.1.3 Treatment for reagents24
• 2.2 Methods24-30
• 2.2.1 Cell viability assay24-25
• 2.2.2 Apoptosis assay25-26
• 2.2.3 Migration assay(Wound healing assay)26
• 2.2.4 Colony formation assay26-27
• 2.2.5 Immunofluorescence staining(IF)27
• 2.2.6 Protein isolation and Western blot analysis27-28
• 2.2.7 Hoechst staining28
• 2.2.8 Gene expression microarray studies28-29
• 2.2.9 Statistical analysis29-30
• 3. RESULTS30-53
• 3.1 BEZ235 and TSA exert a cytotoxic effect in breast cancer cell lines,respectively30-32
• 3.2 BEZ235 and TSA synergistically inhibit the proliferation of breast cancer cells32-35
• 3.3 Synergiistic effect of BEZ235 and TSA on the migration inhibition of breast cancer cells35-37
• 3.4 Genome-wide analysis of BEZ235 and/or TSA induced genes in breast cancer cells by gene ChIP37-38
• 3.5 BEZ235 suppresses Akt,S6,and 4EBP1 phosphorylation,while in combination with TSA furtherreduces Akt phosphorylation38-42
• 3.6 Co-treatment with BEZ235 and TSA synergistically induce apoptosis of breast cancer cells42-48
• 3.7 Co-treatment with BEZ235 and TSA synergistically enhanced autophagy in breast cancer cells48-51
• 3.8 Autophagy inibitor 3-MA inreases the apoptotic cell death inuced by combination with BEZ235and TSA in breast cancer cells51-53
• 4. DISCUSSION53-59
• 5. CONCLUSIONS59-60
• REFERENCES60-72
• 攻讀博士學(xué)位期間的科研業(yè)績72-73
• 綜述73-100
• 1. 乳腺癌研究概述73
• 2. 乳腺癌靶向治療研究73-83
• 2.1 人類表皮生長因子受體2靶向治療74-76
• 2.2 激素受體靶向治療76-77
• 2.3 PI3K-Akt-mTOR信號(hào)通路的靶向治療77-79
• 2.4 Ras/Raf/MEK/MAPK信號(hào)通路的靶向治療79-80
• 2.5 HDAC靶向治療80-81
• 2.6 腫瘤血管生成靶向治療81-82
• 2.7 靶向藥物的聯(lián)合應(yīng)用82-83
• 3. 展望83-84
• 參考文獻(xiàn)84-100
• 致謝100

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 戚曉軍;趙衛(wèi)紅;王懷瑾;;乳腺癌的分子靶向治療研究進(jìn)展[J];中國處方藥;2008年04期

2 湯沁;丁倩;林莉;張珍珍;代爭;詹金彪;;針對HER2靶點(diǎn)的抗體藥物研究與腫瘤靶向治療[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2012年10期

3 石建偉;唐智柳;蔡美玉;薛迪;;2008~2012年我國女性乳腺癌流行狀況的系統(tǒng)性綜述[J];中國婦幼保健;2014年10期

4 陳萬青;鄭榮壽;曾紅梅;鄒小農(nóng);張思維;赫捷;;2011年中國惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J];中國腫瘤;2015年01期

  本文關(guān)鍵詞：PI3K抑制劑聯(lián)合組蛋白去乙�；敢种苿⿲θ橄侔﹨f(xié)同殺傷作用的分子機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：363700