動脈粥樣硬化是一個慢性炎癥過程,炎癥反應(yīng)參與其發(fā)生發(fā)展。金雀異黃素（GEN）具有抗炎活性,但作用機制尚未完全闡釋。課題組前期研究顯示GEN抑制活化炎癥細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子NF-κB,下調(diào)miR-21和TLR4表達,生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)miR-21與TIPE2 CDS區(qū)存在特異性結(jié)合位點。據(jù)此我們推測:NF-κB/miR-21/TIPE2信號軸在炎癥細(xì)胞反應(yīng)中扮演重要角色,GEN通過抑制NF-κB,下調(diào)miR-21表達,進而活化TIPE2,阻斷TLR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo),最終發(fā)揮抗炎作用。為驗證上述科學(xué)假說,本研究用脂多糖（LPS）刺激RAW264.7細(xì)胞和THP-1細(xì)胞構(gòu)建炎癥細(xì)胞反應(yīng)模型,LPS誘導(dǎo)C57小鼠血管慢性炎癥反應(yīng)構(gòu)建動物模型。RT-qPCR檢測LPS對炎癥細(xì)胞miR-21、miR-155、miR-125a表達的影響。利用慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定過表達和敲降miR-21細(xì)胞系,NF-κB抑制劑PDTC和GEN單獨或聯(lián)合處理細(xì)胞后再用LPS刺激,RT-qPCR、Western Blot、IF分別檢測TNF-α、IL-6、MCP-1、i NOS、COX-2、NF-κB p65、miR-21表達,分析miR... 

【文章來源】：湖南師范大學(xué)湖南省211工程院校

【文章頁數(shù)】：145 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言與文獻綜述
    1.1 炎癥細(xì)胞反應(yīng)與動脈粥樣硬化
    1.2 金雀異黃素的結(jié)構(gòu)特征與生物學(xué)活性
    1.3 金雀異黃素的抗炎作用及分子機制
    1.4 炎癥細(xì)胞反應(yīng)的表觀遺傳調(diào)控
    1.5 miRNA與炎癥細(xì)胞反應(yīng)
    1.6 雌激素調(diào)控miR-21影響炎癥細(xì)胞反應(yīng)
    1.7 免疫負(fù)調(diào)控因子TIPE2
    1.8 炎癥信號受體TLR4
    1.9 立題依據(jù)和意義
第二章 NF-κB/miR-21 調(diào)控LPS誘導(dǎo)的炎癥細(xì)胞反應(yīng)
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 構(gòu)建LPS誘導(dǎo)的炎癥細(xì)胞反應(yīng)模型
        2.3.2 LPS上調(diào)炎癥細(xì)胞miR-21 表達
        2.3.3 miR-21促進炎癥細(xì)胞反應(yīng)
        2.3.4 活化炎癥細(xì)胞miR-21 表達依賴于轉(zhuǎn)錄因子NF-κB
        2.3.5 NF-κB/miR-21 調(diào)控炎癥細(xì)胞反應(yīng)
        2.3.6 LPS依賴NF-κB增強miR-21 宿主基因啟動子活性
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 金雀異黃素調(diào)控NF-κB/miR-21 抑制炎癥細(xì)胞反應(yīng)
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 方法
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 GEN對巨噬細(xì)胞活力的影響
        3.3.2 GEN以劑量、時間依賴的方式抑制活化巨噬細(xì)胞miR-21表達
        3.3.3 GEN抑制miR-21 表達發(fā)揮抗炎作用
        3.3.4 GEN對炎癥細(xì)胞反應(yīng)的抑制作用依賴于NF-κB
        3.3.5 GEN抑制NF-κB,下調(diào)miR-21 表達
        3.3.6 GEN對活化巨噬細(xì)胞miR-21 宿主基因啟動子活性的抑制作用依賴于NF-κB
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 金雀異黃素調(diào)控miR-21/TIPE2/TLR4 抑制炎癥細(xì)胞反應(yīng)的分子機制
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 材料
        4.2.2 方法
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 GEN促進免疫負(fù)調(diào)控因子TIPE2 表達
        4.3.2 GEN通過調(diào)控TIPE2 發(fā)揮抗炎作用
        4.3.3 GEN抑制炎癥信號受體TLR4 介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
        4.3.4 GEN上調(diào)TIPE2,抑制TLR4 信號通路
        4.3.5 GEN通過抑制miR-21 調(diào)控TIPE2/TLR4 信號通路
        4.3.6 TIPE2是miR-21 的直接靶標(biāo)
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
研究結(jié)論與展望
參考文獻
縮略詞表(中英文對照)
攻讀博士學(xué)位期間撰寫和發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]金雀異黃素調(diào)控miR-21表達促進LPS活化的RAW264.7細(xì)胞凋亡[J]. 向麗萍,叢麗,張勇,劉素娟,謝小林,柏萍娟,向雪萍,符曉華.  藥學(xué)學(xué)報. 2019(02)

博士論文
[1]microRNA相關(guān)的生物信息學(xué)與進化分析[D]. 楊楨.復(fù)旦大學(xué) 2011



本文編號：3629852