目的:本研究的主要目的是探索小檗堿對(duì)EGFR-TKI治療NSCLC時(shí)的增敏作用以及相關(guān)分子機(jī)制,以期為小檗堿潛在的抑癌作用提供更充分的理論依據(jù),并有望對(duì)進(jìn)一步提高靶向治療的效果,為臨床EGFR-TKI的聯(lián)合用藥提供新的方法和實(shí)驗(yàn)證據(jù)。方法:體外實(shí)驗(yàn)第一部分:1.采用MTT法和BrdU摻入法檢測(cè)不同劑量小檗堿在不同的時(shí)間對(duì)EGFR-TKI不敏感的A549細(xì)胞和對(duì)EGFR-TKI突變耐藥的H1975細(xì)胞增殖的影響;同時(shí)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同劑量BBR處理后各細(xì)胞周期的變化,以確認(rèn)小檗堿對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用。2.采用MTT法檢測(cè)小檗堿聯(lián)合吉非替尼對(duì)A549和H1975細(xì)胞增殖的影響,并使用CompuSyn軟件計(jì)算兩藥的聯(lián)合用藥指數(shù),分析聯(lián)合用藥的效果,確認(rèn)最佳聯(lián)合用藥劑量。同時(shí),采用EdU染色法檢測(cè)小檗堿聯(lián)合吉非替尼對(duì)兩細(xì)胞增殖的影響。3.采用Western blot法檢測(cè)不同劑量小檗堿以及小檗堿聯(lián)合吉非替尼對(duì)A549和H1975細(xì)胞內(nèi)PDPK1,Sp1,DNMT1蛋白表達(dá)的影響;同時(shí)還使用Real-time PCR檢測(cè)小檗堿對(duì)細(xì)胞內(nèi)DNMT1 mRNA表達(dá)的影響;使用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)... 

【文章來(lái)源】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：116 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 文獻(xiàn)研究
    1.1 肺癌流行病學(xué)研究概況
    1.2 非小細(xì)胞肺癌與EGFR-TKI靶向治療研究進(jìn)展
    1.3 小檗堿抗腫瘤作用研究進(jìn)展
    1.4 DNMT1與肺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系
    1.5 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化EMT與腫瘤發(fā)生發(fā)展和治療的關(guān)系研究現(xiàn)狀
        1.5.1 EMT過(guò)程與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展的關(guān)系
        1.5.2 EMT與肺癌治療關(guān)系研究進(jìn)展
    1.6 非編碼RNA與肺癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系研究進(jìn)展
        1.6.1 LncRNA HOTAIR與肺癌的發(fā)生發(fā)展以及治療預(yù)后的關(guān)系
        1.6.2 MicroRNA與肺癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系的研究進(jìn)展
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.2 體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第三章 結(jié)果
    3.1 小檗堿及其聯(lián)合吉非替尼抑制NSCLC細(xì)胞生長(zhǎng)的分子機(jī)制研究
        3.1.1 小檗堿在體外對(duì)A549和H1975細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的影響
        3.1.2 小檗堿對(duì)A549和H1975細(xì)胞周期的影響
        3.1.3 小檗堿對(duì)A549和H1975細(xì)胞內(nèi)Sp1和PDPK1蛋白表達(dá)的影響;以及Sp1和PDPK1蛋白之間可能存在的相互作用
        3.1.4 小檗堿對(duì)A549和H1975細(xì)胞內(nèi)DNMT1蛋白、mRNA表達(dá)水平以及啟動(dòng)子活性的影響
        3.1.5 小檗堿聯(lián)合吉非替尼對(duì)肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)以及相應(yīng)基因蛋白表達(dá)的影響
    3.2 小檗堿及其聯(lián)合吉非替尼抑制肺癌細(xì)胞EMT過(guò)程發(fā)生的分子機(jī)制研究
        3.2.1 小檗堿對(duì)A549和H1975細(xì)胞EMT過(guò)程發(fā)生的影響
        3.2.2 小檗堿聯(lián)合吉非替尼對(duì)A549和H1975細(xì)胞EMT過(guò)程發(fā)生的影響
        3.2.3 LncRNA HOTAIR在小檗堿介導(dǎo)的抑制肺癌細(xì)胞內(nèi)EMT發(fā)生中的作用
        3.2.4 miR-34a-5p在小檗堿介導(dǎo)的抑制肺癌細(xì)胞內(nèi)EMT發(fā)生中的作用及相關(guān)分子機(jī)制
        3.2.5 外源性過(guò)表達(dá)Snail可阻斷肺癌細(xì)胞內(nèi)小檗堿誘導(dǎo)的E-cadherin蛋白表達(dá)及其啟動(dòng)子活性的增加
    3.3 體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的研究
        3.3.1 一般狀態(tài)觀察
        3.3.2 小檗堿聯(lián)合吉非替尼對(duì)裸鼠體表腫瘤生長(zhǎng)的影響
        3.3.3 小檗堿聯(lián)合吉非替尼協(xié)同抑制裸鼠體內(nèi)肺轉(zhuǎn)移瘤的生長(zhǎng)
        3.3.4 小檗堿聯(lián)合吉非替尼對(duì)裸鼠體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)和EMT相關(guān)基因表達(dá)的影響
討論
結(jié)語(yǔ)
參考文獻(xiàn)
附錄
在校期間發(fā)表論文情況
致謝
附件


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[3]小檗堿對(duì)前列腺癌的抑制作用及其機(jī)制研究[D]. 王玉.山東大學(xué) 2011
[4]小檗堿對(duì)人胃癌細(xì)胞作用靶基因分離和連黛片治療術(shù)后胃癌大腸癌的初步臨床觀察[D]. 郭淑杰.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2000

碩士論文
[1]小檗堿聯(lián)合多柔比星抗腫瘤作用的機(jī)制研究[D]. 宋霞.福建中醫(yī)藥大學(xué) 2014
[2]小檗堿對(duì)人卵巢癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用及其機(jī)制研究[D]. 徐光偉.山東大學(xué) 2013
[3]小檗堿對(duì)人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞系（PG）細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的影響及機(jī)制研究[D]. 蔣艷.北京中醫(yī)藥大學(xué) 2004



本文編號(hào)：3633390