本文關(guān)鍵詞：慢性硬膜下血腫大鼠動(dòng)物模型的改良及CXCR4在其血腫吸收中的調(diào)控作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:慢性硬膜下血腫(chronic subdural hematoma,CSDH)是繼發(fā)性顱腦損傷的主要類型之一,好發(fā)于有抗凝治療史、顱腦創(chuàng)傷史者以及65歲以上的老年人,當(dāng)前CSDH以鉆孔血腫引流術(shù)為主的外科治療,往往伴有不同程度的神經(jīng)系統(tǒng)及呼吸系統(tǒng)并發(fā)癥,均造成手術(shù)致殘率與死亡率上升,但因多年來囿于其現(xiàn)有動(dòng)物模型的局限性,CSDH發(fā)病機(jī)制及治療方法的研究并未獲得實(shí)質(zhì)性進(jìn)展。趨化因子受體4(CXCR4)是體內(nèi)參與炎癥反應(yīng)、血管生成、創(chuàng)傷修復(fù)等多種生理及病理生理過程的重要調(diào)節(jié)分子,并與出血性及缺血性疾病的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。因此,本課題利用更能模擬人體CSDH發(fā)病時(shí)程的大鼠模型及臨床CSDH病人標(biāo)本的檢測(cè),深入研究CSDH發(fā)病機(jī)制及CXCR4在血腫吸收過程中的重要調(diào)控作用,同時(shí)結(jié)合觀察臨床CSDH病人標(biāo)本中與炎癥反應(yīng)、血管生成密切相關(guān)的Treg、EPC變化,為將來探索出有利血腫吸收、促進(jìn)疾病康復(fù)的臨床治療方法及有效藥物提供科學(xué)依據(jù)。方法:分為基礎(chǔ)及臨床研究?jī)刹糠帧；A(chǔ)研究部分:在立體定向儀及微量注射器輔助下建立Wistar大鼠CSDH模型,將受試大鼠隨機(jī)分為三組:假手術(shù)組、CSDH組及CXCR4特異性抑制劑AMD3100組。其中,CSDH組大鼠分2次、間隔72小時(shí)向顱內(nèi)硬膜下腔注入大鼠自體靜脈血;AMD3100組大鼠在CSDH造模前2小時(shí),預(yù)先使用大鼠體重劑量2.5 ug/kg的CXCR4特異性阻斷劑AMD3100進(jìn)行單次硬膜下腔微量注射預(yù)處理,之后處理同CSDH組;sham組大鼠除不進(jìn)行顱內(nèi)注血外,其余處理同CSDH組。觀察時(shí)間分別設(shè)定在模型制備開始后第1、3、10、17、24天(其中1~10天為急性期、17天為亞急性期、24天為慢性期):(1)通過3.0T MRI掃描,確定模型建立是否成功,并在各時(shí)點(diǎn)觀察其影像學(xué)特征,測(cè)量CSDH血腫體積;(2)通過石蠟切片及HE染色觀察CSDH血腫及周圍區(qū)形態(tài)結(jié)構(gòu)變化;(3)ELISA方法檢測(cè)血腫包膜及周圍腦組織炎癥因子和血管生成因子IL-6、8、10、13、VEGF、TNF-α的表達(dá)變化;(4)流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)觀察外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)及內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPC)及的比例變化;(5)通過Western Blot檢測(cè)大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物v WF以及CXCR4的蛋白表達(dá)變化;(6)通過m NSS神經(jīng)功能評(píng)分、Footfault運(yùn)動(dòng)能力實(shí)驗(yàn)以及Morris水迷宮檢測(cè)大鼠神經(jīng)功及認(rèn)知功能變化;(7)通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析探討大鼠CSDH形成及吸收過程中與炎癥反應(yīng)、血管生成相關(guān)的病理生理機(jī)制,初步探索CXCR4與二者相關(guān)的分子調(diào)控機(jī)制。臨床研究部分:募集24例臨床鉆孔引流術(shù)治療的CSDH患者及30例健康志愿者,記錄患者一般資料后,MRI觀察患者血腫體積、GOSE評(píng)測(cè)患者術(shù)后神經(jīng)功能,流式細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)患者外周血Treg及EPC水平,研究Treg、EPC與血腫體積、神經(jīng)功能之間的相互關(guān)系。結(jié)果:(1)利用立體定向儀及微量注射器,采用間斷多次及速度梯度注血法,模仿CSDH病人反復(fù)多次顱內(nèi)出血,成功制備出了血腫維持24天的CSDH大鼠模型,并在血腫形成過程的第1、3、10、17、24天對(duì)其進(jìn)行連續(xù)動(dòng)態(tài)觀察。(2)CSDH大鼠頭部MRI及腦組織切片HE染色顯示,CSDH及AMD3100組血腫體積均在第3天達(dá)到峰值,之后逐漸減小,AMD3100組血腫吸收較CSDH組明顯延遲,第10~24天其血腫體積明顯增加(P0.05)。(3)CSDH大鼠神經(jīng)及認(rèn)知功能同期較sham組均顯著下降(P0.05),而AMD3100組與CSDH組相比,多個(gè)時(shí)間點(diǎn)其神經(jīng)與認(rèn)知功能均同期降低(P0.05)。(4)與sham組相比,CSDH組促炎因子IL-6、IL-8及TNF-α水平均顯著升高(P0.05),在第3~10天達(dá)到峰值;相比CSDH組,AMD3100組IL-6、IL-8及TNF-α水平升高更明顯,以IL-8、TNF-α為著,尤其第17~24天差異最顯著(P0.05)。CSDH組抗炎因子IL-10、IL-13水平較sham組升高,第17天達(dá)峰值,第10~24天差異最為明顯(P0.05);AMD3100組IL-10、IL-13水平較CSDH組1~10天無明顯變化,第17~24天下降明顯(P0.05)。IL-6、8、及TNF-α水平與血腫體積及神經(jīng)功能減退程度呈正相關(guān),IL-10、13與之呈負(fù)相關(guān)。(5)與sham組相比,CSDH組EPC水平呈現(xiàn)先降后升的趨勢(shì),第1~3天下降,第10天達(dá)到峰值,此后逐漸下降,第10~24天仍持續(xù)保持較高水平(P0.05),AMD3100組較CSDH組,第10~24天EPC水平則明顯下降(P0.05);Treg比例亦呈先降后升,CSDH組較sham組第1~10天下降,第17~24天顯著升高(P0.05),而與CSDH組相比,AMD3100組Treg水平在第10~24天明顯降低(P0.05)。Treg及EPC水平與血腫體積、神經(jīng)功能減退程度呈負(fù)相關(guān)。(6)v WF表達(dá)水平在CSDH第3~24天逐漸升高(P0.05),第24天水平最高,AMD3100組v WF水平在各時(shí)間點(diǎn)明顯低于CSDH組(P0.05,P0.05,P0.05,P0.05);CXCR4表達(dá)水平在CSDH組逐漸升高,第17天達(dá)峰值,此后保持較高水平(P0.05),而AMD阻斷之后CXCR4水平則明顯降低(P0.05)。(7)CSDH患者術(shù)前Treg與EPC水平下降,術(shù)后逐漸升高,二者水平與患者術(shù)前血腫體積及神經(jīng)功能下降程度呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論:CXCR4可能通過細(xì)胞及細(xì)胞因子途徑參與CSDH炎癥反應(yīng)及血管生成,進(jìn)而促進(jìn)了CSDH血腫的吸收,并有益于CSDH神經(jīng)功能的保護(hù)和改善。
【關(guān)鍵詞】：慢性硬膜下血腫 大鼠模型 CXCR4 炎癥反應(yīng) 血管生成
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R651.15;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-16
• 縮略語/符號(hào)說明16-18
• 前言18-21
• 研究現(xiàn)狀、成果18-20
• 研究目的、方法20-21
• 一、CSDH大鼠模型的制備及顱內(nèi)血腫的觀察21-32
• 1.1 材料與方法21-27
• 1.1.1 主要試劑21
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物21
• 1.1.3 主要儀器21-22
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)分組22
• 1.1.5 CSDH造模、預(yù)處理及顱內(nèi)血腫觀察綱要22
• 1.1.6 實(shí)驗(yàn)過程及詳細(xì)步驟22-27
• 1.1.7 結(jié)果統(tǒng)計(jì)27
• 1.2 結(jié)果與分析27-32
• 1.2.1 CSDH造模后各組血腫體積變化及結(jié)構(gòu)特點(diǎn)27-32
• 二、CSDH大鼠神經(jīng)與認(rèn)知功能變化的觀察32-39
• 2.1 材料與方法32-36
• 2.1.1 mNSS量表及使用方法32-33
• 2.1.2 Foot-fault運(yùn)動(dòng)能力實(shí)驗(yàn)33-34
• 2.1.3 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)34-35
• 2.1.4 結(jié)果統(tǒng)計(jì)35-36
• 2.2 結(jié)果與分析36-39
• 2.2.1 mNSS神經(jīng)功能評(píng)分結(jié)果36
• 2.2.2 Foot-fault運(yùn)動(dòng)能力評(píng)測(cè)結(jié)果36-37
• 2.2.3 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果37-39
• 三、CSDH大鼠CXCR4表達(dá)變化及其對(duì)炎癥反應(yīng)的影響39-56
• 3.1 材料與方法39-49
• 3.1.1 主要試劑39-40
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物40
• 3.1.3 主要儀器40
• 3.1.4 實(shí)驗(yàn)分組40
• 3.1.5 Western blot檢測(cè)血腫包膜及周圍區(qū)腦組織CXCR4表達(dá)40-44
• 3.1.6 流式細(xì)胞檢測(cè)外周血Treg比例44-47
• 3.1.7 ELISA法檢測(cè)CSDH血腫包膜及周圍區(qū)炎癥因子活性47-49
• 3.1.8 結(jié)果統(tǒng)計(jì)49
• 3.2 結(jié)果與分析49-56
• 3.2.1 CXCR4的表達(dá)變化及其與CSDH血腫體積、動(dòng)物神經(jīng)功能的關(guān)系49-50
• 3.2.2 外周血Treg細(xì)胞比例檢測(cè)結(jié)果50-51
• 3.2.3 ELISA檢測(cè)CSDH大鼠血腫包膜及周圍區(qū)炎癥因子的表達(dá)51-55
• 3.2.4 Treg及炎癥因子與血腫體積、神經(jīng)功能、CXCR4的相關(guān)性分析55-56
• 四、CSDH大鼠血管生成的變化及CXCR4對(duì)其影響56-63
• 4.1 材料與方法56-58
• 4.1.1 主要試劑耗材56
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物56
• 4.1.3 主要儀器56
• 4.1.4 實(shí)驗(yàn)分組56
• 4.1.5 Western blot檢測(cè)vWF表達(dá)水平56
• 4.1.6 流式細(xì)胞檢測(cè)外周血EPC比例56-58
• 4.1.7 ELISA檢測(cè)CSDH血腫包膜及周圍區(qū)VEGF活性58
• 4.1.8 結(jié)果統(tǒng)計(jì)58
• 4.2 結(jié)果與分析58-63
• 4.2.1 血管內(nèi)皮標(biāo)記物vWF的表達(dá)變化58-59
• 4.2.2 外周血EPC的比例檢測(cè)結(jié)果59-60
• 4.2.3 血腫包膜及周圍腦組織VEGF的檢測(cè)結(jié)果60-62
• 4.2.4 EPC、VEGF及vWF表達(dá)水平與血腫體積、神經(jīng)功能相關(guān)性分析結(jié)果62-63
• 五：CSDH臨床患者外周血及血腫液中Treg及EPC的觀察63-73
• 5.1 材料與方法63-65
• 5.1.1 主要試劑耗材63
• 5.1.2 觀察對(duì)象的選擇63-64
• 5.1.3 主要儀器64
• 5.1.4 分組64
• 5.1.5 CT觀察CSDH患者顱內(nèi)血腫情況64
• 5.1.6 流式細(xì)胞檢測(cè)外周血EPC、Treg比例64-65
• 5.1.7 受試者神經(jīng)功能的評(píng)價(jià)65
• 5.1.8 結(jié)果統(tǒng)計(jì)65
• 5.2 結(jié)果與分析65-73
• 5.2.1 觀察對(duì)象基本情況、血常規(guī)、肝功能的對(duì)比65-68
• 5.2.2 CSDH患者手術(shù)前后CT影響比較血腫吸收情況68-69
• 5.2.3 觀察對(duì)象Treg及EPC的情況69-73
• 討論73-84
• 1.CSDH及其動(dòng)物模型的研發(fā)現(xiàn)狀73-75
• 1.1 CSDH現(xiàn)狀73
• 1.2 CSDH動(dòng)物模型的研發(fā)現(xiàn)狀73-75
• 2.CSDH的主要病理生理機(jī)制75-79
• 2.1 CSDH中炎癥反應(yīng)的作用與影響75-77
• 2.2 CSDH中血管生成的作用與影響77-79
• 3.CXCR4及其在CSDH中的作用79-84
• 3.1 CXCR4的生物學(xué)功能79-80
• 3.2 CXCR4對(duì)CSDH炎癥反應(yīng)的影響80-82
• 3.3 CXCR4對(duì)CSDH血管生成的影響82-84
• 小結(jié)84-85
• 全文結(jié)論85-86
• 論文創(chuàng)新點(diǎn)86-87
• 參考文獻(xiàn)87-92
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明92-93
• 附錄93-95
• 綜述 血管生成在慢性硬膜下血腫的中意義及分子病理機(jī)制95-105
• 綜述參考文獻(xiàn)101-105
• 致謝105

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 鞏祖順;動(dòng)脈粥樣硬化中幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1的組織學(xué)表達(dá)及干預(yù)研究[D];山東大學(xué);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張曉歌;PLGF參與AngⅡ誘導(dǎo)心臟成纖維細(xì)胞激活的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：慢性硬膜下血腫大鼠動(dòng)物模型的改良及CXCR4在其血腫吸收中的調(diào)控作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：359592