第一部分研究神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓中P2Y12受體的表達情況及其對疼痛行為學的影響目的檢測脊神經(jīng)根結(jié)扎模型（SNL）神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓P2Y12受體蛋白的表達情況及其抑制劑對大鼠疼痛行為學的影響變化。方法（1）通過進行L5脊神經(jīng)根結(jié)扎建立SNL神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型;（2）通過western blot法檢測SNL模型大鼠術(shù)后脊髓P2Y12蛋白的表達時程變化情況;（3）通過共聚焦免疫熒光組織化學定量法檢測SNL模型大鼠脊髓P2Y12蛋白表達時程變化情況;（4）通過共聚焦免疫熒光組織化學雙標法檢測SNL模型大鼠脊髓背角的P2Y12蛋白與神經(jīng)元、小膠質(zhì)細胞、星型膠質(zhì)細胞以及少突膠質(zhì)細胞的細胞共定位情況;（5）構(gòu)建大鼠鞘內(nèi)置管模型,以方便鞘內(nèi)給藥;（6）用von Frey纖維絲檢測大鼠的機械痛閾變化情況,比較假手術(shù)組,SNL手術(shù)組,SNL+鞘內(nèi)注射P2Y12抑制劑MRS2395組,SNL+口服P2Y12抑制劑氯吡格雷組大鼠的機械痛閾變化情況;（7）用Hargreaves’熱輻射刺激法檢測大鼠的熱痛閾變化情況,比較假手術(shù)組,SNL手術(shù)組,SNL+鞘內(nèi)注射P2Y12抑制劑MRS2395組,SN... 

【文章來源】：上海交通大學上海市211工程院校985工程院校教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

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緒論
第一部分 神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓中P2Y12受體表達變化情況及其對疼痛行為學的影響研究
    1.1 研究背景
    1.2 材料與方法
        1.2.1 實驗動物
        1.2.2 制備動物模型
        1.2.3 動物的藥物處理
        1.2.4 動物的疼痛行為學測定
        1.2.5 主要實驗儀器
        1.2.6 主要實驗試劑
        1.2.7 主要實驗抗體
        1.2.8 分子生物學主要研究方法
        1.2.9 統(tǒng)計學分析
    1.3 結(jié)果
        1.3.1 SNL大鼠出現(xiàn)觸誘發(fā)痛和熱痛覺過敏
        1.3.2 SNL大鼠患側(cè)脊髓的P2Y12 蛋白表達增加
        1.3.3 SNL大鼠脊髓的P2Y12 蛋白與小膠質(zhì)細胞明顯共標
        1.3.4 口服或鞘內(nèi)注射P2Y12 抑制劑可部分緩解SNL大鼠機械痛和熱痛
        1.3.5 口服或鞘內(nèi)注射P2Y12 抑制劑可顯著抑制SNL大鼠術(shù)后小膠質(zhì)細胞的激活
    1.4 討論
    1.5 小結(jié)
第二部分 神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓中P2Y12 受體與p38MAPK和 RhoA/ROCK2 信號通路蛋白表達的關(guān)系研究
    2.1 研究背景
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實驗動物
        2.2.2 動物模型制備
        2.2.3 動物的藥物處理
        2.2.4 動物的疼痛行為學測定
        2.2.5 主要實驗儀器
        2.2.6 主要實驗試劑
        2.2.7 主要實驗抗體
        2.2.8 分子生物學主要研究方法
        2.2.9 統(tǒng)計學分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 SNL大鼠患側(cè)脊髓中磷酸化p38MAPK蛋白的表達增加
        2.3.2 SNL大鼠患側(cè)脊髓的小膠質(zhì)細胞與磷酸化p38MAPK明顯共標
        2.3.3 P2Y12 抑制劑顯著抑制術(shù)后脊髓中磷酸化p38MAPK蛋白的表達
        2.3.4 p38MAPK抑制劑可顯著緩解手術(shù)引起的大鼠機械痛和熱痛
        2.3.5 術(shù)后,GTP-RhoA和 ROCK2 蛋白在SNL大鼠脊髓中表達顯著增加
        2.3.6 P2Y12 抑制劑使SNL術(shù)后第7 天大鼠患側(cè)脊髓中ROCK2 蛋白的表達顯著減少
        2.3.7 ROCK抑制劑使SNL術(shù)后大鼠脊髓中磷酸化p38MAPK蛋白的表達顯著減少
        2.3.8 ROCK抑制劑可顯著緩解SNL大鼠術(shù)后的觸誘發(fā)痛和熱痛覺過敏
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三部分 P2Y12 基因敲除對神經(jīng)病理性疼痛小鼠疼痛行為學及其脊髓背角Ⅱ?qū)由窠?jīng)元興奮性突觸傳遞的影響
    3.1 研究背景
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實驗動物
        3.2.2 小鼠基因型鑒定
        3.2.3 制備動物模型
        3.2.4 動物的疼痛行為學測定
        3.2.5 主要實驗儀器
        3.2.6 主要實驗試劑
        3.2.7 電生理主要研究方法
        3.2.8 統(tǒng)計學分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 小鼠基因型鑒定結(jié)果
        3.3.2 不同基因型的PSNL小鼠出現(xiàn)不同程度的觸誘發(fā)痛和熱痛覺過敏
        3.3.3 不同基因型小鼠脊髓神經(jīng)元mEPSC的變化
        3.3.4 不同基因型小鼠脊髓背角神經(jīng)元靜息膜電位的差異
        3.3.5 不同基因型小鼠脊髓神經(jīng)元注入電流誘發(fā)單個動作電位的差異
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻
致謝
攻讀博士學位期間已發(fā)表或待發(fā)表的論文



本文編號：3632245