目的探討骨特異性來源的骨鈣素（OCN）對阿爾茨海默�。ˋD）小鼠認(rèn)知功能障礙的影響和機(jī)制以及骨代謝重要因子β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）對帕金森�。≒D）小鼠運(yùn)動(dòng)功能障礙的作用和機(jī)制。方法在探索OCN對AD小鼠作用的實(shí)驗(yàn)中,我們采用7月齡APP/PS1雄性小鼠作為AD模型小鼠,采用外周和中樞注射非羧化骨鈣素（ucOCN,骨鈣素的活性形式）兩種方式進(jìn)行干預(yù)。外周注射采用腹腔注射ucOCN 4周,每日固定時(shí)間點(diǎn)注射一次,劑量為1 ug/kg和10 ug/kg;中樞注射采用背部皮下埋入微量滲透壓泵并連接導(dǎo)管和腦部注射裝置、側(cè)腦室持續(xù)注射2周,劑量為20 ng/h;兩種方式干預(yù)結(jié)束后分別依次進(jìn)行開放場、高架十字迷宮和明暗穿梭實(shí)驗(yàn)檢測小鼠焦慮樣行為,水迷宮檢測小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力;行為學(xué)檢測完成后取材,石蠟切片免疫組化染海馬和皮質(zhì)淀粉纖維狀斑塊、冰凍切片免疫熒光染海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞,Western Blot檢測Aβ相關(guān)蛋白和AKT/mTOR通路蛋白表達(dá)。體外采用老化Aβ1-42損傷PC12細(xì)胞24 h,并提前2 h采用不同濃度ucOCN干預(yù),觀察ucOCN對細(xì)胞的保護(hù)作用和AKT/... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

骨鈣素對阿爾茨海默病小鼠模型保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)流程圖

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文 32 圖1.2阿爾茨海默病小鼠建模成功。APP/PS1小鼠連鎖表達(dá)APP和PS1兩個(gè)基因（A），7月齡時(shí)高表達(dá)APP蛋白（B）、海馬和皮質(zhì)存在淀粉樣斑塊沉積（C）和激活的炎癥反應(yīng)（D）、相對于WT小鼠存在明顯的空間學(xué)習(xí)記憶能力障礙（E）。HC:hippocampus;C:cortex。Figure1.2ThesuccessfulestablishmentofanAlzheimer’sdiseasemousemodel.2腹腔注射ucOCN可改善APP/PS1小鼠的焦慮樣行為和空間學(xué)習(xí)記憶能力鑒于ucOCN可通過血腦屏障進(jìn)入中樞、結(jié)合于海馬CA3區(qū)，因此我們首先采用腹腔注射的方式觀察ucOCN干預(yù)是否可改善AD小鼠的焦慮相關(guān)行為以及學(xué)習(xí)記憶能力障礙。5只小鼠于行為學(xué)測試前死亡。焦慮相關(guān)行為通過開放嘗高架十字迷宮和明暗穿梭3個(gè)實(shí)驗(yàn)相互印證反映。在開放場實(shí)驗(yàn)的5min內(nèi)，相對于WT小鼠，AD小鼠在開放場中心區(qū)域所處時(shí)間有降低趨勢（F(4,65)=1.880,P=0.125,posthoc:WTvsAD,P=0.078,圖1.3A），而腹腔注射ucOCN28天的AD小鼠在開放場中心區(qū)域時(shí)間有增加趨勢，尤其是1ug/kgucOCN干預(yù)組，但均未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05,圖1.3A）；而AD小鼠進(jìn)入中心區(qū)域的次數(shù)較WT小鼠明顯減

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文 34 圖1.3腹腔注射骨鈣素可改善AD小鼠的焦慮樣行為。AD小鼠進(jìn)入開放場的時(shí)間（A）和次數(shù)（B）減少，進(jìn)入明箱的時(shí)間減少（E），而在高架十字迷宮開臂的時(shí)間（C）和次數(shù)（D）以及明箱的次數(shù)（F）和WT小鼠無明顯差別；腹腔注射骨鈣素可增加AD小鼠進(jìn)入開放場中心區(qū)域（B）和高架十字迷宮開臂的次數(shù)（D）以及進(jìn)入明暗箱明箱的時(shí)間（E）。OFT、EPMT:N=13-15；LDTT:N=7-8.Figure1.3Osteocalcininjectedintraperitoneallyreducedtheincreasedanxiety-likebehaviorofADmice.表1.1腹腔注射OCN小鼠焦慮樣行為測試結(jié)果Table1.1Resultsofanxiety-likebehavioraltestsinmicewithintraperitonealosteocalcininjection(mean±SEM).BehavioralTestsWT+NSWT+10ug/kgOCNAD+NSAD+1ug/kgOCNAD+10ug/kgOCNOpenFieldTestN=14N=14N=13N=14N=15TimespentinCenter(s)35.143±6.48047.950±15.78314.546±2.57942.150±13.33121.753±5.267EntryintoCenter19.21±1.953**15.79±1.502*9.85±0.953#25.86±3.561**19.20±2.256*


本文編號：3598265