本文關(guān)鍵詞：TRB3介導(dǎo)的脂肪組織巨噬細(xì)胞極化與糖尿病冠狀動脈病變關(guān)系的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景糖尿病不僅是冠心病的主要危險因素,而且是冠心病的獨(dú)立危險因素。合并糖尿病的冠心病患者具有以下特點(diǎn)：冠狀動脈易損斑塊發(fā)生率高、病變范圍廣泛、常合并多支病變、臨床治療效果差,死亡率是單純冠心病死亡率的2-4倍。但是,糖尿病導(dǎo)致冠心病患者冠狀動脈病變程度加重的具體機(jī)制尚不清楚。因此,探索合并糖尿病的冠心病患者冠狀動脈粥樣硬化斑塊病變嚴(yán)重的深層次機(jī)制,建立以機(jī)制為導(dǎo)向的治療措施成為近年來防治糖尿病心血管事件發(fā)生的研究熱點(diǎn)。內(nèi)臟脂肪組織功能紊亂在動脈粥樣硬化性心臟病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。心外膜脂肪組織作為一種特殊的內(nèi)臟脂肪組織,其解剖位置近于心臟,可以通過旁分泌與血管分泌的方式分泌多種化學(xué)因子,直接作用于心臟及相關(guān)血管。CT掃描研究證實(shí),心外膜脂肪組織體積與冠心病嚴(yán)重程度密切相關(guān)。糖尿病心外膜脂肪組織存在功能紊亂,表現(xiàn)為糖尿病心外膜脂肪組織厚度增加,MCP-1、瘦素等促炎癥分泌因子增加。因此,糖尿病患者心外膜脂肪組織功能紊亂可能是導(dǎo)致糖尿病患者冠心病病情惡化的重要因素。脂肪組織巨噬細(xì)胞浸潤啟動了脂肪組織慢性炎癥過程,在脂肪組織功能紊亂的發(fā)生發(fā)展中起著尤為重要的作用。巨噬細(xì)胞主要分為促炎癥的M1型巨噬細(xì)胞及抗炎癥的M2型巨噬細(xì)胞。與單純的脂肪組織巨噬細(xì)胞數(shù)量增多相比,巨噬細(xì)胞M1/M2比例失調(diào)與脂肪組織慢性炎癥、糖尿病及冠心病關(guān)系更為密切。糖尿病引起的糖酯代謝異�？蛇M(jìn)一步加重脂肪組織功能紊亂,兩者之間形成惡性循環(huán)。因此,脂肪組織巨噬細(xì)胞M1/M2比值的增加可能在糖尿病與心外膜脂肪組織功能紊亂的惡性循環(huán)中起著關(guān)鍵作用。但巨噬細(xì)胞極化的具體機(jī)制尚不清楚。過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)是核受體家族成員之一,是調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化的關(guān)鍵分子。巨噬細(xì)胞PPARγ基因敲除可以抑制巨噬細(xì)胞向M2型轉(zhuǎn)化；并且,在缺乏PPARγ調(diào)節(jié)促炎癥因子表達(dá)的情況下,肥胖或炎癥應(yīng)激可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞由M2型向M1型轉(zhuǎn)化。TRB3具有負(fù)調(diào)控PPARγ信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用,促進(jìn)胰島素抵抗；TRB3基因Q84R錯義突變患者心血管危險增加。因此,我們推測TRB3可能通過抑制PPARγ轉(zhuǎn)錄,調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞M1/M2比例的改變,從而參與了糖尿病與脂肪組織功能紊亂惡性循環(huán)。本研究選取了進(jìn)行冠狀動脈搭橋手術(shù)的單純冠心病與合并糖尿病的冠心病患者,手術(shù)中獲取患者的脂肪組織,檢測合并糖尿病的冠心病患者心外膜與皮下脂肪組織巨噬細(xì)胞極化與TRB3/PPARγ信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的改變,并分析脂肪組織巨噬細(xì)胞M1/M2比值與冠狀動脈病變嚴(yán)重程度的關(guān)系,以探討糖尿病是否是通過誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞M1/M2比值的改變而加重了冠狀動脈病變進(jìn)程。目的1.探討單純冠心病與合并糖尿病的冠心病患者心外膜與皮下脂肪組織中巨噬細(xì)胞數(shù)量、M1/M2型巨噬細(xì)胞比例的不同；2.探討心外膜與皮下脂肪組織中巨噬細(xì)胞M1/M2型比值與冠心病嚴(yán)重程度的關(guān)系；3.檢測單純冠心病與合并糖尿病的冠心病患者心外膜與皮下脂肪組織中TRB3/PPAR γ信號通路蛋白表達(dá)水平的改變。方法1.冠心病患者脂肪組織的獲�。菏占瘮M進(jìn)行冠狀動脈搭橋手術(shù)的冠心病患者,分為單純冠心病組(n=30)與合并糖尿病的冠心病組(n=30),在患者知情同意的基礎(chǔ)上,手術(shù)中獲取患者的左室前壁心外膜脂肪組織與胸骨前的皮下脂肪組織。2.冠心病患者冠狀動脈嚴(yán)重程度的評估：通過冠狀動脈造影,采用Gensini評分方法評價各患者冠狀動脈病變嚴(yán)重程度。3.血液生化指標(biāo)檢測：血糖、血清總膽固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)、游離脂肪酸(FFA)、高密度脂蛋白(HDL-c)、低密度脂蛋白(LDL-c)及血清胰島素。4.病理學(xué)檢測：對心外膜與皮下脂肪組織分別進(jìn)行HE染色；通過免疫組織化學(xué)染色的方法檢測脂肪組織內(nèi)巨噬細(xì)胞總量(F4/80)、M1型巨噬細(xì)胞(CDllc)、M2型巨噬細(xì)胞(CD206)的含量,計(jì)算巨噬細(xì)胞M1/M2比值；通過免疫組織化學(xué)染色的方法檢測脂肪組織內(nèi)促炎癥因子單核細(xì)胞趨化因子1(MCP-1)、腫瘤壞死因子α(TNFα)及白介素6(IL-6)與抗炎癥因子白介素10(IL-10)的表達(dá)水平。5.實(shí)時定量RT-PCR檢測：取新鮮心外膜與皮下脂肪組織,提取RNA,實(shí)時定量熒光RT-PCR檢測脂肪合成酶(FAS)、圍脂滴蛋白(Perilipin)、甘油三酯脂肪酶(ATGL)、激素敏感脂肪酶(HSL)、脂聯(lián)素(Adiponectin).瘦素(leptin)mRNA表達(dá)水平。6.Western Blot檢測：取新鮮心外膜與皮下脂肪組織,提取蛋白質(zhì),Western Blot檢測脂肪組織葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GLUT4)、胰島素受體底物1(IRS1)蛋白表達(dá)水平,以及TRB3/PPARγ信號通路的蛋白表達(dá)量。結(jié)果1.患者的一般臨床特征：(1)合并糖尿病的冠心病患者與單純冠心病患者在年齡、性別、體重及血壓方面無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與單純冠心病患者相比,合并糖尿病的冠心病患者腰圍(WC)(90.67±7.07 vs 95.8±7.43,P=0.008)、臀圍(HC) (95.43±5.83 vs 98.27±4.81,P=0.044)及體重指數(shù)(BMI) (24.45±2.41 vs 25.84±2.41, P=0.029)均顯著增加；(2)與單純冠心病患者相比,合并糖尿病的冠心病患者Gensini評分(74.13±41.1 vs 114.73±54.47,P=0.002)顯著增高。2.患者血清學(xué)指標(biāo)改變：合并糖尿病的冠心病患者與單純冠心病患者血清TC、LDL-c水平無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與單純冠心病患者相比,合并糖尿病的冠心病患者空腹血糖(4.91±0.53 vs 7.41±1.99,P0.001).TG (1.33±0.63 vs 1.74±0.84,P=0.024)及FFA(65.73±36.21 vs 96.50±67.90,P=0.034)顯著增加,而HDL-c顯著降低(1.15±0.23 vs 1.03±0.19,P=0.0024)。3.病理學(xué)分析：(1)心外膜脂肪細(xì)胞明顯小于皮下脂肪細(xì)胞,與單純冠心病患者相比,合并糖尿病的冠心病患者心外膜、皮下脂肪組織細(xì)胞大小不均,排列錯亂,并出現(xiàn)較大的脂肪細(xì)胞；與單純冠心病患者相比,合并糖尿病的冠心病患者心外膜、皮下脂肪細(xì)胞體積均明顯增大；(2)與單純冠心病患者相比,合并糖尿病的冠心病患者心外膜、皮下脂肪組織巨噬細(xì)胞浸潤明顯增多(8.0382±0.79003 vs 14.993±1.87488,P=0.003; 5.7918±0.66575 vs 9.4504±1.23046,P=0.007);更為重要地是,在合并糖尿病的冠心病患者心外膜、皮下脂肪組織中,除了巨噬細(xì)胞總量的增多,M1與M2型巨噬細(xì)胞含量均有顯著增加,然而,M2型巨噬細(xì)胞含量增加的程度明顯低于M1型巨噬細(xì)胞,合并糖尿病的冠心病患者心外膜、皮下脂肪組織巨噬細(xì)胞M1/M2比值顯著增加(0.8893±0.06104 vs 2.3085±0.30445,P0.001；0.8759±0.11247 vs 1.8729±0.17126,P0.001)；(3)與單純冠心病患者相比,合并糖尿病的冠心病患者心外膜、皮下脂肪組織中由M1型巨噬細(xì)胞分泌的MCP-1 (809.4061±87.58426 vs 3481.2152± 544.56428,P=0.004;756.0874±63.82350 vs 1839.9916±278.58902,P=0.011)、 IL-6 (876.3014±89.15848 vs 2994.8327±715.20988,P=0.031;767.2893± 101.21855 vs 1551.8582±279.99897,P=0.025)及TNFα(958.9250±171.21980 vs 2388.7611±336.02543,P=0.004;686.4714±75.95774 vs 1098.1217± 152.19985,P=0.036)等促炎癥因子均顯著增加；(4)與單純冠心病患者相比,合并糖尿病的冠心病患者心外膜、皮下脂肪組織中由M2型巨噬細(xì)胞分泌的IL-10抗炎癥因子顯著增加(754.7814± 123.46827 vs 1344.0700±95.99649,P=0.004;852.1106±108.57063 vs 1222.1286 ±118.67813,P=0.044),但其增加程度低于促炎癥因子；(5)與單純冠心病患者相比,合并糖尿病的冠心病患者心外膜、皮下脂肪組織中M1型巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)因子INFγ (859.2363±81.27950 vs 2438.2843± 441.08642,P=0.015;787.0618±73.38717 vs 1634.7678±303.67604,P=0.022)、M2型巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)因子IL-4 (691.7181±49.64617 vs 1086.2468±122.75524,P=0.014;644.4628±69.21432 vs 996.8646±74.17361,P=0.006)與IL-13表達(dá)均顯著增加(864.3688±103.17058 vs 1403.1810±172.13152,P=0.023;686.7570± 143.05874 vs 1126.0514±116.3674,P=0.038);但I(xiàn)NFγ表達(dá)增加水平顯著大于IL-4與IL-13；3.Gensini評分多元線性回歸方程如下：Gensini評分=0.454×(心外膜脂肪組織巨噬細(xì)胞M1/M2比值)+0.392×LDL-c、心外膜脂肪組織巨噬細(xì)胞M1/M2比值(P=0.012)、LDL-c(P=0.028)進(jìn)入回歸方程,表明心外膜脂肪組織巨噬細(xì)胞M1/M2比值與Gensini評分之間存在數(shù)量依存關(guān)系；心外膜脂肪組織巨噬細(xì)胞M1/M2比值多元線性回歸方程如下：心外膜脂肪組織巨噬細(xì)胞M1/M2比值=0.631×空腹血糖+0.370×WC、空腹血糖(P0.001).WC(P=0.001)進(jìn)入回歸方程,表明空腹血糖、WC是影響心外膜脂肪組織巨噬細(xì)胞M1/M2比值改變的臨床因素；4.實(shí)時定量RT-PCR檢測：與單純冠心病患者相比,合并糖尿病的冠心病患者心外膜、皮下脂肪組織FAS mRNA表達(dá)水平顯著增加(1.00000±0.00000 vs 3.71400±0.57180,P=0.029;1.00000±0.00000 vs 2.4557±0.44288,P=0.044), Perilipin(1.00000±0.00000 vs 0.55770±0.11265,P=0.017;1.00000±0.00000 vs 0.76250±0.10055,P=0.046).ATGL(1.00000±0.00000 vs 0.50700士0.10337, P=0.009;1.00000±0.00000 vs 0.64070±0.06643,P=0.006)及HSL(1.00000± 0.00000 vs 0.20020±0.05518,P0.0001;1.00000±0.00000 vs 0.60580±0.10979,P=0.023)的mRNA表達(dá)水平均顯著降低,leptin mRNA表達(dá)水平顯著增加(1.00000±0.00000 vs 5.53510±1.07432,P=0.013;1.00000±0.00000 vs 3.699030±0.52269,P0.0001),Adiponectin mRNA表達(dá)水平顯著降低(1.00000 ±0.00000 vs 0.643±0.11482,P=0.021;1.00000±0.00000 vs 0.7205±0.10295, P=0.035);5.Western Blot檢測：與單純冠心病患者相比,合并糖尿病的冠心病患者心外膜、皮下脂肪組織IRS1(0.44120±0.06505 vs 0.21960±0.03455,P=0.013; 0.53570±0.08059 vs 0.29790±0.04345,P=0.027)與GLUT4(0.92950±0.07987 vs 0.64970±0.05241,P=0.015;1.01070±0.04565 vs 0.86180±0.03942,P=0.009)蛋白表達(dá)水平均顯著降低,TRB3蛋白表達(dá)水平顯著升高(0.68150±0.12607 vs1.15790±0.18196,P=0.035;0.48040±0.10520 vs 0.81890±0.09720,P=0.040),而PPARγ蛋白表達(dá)水平顯著降低(0.93050±0.11089 vs 0.49890±0.04768, P=0.010;1.09010±0.09385 vs 0.75260±0.08006,P=0.021)。結(jié)論1.與單純冠心病患者相比,合并糖尿病的冠心病患者心外膜脂肪組織中巨噬細(xì)胞含量,包括總的巨噬細(xì)胞、M1型巨噬細(xì)胞及M2型巨噬細(xì)胞均顯著增加,巨噬細(xì)胞M1/M2比值顯著增加,冠狀動脈粥樣硬化斑塊病變程度更為嚴(yán)重；2.冠心病嚴(yán)重程度與心外膜脂肪巨噬細(xì)胞M1/M2比值具有數(shù)量依存關(guān)系；3.心外膜脂肪組織巨噬細(xì)胞M1/M2比值在糖尿病加重冠脈病變進(jìn)展過程中起著重要作用；4.合并糖尿病的冠心病患者心外膜與皮下脂肪組織TRB3蛋白表達(dá)顯著增高,而PPARγ蛋白表達(dá)顯著降低,提示TRB3/PPARγ信號通路可能在糖尿病加重冠心病進(jìn)程中起著重要作用。背景糖尿病是冠心病的等危癥已獲得廣泛共識,但糖尿病致動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展及加重的具體機(jī)制尚不清楚。臨床研究發(fā)現(xiàn),2型糖尿病常合并肥胖,肥胖是糖尿病胰島素抵抗與心血管并發(fā)癥的獨(dú)立危險因素。肥胖的流行與糖尿病及其心血管并發(fā)癥發(fā)病率的增加息息相關(guān)。但目前仍缺乏有效的藥物來治療肥胖。Rajesh與Ajay Chawla的研究證實(shí),激活免疫系統(tǒng)能夠治療肥胖和糖尿病。免疫系統(tǒng)與新陳代謝關(guān)系密切,脂肪組織中存在著大量的免疫細(xì)胞,這些細(xì)胞可以使脂肪組織炎癥增加,促進(jìn)脂肪組織功能紊亂,導(dǎo)致肥胖、糖尿病及心血管疾病等代謝疾病的發(fā)生發(fā)展。然而,脂肪組織炎癥的具體形成機(jī)制尚不清楚。脂肪組織炎癥表現(xiàn)可能來源于過度浸潤的巨噬細(xì)胞。脂肪細(xì)胞能夠分泌MCP-1等炎癥因子,導(dǎo)致巨噬細(xì)胞的異常募集,兩類細(xì)胞在肥胖患者脂肪組織中存在共區(qū)域化。然而,巨噬細(xì)胞分為促炎的M1型巨噬細(xì)胞及抗炎的M2型巨噬細(xì)胞；M2型巨噬細(xì)胞又細(xì)分為M2b及M2c型巨噬細(xì)胞。與單純的巨噬細(xì)胞數(shù)目增多相比,脂肪組織巨噬細(xì)胞M1/M2比值的增加與脂肪功能紊亂更為密切相關(guān)。功能紊亂的脂肪細(xì)胞對巨噬細(xì)胞表型改變的影響尚不清楚。巨噬細(xì)胞M1/M2比值的增加導(dǎo)致促炎癥因子表達(dá)增多,通過自分泌／旁分泌等信號阻斷脂肪細(xì)胞胰島素行為,促進(jìn)脂肪細(xì)胞功能紊亂,加重胰島素抵抗,脂肪細(xì)胞進(jìn)一步增大,釋放高水平的促炎癥介質(zhì)、進(jìn)一步趨化巨噬細(xì)胞浸潤,產(chǎn)生惡性循環(huán)。然而巨噬細(xì)胞表型改變的機(jī)制尚不清楚。PPARγ是核激素受體超家族成員之一,在脂肪組織中高度表達(dá)；巨噬細(xì)胞PPARγ基因敲除可以抑制巨噬細(xì)胞向M2型轉(zhuǎn)化；PPARγ配體可以使高脂飲食誘導(dǎo)的M2b型巨噬細(xì)胞向M2a型轉(zhuǎn)化。因此,我們認(rèn)為PPARγ可能調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞表型改變。TRB3可以通過負(fù)調(diào)控PPARγ而抑制脂肪細(xì)胞分化,促進(jìn)胰島素抵抗。因此,我們推測TRB3/PPARγ可能通過調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞表型的改變參與了功能紊亂的脂肪細(xì)胞與活化巨噬細(xì)胞相互作用的惡性循環(huán)。本研究通過建立胰島素抵抗的脂肪細(xì)胞,研究脂肪細(xì)胞對巨噬細(xì)胞M1/M2比值及巨噬細(xì)胞M2a/M2b型轉(zhuǎn)化的影響,以及巨噬細(xì)胞M1/M2比值及巨噬細(xì)胞M2a/M2b型轉(zhuǎn)化改變對脂肪細(xì)胞功能的影響,以確定功能紊亂脂肪細(xì)胞與巨噬細(xì)胞之間惡性循環(huán)的存在；并通過TRB3基因沉默確定TRB3是否打破了這種惡性循環(huán),從而為肥胖、糖尿病及其心血管并發(fā)癥的治療提供新的靶點(diǎn)。目的1.建立脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型,確定功能紊亂的脂肪細(xì)胞對巨噬細(xì)胞M1/M2比值以及巨噬細(xì)胞M2a/M2b型間轉(zhuǎn)化的作用；2.確定巨噬細(xì)胞M1/M2比值以及巨噬細(xì)胞M2a/M2b型間的轉(zhuǎn)化對脂肪細(xì)胞功能的影響；3.通過TRB3基因沉默及應(yīng)用PPARγ抑制劑確定TRB3/PPARy信號通路在脂肪細(xì)胞功能紊亂與巨噬細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化間相互影響中的作用。方法1.胰島素抵抗脂肪細(xì)胞的建立：首先,應(yīng)用胰島素、地塞米松以及3-異丁基-1-甲基-黃嘌呤將3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化為成熟的脂肪細(xì)胞,然后,向分化成熟的脂肪細(xì)胞中加入高糖(25mM)+高胰島素(10nM)刺激,繼續(xù)培養(yǎng)24h,建立脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型;2.M2a型巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)分化：采用含20ng/ml的M-CSF、20ng/ml的IL-4 RPMI 1640完全培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化Raw264.7巨噬細(xì)胞4天；3. Elisa檢測：獲取脂肪細(xì)胞上清,檢測脂肪細(xì)胞上清中INFγ、IL-4及IL-13的表達(dá)水平；4.脂肪細(xì)胞上清刺激巨噬細(xì)胞：分別獲取正常脂肪細(xì)胞與胰島素抵抗脂肪細(xì)胞的上清,將上清刺激巨噬細(xì)胞48h；5.脂肪細(xì)胞與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)：采用transwell小室(6孔,直徑0.4μm),將脂肪細(xì)胞種于transwell小室上層,將轉(zhuǎn)染TRB3空載體或TRB3基因沉默的巨噬細(xì)胞種于transwell小室下層,共培養(yǎng)48h；6.流式細(xì)胞學(xué)檢測：M1型巨噬細(xì)胞(CD11c陽性細(xì)胞)與M2型巨噬細(xì)胞(CD206陽性細(xì)胞)所占比例；7.實(shí)時定量RT-PCR檢測：獲取刺激后的巨噬細(xì)胞,提取RNA,實(shí)時定量熒光RT-PCR檢測腫瘤壞死因子α(TNFα)、白介素10(IL-10)、MR及Dectin-1 mRNA表達(dá)水平。8.巨噬細(xì)胞功能的檢測：獲取巨噬細(xì)胞,檢測巨噬細(xì)胞的粘附、遷移及吞噬功能；9. Western Blot檢測：獲取共培養(yǎng)后的脂肪細(xì)胞,提取蛋白質(zhì),Western Blot檢測脂肪合成酶(FASN)、甘油三酯脂肪酶(ATGL)、激素敏感脂肪酶(HSL)、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4 (GLUT4)以及胰島素受體底物1(IRS-1)的蛋白表達(dá)量；結(jié)果1.胰島素抵抗脂肪細(xì)胞模型的建立：與0h相比,高糖加高胰島素刺激脂肪細(xì)胞24h后,脂肪細(xì)胞的IRS-1蛋白水平明顯降低(0.6783±0.11294 vs0.2465±0.0796,P0.01)；與Oh相比,高糖加高胰島素刺激脂肪細(xì)胞24h后,脂肪細(xì)胞胞膜的GLUT4水平明顯降低(1.00±0.00 vs 0.4318±0.09309,P0.01),而脂肪細(xì)胞胞漿的GLUT4水平明顯增多(1.00±0.00 vs 1.7673±0.0975,P0.001)。結(jié)果提示,高糖加高胰島素刺激條件下,脂肪細(xì)胞IRS-1蛋白水平與糖轉(zhuǎn)運(yùn)明顯減少,出現(xiàn)胰島素抵抗。2.脂肪細(xì)胞上清刺激巨噬細(xì)胞(1)脂肪細(xì)胞上清中巨噬細(xì)胞分化誘導(dǎo)因子的改變：與正常脂肪細(xì)胞相比,胰島素抵抗脂肪細(xì)胞上清的M1型巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)因子INFγ顯著增加(27.9833±3.7226 vs 76.0333±5.85172,P0.01),M2型巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)因子IL-4、IL-13也顯著增加(3.02±0.078156 vs 7.63±0.20518, P0.05; 14.1567±0.32271 vs 21.5367±0.54229, P0.001),但是INFγ增加程度更為明顯,INFγ/IL-13比值顯著增加(1.9671±0.21447 vs 3.863±0.23059,P0.001)。結(jié)果提示,胰島素抵抗脂肪細(xì)胞可能參與了巨噬細(xì)胞M1型與M2型之間的轉(zhuǎn)化。(2)脂肪細(xì)胞上清誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞表型改變：與正常脂肪細(xì)胞上清刺激相比,胰島素抵抗脂肪細(xì)胞上清刺激顯著增加巨噬細(xì)胞M1/M2比值(1.1425±0.18347vs 5.3525±0.41085,P0.01)。(3)脂肪細(xì)胞上清誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞功能的改變：與正常脂肪細(xì)胞上清刺激相比,胰島素抵抗脂肪細(xì)胞上清刺激巨噬細(xì)胞后巨噬細(xì)胞粘附功能明顯增加(15.3333±2.02759 vs 55.0000±5.2915,P0.01),遷移功能明顯增加(24.6667±4.91031 vs 124.3333±13.01708,P0.01),吞噬功能明顯增加(14.7267±6.96525vs 48.4667±4.90453,P0.05)。3.脂肪細(xì)胞與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)(1)脂肪細(xì)胞與Raw264.7巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)：與正常脂肪細(xì)胞+空載體巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)相比,胰島素抵抗脂肪細(xì)胞+空載體巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)組巨噬細(xì)胞M1/M2比值顯著增加(1.4236±0.24252 vs 5.8494±0.1611,P0.05)；與正常脂肪細(xì)胞+空載體巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)相比,胰島素抵抗脂肪細(xì)胞+空載體巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)組巨噬細(xì)胞粘附功能顯著增加(19.6667±1.45297 vs55.3333±6.35959,P0.05)；巨噬細(xì)胞遷移功能顯著增加(27.3333±6.00925 Vs140.3333±15.60271,P0.05)；巨噬細(xì)胞吞噬功能顯著增加(10.56±3.54056 vs57.4667±3.92825,P0.05)。(2)脂肪細(xì)胞與M2a型巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)：與正常脂肪細(xì)胞相比,胰島素抵抗脂肪細(xì)胞與M2a型巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)導(dǎo)致了巨噬細(xì)胞TNFαmRNA表達(dá)顯著增加(1.0000±0.00000 vs 10.1741±0.54125,P0.05),巨噬細(xì)胞IL-10 mRNA表達(dá)顯著增加(1.0000±0.00000 vs 9.8212±1.45653,P0.05),巨噬細(xì)胞MR mRNA表達(dá)水平顯著下調(diào)(1.0000±0.00000 vs 0.1085±0.01546,P0.05),巨噬細(xì)胞Dectin-1 mRNA表達(dá)水平顯著下調(diào)(1.0000±0.00000 vs 0.0559±0.02036,P0.05),在胰島素抵抗脂肪細(xì)胞與M2a型巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)中并未檢測到M1型巨噬細(xì)胞所特有的IL-23mRNA的表達(dá)。結(jié)果提示,胰島素抵抗的脂肪細(xì)胞并未促進(jìn)M2a型巨噬細(xì)胞向M1型巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化,而是促進(jìn)了巨噬細(xì)胞由M2a狀態(tài)(TNFαlow, IL-10low,MRhigh,Dectin-1high)向M2b狀態(tài)(LNFαhigh,IL-10high,MR,Dectin-1)轉(zhuǎn)化。與正常脂肪細(xì)胞相比,胰島素抵抗脂肪細(xì)胞與M2a型巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)導(dǎo)致了巨噬細(xì)胞粘附功能顯著增加(14.6667±1.45297 vs 29.0000±5.2915,P0.05),巨噬細(xì)胞遷移功能顯著增加(8.6667±1.76383 vs 28.0000±3.4641,P0.05),巨噬細(xì)胞吞噬功能無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(86.13±5.464 vs 96.87±0.94,P0.05)。(3)巨噬細(xì)胞M1/M2比值增加對脂肪細(xì)胞功能的影響：與正常脂肪細(xì)胞+空載體巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)相比,胰島素抵抗脂肪細(xì)胞+空載體巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)在增加巨噬細(xì)胞M1/M2比值的同時,脂肪細(xì)胞FASN蛋白水平顯著增加(0.2886±0.05638 vs 0.6524±0.01138,P0.05),脂肪細(xì)胞ATGL蛋白水平顯著降低(0.3015±0.04058 vs 0.0928±0.00907,P0.05),脂肪細(xì)胞HSL蛋白水平顯著降低(0.7425±0.0442 vs 0.3727±0.03422,P0.05),脂肪細(xì)胞IRS-1蛋白水平顯著降低(0.7351±0.07402 vs 0.3363±0.02335,P0.05)。結(jié)果提示,巨噬細(xì)胞M1/M2比值的增加促進(jìn)了脂肪細(xì)胞胰島素抵抗與功能紊亂。(4)巨噬細(xì)胞M2a/M2b表型轉(zhuǎn)化對脂肪細(xì)胞功能的影響：與正常脂肪細(xì)胞與TRB3空載體M2a巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)組相比,胰島素抵抗脂肪細(xì)胞與TRB3空載體M2a型巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)在促進(jìn)巨噬細(xì)胞M2a向M2b狀態(tài)轉(zhuǎn)化的同時,脂肪細(xì)胞FASN蛋白水平顯著增加(0.3224±0.02885 vs 0.5285±0.07128,P0.05),脂肪細(xì)胞ATGL蛋白水平顯著降低(0.306±0.033336 vs 0.1462±0.03311,P0.05),脂肪細(xì)胞HSL蛋白水平顯著降低(0.7043±0.03063 vs 0.2392±0.03717,P0.05),脂肪細(xì)胞IRS-1蛋白水平顯著降低(0.6836±0.02287 vs 0.3302±0.01423,P0.05)；結(jié)果提示,巨噬細(xì)胞M2a向M2b狀態(tài)轉(zhuǎn)化促進(jìn)脂肪細(xì)胞功能紊亂與胰島素抵抗。2.TRB3基因沉默及PPARγ抑制劑對巨噬細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化及脂肪細(xì)胞功能的影響(1)TRB3基因沉默對巨噬細(xì)胞M1/M2比值及脂肪細(xì)胞功能的影響：與胰島素抵抗脂肪細(xì)胞+空載體巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)相比,胰島素抵抗脂肪細(xì)胞+TRB3基因沉默巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)導(dǎo)致巨噬細(xì)胞M1/M2比值顯著降低(5.38494±0.1611vs 2.7752±0.1482,P0.05)。與胰島素抵抗脂肪細(xì)胞+空載體巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)相比,胰島素抵抗脂肪細(xì)胞+TRB3基因沉默巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)導(dǎo)致脂肪細(xì)胞FASN蛋白水平顯著降低(0.6524+0.01138 vs 0.4978±0.02013,P0.05),脂肪細(xì)胞ATGL蛋白水平顯著增加(0.0928±0.00907 vs 0.2284±0.02413,P0.05),脂肪細(xì)胞HSL蛋白水平顯著增加(0.3727±0.0342 vs 0.6234+0.03253,P0.05),脂肪細(xì)胞IRS-1蛋白水平顯著增加(0.3363±0.02335 vs 0.5457±0.049,P0.05)；結(jié)果提示,巨噬細(xì)胞TRB3基因沉默在顯著降低巨噬細(xì)胞M1/M2比值的同時,改善了脂肪細(xì)胞功能紊亂與胰島素抵抗。(2)TRB3基因沉默對巨噬細(xì)胞M2a/M2b表型轉(zhuǎn)化及脂肪細(xì)胞功能的影響：與胰島素抵抗脂肪細(xì)胞+TRB3空載體M2a巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)組相比,胰島素抵抗脂肪細(xì)胞與TRB3基因沉默的M2a型巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)導(dǎo)致了巨噬細(xì)胞TNFα mRNA表達(dá)顯著降低(10.1741±0.54125 vs 4.078±0.32861,P0.05),巨噬細(xì)胞IL-10 mRNA表達(dá)顯著降低(9.8212±1.45653 vs 4.9922±0.52921,P0.05),巨噬細(xì)胞MR mRNA表達(dá)水平顯著增加(0.1085±0.01546 vs 0.3037±0.05341,P0.05),巨噬細(xì)胞Dectin-1 mRNA表達(dá)水平顯著增加(0.0559±0.02036 vs0.4244±0.03933,P0.05)。結(jié)果提示,TRB3基因沉默降低了巨噬細(xì)胞由M2a型向M2b型轉(zhuǎn)化。與胰島素抵抗脂肪細(xì)胞+TRB3空載體M2a巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)相比,胰島素抵抗脂肪細(xì)胞與TRB3基因沉默的M2a型巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)組脂肪細(xì)胞FASN蛋白水平顯著降低(0.5285±0.07128 vs 0.3591±0.03328,P0.05),脂肪細(xì)胞ATGL蛋白水平顯著增加(0.1462±0.03311 vs 0.2508±0.02857,P0.05),脂肪細(xì)胞HSL蛋白水平顯著增加(0.2392±0.03717 vs 0.3945±0.06253,P0.05),脂肪細(xì)胞IRS-1蛋白水平顯著增加(0.3302±0.01423 vs 0.4754±0.03142,P0.05)。結(jié)果提示,TRB3基因沉默在抑制巨噬細(xì)胞M2a向M2b狀態(tài)轉(zhuǎn)化的同時,改善了脂肪細(xì)胞功能紊亂與胰島素抵抗。(3) PPARγ抑制劑對巨噬細(xì)胞M1/M2比值及脂肪細(xì)胞功能的影響：與胰島素抵抗脂肪細(xì)胞+TRB3基因沉默共培養(yǎng)相比,胰島素抵抗脂肪細(xì)胞+TRB3基因沉默+GW9662共培養(yǎng)顯著增加了巨噬細(xì)胞M1/M2比值(2.7752±0.1482 vs4.65±0.27095,P0.05)。結(jié)果提示,PPARγ抑制劑逆轉(zhuǎn)了TRB3基因沉默導(dǎo)致的巨噬細(xì)胞M1/M2比值的減少。與胰島素抵抗脂肪細(xì)胞+TRB3基因沉默共培養(yǎng)相比,胰島素抵抗脂肪細(xì)胞+TRB3基因沉默+GW9662共培養(yǎng)在顯著增加巨噬細(xì)胞M1/M2比值的同時,脂肪細(xì)胞FASN蛋白水平顯著增加(0.3564±0.0451 vs 0.6689±0.04726,P0.05),脂肪細(xì)胞ATGL蛋白水平顯著降低(0.709±0.06562 vs 0.4023±0.07475,P0.05),脂肪細(xì)胞HSL蛋白水平顯著降低(0.7144±0.05866 vs 0.3132±0.10777,P0.05),脂肪細(xì)胞IRS-1蛋白水平顯著降低(0.9044±0.09809 vs 0.6102＋0.03064,P0.05)。結(jié)果提示,PPARγ抑制劑逆轉(zhuǎn)了TRB3基因沉默導(dǎo)致的脂肪細(xì)胞功能改善。(4) PPARγ抑制劑對巨噬細(xì)胞M2a/M2b表型轉(zhuǎn)化及脂肪細(xì)胞功能的影響：與胰島素抵抗脂肪細(xì)胞與TRB3基因沉默的M2a型巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)相比,PPARγ抑制劑GW9662導(dǎo)致了巨噬細(xì)胞TNFαmRNA表達(dá)顯著增加(1.0000±0.00000 vs3.6803±0.18148,P0.05),巨噬細(xì)胞IL-10mRNA表達(dá)顯著增加(1.0000±0.00000vs 3.3744±0.64555,P0.05),巨噬細(xì)胞MRmRNA表達(dá)顯著降低(1.0000±0.00000vs 0.2635±0.03888,P0.05),巨噬細(xì)胞Dectin-1 mRNA表達(dá)顯著降低(1.0000±0.00000 vs 0.4154±0.04681,P0.05)。結(jié)果提示,PPARγ抑制劑逆轉(zhuǎn)了TRB3基因沉默導(dǎo)致的巨噬細(xì)胞M2a向M2b狀態(tài)轉(zhuǎn)化的減少。與胰島素抵抗脂肪細(xì)胞與TRB3基因沉默的M2a型巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)相比,PPARγ抑制劑GW9662導(dǎo)致子脂肪細(xì)胞FASN蛋白水平顯著增加(0.2906±0.0402vs 0.4728±0.02693,P0.05),脂肪細(xì)胞ATGL蛋白水平顯著降低(0.725±0.03671vs 0.3835±0.04293,P0.05),脂肪細(xì)胞HSL蛋白水平顯著降低(1.0795±0.11401vs 0.7006±0.05019,P0.05),脂肪細(xì)胞IRS-1蛋白水平顯著降低(0.6893±0.01518vs 0.3655±0.06295,P0.05)。結(jié)果提示,PPARγ抑制劑逆轉(zhuǎn)了TRB3基因沉默導(dǎo)致的脂肪細(xì)胞功能改善。。3.TRB3與PPARγ相互作用：胰島素抵抗脂肪細(xì)胞上清刺激巨噬細(xì)胞后,隨著時間延長,與0h相比,在12h、24h及48h巨噬細(xì)胞TRB3蛋白水平表達(dá)顯著增加(0.6437±0.04636 vs 0.7816±0.03266 vs 1.0100±0.0975 vs 1.2375±0.08942,P0.05);胰島素抵抗脂肪細(xì)胞上清刺激巨噬細(xì)胞后,隨著時間延長,與0h相比,在24h及48h巨噬細(xì)胞PPARy蛋白水平表達(dá)顯著降低(0.3363±0.02182 vs 0.3929±0.01287 vs 0.1844±0.011,P0.05);免疫共沉淀結(jié)果顯示,與正常脂肪細(xì)胞上清刺激相比,胰島素抵抗脂肪細(xì)胞上清刺激巨噬細(xì)胞后,TRB3與PPARγ蛋白結(jié)合顯著增加；共培養(yǎng)結(jié)果顯示,與胰島素抵抗脂肪細(xì)胞+空載體巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)相比,TRB3基因沉默在降低巨噬細(xì)胞M1/M2比值的同時,可顯著增加PPARγ蛋白水平(0.1762±0.02853 vs 0.28829±0.00807,P0.05)。結(jié)果提示,TRB3/PPARγ信號通路可能參與了巨噬細(xì)胞極化的調(diào)節(jié)。結(jié)論1.胰島素抵抗脂肪細(xì)胞促進(jìn)巨噬細(xì)胞M1/M2比值的增加及巨噬細(xì)胞由M2a型向M2b型的轉(zhuǎn)化；2.巨噬細(xì)胞M1/M2比值的增加及巨噬細(xì)胞由M2a型向M2b型的轉(zhuǎn)化促進(jìn)脂肪細(xì)胞功能紊亂；3.TRB3基因沉默通過抑制巨噬細(xì)胞M1/M2比值的增加及巨噬細(xì)胞由M2a型向M2b型的轉(zhuǎn)化,改善脂肪功能紊亂；4. TRB3/PPARγ信號通路在脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞極化過程中起著重要作用；背景流行病學(xué)研究顯示,全球糖尿病正以驚人的速率增長,直到2030年中國將成為糖尿病人口最多的兩個國家之一。糖尿病是包括動脈粥樣硬化性心臟病在內(nèi)的多種疾病的危險因素。胰島素抵抗是2型糖尿病的重要特征。脂肪組織是胰島素抵抗產(chǎn)生的始發(fā)部位。因此,丞需探索糖尿病脂肪組織胰島素抵抗發(fā)生發(fā)展的深層次機(jī)制,為治療糖尿病相關(guān)疾病提供可靠的理論依據(jù)。脂肪組織與胰島素抵抗密切相關(guān),脂肪組織分為白色脂肪與棕色脂肪組織,以往主要單獨(dú)研究各類脂肪組織對胰島素抵抗的作用,并沒有對同一機(jī)體不同部位的脂肪組織對胰島素抵抗的作用進(jìn)行比較。白色脂肪組織分為內(nèi)臟與皮下脂肪組織,相比而言,內(nèi)臟脂肪與胰島素抵抗關(guān)系更為密切。研究證實(shí)棕色脂肪亦與胰島素抵抗密切相關(guān)。胰島素抵抗的產(chǎn)生與脂肪組織中促炎癥因子與抗炎癥因子的失衡有關(guān),而決定炎癥因子表達(dá)的是脂肪組織中促炎癥的M1型巨噬細(xì)胞與抗炎癥的M2型巨噬細(xì)胞的平衡。但脂肪組織巨噬細(xì)胞極化的機(jī)制并不清楚。STAMP2,是一種六次跨膜蛋白,屬于STAMP或STEAP家族。STAMP2具有調(diào)節(jié)炎癥與胰島素抵抗的作用。Wellen研究發(fā)現(xiàn),在STAMP2敲除的小鼠,內(nèi)臟脂肪STAMP2的缺乏要比皮下脂肪顯著,而棕色脂肪中STAMP2的表達(dá)量未有報道。研究亦發(fā)現(xiàn),STAMP2缺乏可以增加脂肪組織中巨噬細(xì)胞的浸潤,但與巨噬細(xì)胞極性轉(zhuǎn)化的關(guān)系并不清楚。為了研究STAMP2對糖尿病小鼠不同部位脂肪組織中炎癥與巨噬細(xì)胞的影響,我們構(gòu)建了2型糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠模型,體內(nèi)應(yīng)用STAMP2腺病毒過表達(dá),檢測STAMP2對各脂肪組織中巨噬細(xì)胞浸潤、極化、炎癥因子表達(dá)及信號通路的影響,探討在糖尿病狀態(tài)下,STAMP2可能通過調(diào)節(jié)不同脂肪組織中巨噬細(xì)胞的極化而作為整合炎癥與胰島素抵抗的樞紐,改善能量與代謝平衡。目的1.探討2型糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠不同部位脂肪組織中STAMP2表達(dá)量的改變；2.探討2型糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠不同部位脂肪組織中巨噬細(xì)胞數(shù)量、M1/M2型巨噬細(xì)胞比例的不同；3.探討STAMP2過表達(dá)對ApoE-/-/LDLR-/-小鼠不同部位脂肪組織中巨噬細(xì)胞數(shù)量、M1/M2型巨噬細(xì)胞比例的影響。方法1.建立2型糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠模型：將32只3周齡小鼠隨機(jī)分為對照組(n=16)與高脂飲食組(n=16),高脂飲食組高脂喂養(yǎng)6周后,經(jīng)糖耐量實(shí)驗(yàn)證實(shí)出現(xiàn)胰島素抵抗的腹腔注射STZ,再高脂喂養(yǎng)2周,至小鼠11周齡時再行腹腔糖耐量實(shí)驗(yàn)(IPGTT),隨機(jī)血糖≥11.1mmol/l的小鼠入組為糖尿病組;2.實(shí)驗(yàn)動物分組：在ApoE-/-/LDLR-/-小鼠20周齡時,將對照組分為對照+STAMP2空載體組、對照+STAMP2過表達(dá)組、糖尿病+STAMP2空載體組、糖尿病+STAMP2過表達(dá)組；3.IPGTT試驗(yàn)：小鼠空腹10-16h,按照2g/kg體重腹腔注射葡萄糖,然后于0min、15 min、30 min、60 min和120 min分別斷尾取血檢測血糖；4.定時監(jiān)測ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重；5.病理學(xué)檢測：對附睪、皮下及棕色脂肪組織分別進(jìn)行HE染色；通過免疫組織化學(xué)染色的方法檢測脂肪組織內(nèi)巨噬細(xì)胞總量(F4/80)、M1型巨噬細(xì)胞(CDl1c)、M2型巨噬細(xì)胞(CD206)的含量,計(jì)算巨噬細(xì)胞M1/M2的比值；通過免疫組織化學(xué)染色的方法檢測脂肪組織內(nèi)促炎癥因子單核細(xì)胞趨化因子1(MCP-1)、腫瘤壞死因子α(TNFα)及白介素6(IL-6)與抗炎癥因子白介素10(IL-10)的表達(dá)水平；油紅O染色確定肝臟組織脂質(zhì)含量；6.Western Blot檢測：取新鮮附睪、皮下及棕色脂肪組織,提取蛋白質(zhì),Western Blot檢測脂肪組織STAMP2、p-JNK以及JNK蛋白表達(dá)水平。7.結(jié)果1.建立2型糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠模型：(1)IPGTT實(shí)驗(yàn)顯示,3周齡時對照組與糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠在血糖水平無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均0.05)；高脂飲食6周后,與對照組ApoE-/-/ LDLR-/-小鼠相比,糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠在15min.30min.60min及120min血糖水平顯著增加,血糖曲線下面積顯著增加(P均0.05)；11周齡時,與對照組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠在Omin、15min、 30min、60min及120min血糖水平顯著增加,血糖曲線下面積顯著增加(P均0.05)；(2)與對照組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠在9周齡(23.2400±0.57651 vs 26.5867±0.73055,P=0.001)、20周齡(26.8333±0.62272 vs 30.5133±0.70855,P=0.001)、22周齡(26.51±0.49226 vs 29.57±0.63317,P0.0010及24周齡(25.81±0.68936 vs 28.40±0.47352,P=0.002)時體重顯著增加。2.ApoE-/-/LDLR-/-小鼠脂肪組織STAMP2表達(dá)情況(1)與對照組A-poE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠附睪、棕色脂肪組織中內(nèi)源性STAMP2蛋白表達(dá)水平顯著降低(0.9596±0.0268 vs 0.5416±0.06812,P=0.002;1.0120±0.10051 vs 0.6134±0.03813,P=0.004),皮下脂肪組織中內(nèi)源性STAMP2蛋白表達(dá)水平無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(0.0214±0.00474 vs 0.0162±0.00151,P0.05)；(2)與對照+STAMP2空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,對照+STAMP2過表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠附睪與棕色脂肪組織中STAMP2蛋白表達(dá)水平顯著增加(0.9596±0.0268 vs 1.2114±0.04363,P=0.019;1.0120±0.10051 vs 1.1233 ±0.05992,P=0.020),皮下脂肪組織中STAMP2蛋白表達(dá)水平無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(0.0214±0.00474 vs 0.0271±0.00729,P0.05)；(3)與糖尿病+STAMP2空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病+STAMP2過表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠附睪與棕色脂肪組織中STAMP2蛋白表達(dá)水平顯著增加(0.5416±0.06812 vs 0.7783±0.09189,P=0.028;0.6134± 0.03813 vs 0.8475±0.06312,P=0.044),皮下脂肪組織中STAMP2蛋白表達(dá)水平無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(0.0162±0.00151 vs 0.0189±0.00197,P0.05)；4.STAMP2過表達(dá)對ApoE-/-/LDLR-/-小鼠脂肪組織形態(tài)學(xué)影響：(1)與對照組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠附睪與皮下脂肪細(xì)胞均顯著增大,棕色脂肪組織出現(xiàn)大的脂質(zhì)空泡,有棕色脂肪白色變現(xiàn)象。(2)與對照+STAMP2空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,對照+STAMP2過表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠附睪脂肪細(xì)胞顯著減小,皮下脂肪細(xì)胞大小無顯著性差異,棕色脂肪組織中脂質(zhì)空泡顯著減小,逆轉(zhuǎn)棕色脂肪白色變現(xiàn)象。(3)與糖尿病+STAMP2空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病+STAMP2過表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠附睪脂肪細(xì)胞顯著減小,皮下脂肪細(xì)胞大小無顯著性差異,棕色脂肪組織中脂質(zhì)空泡顯著減小,逆轉(zhuǎn)棕色脂肪白色變現(xiàn)象。5.STAMP2過表達(dá)對ApoE-/-/LDLR-/-小鼠脂肪組織巨噬細(xì)胞浸潤與極化改變的影響：(1)與對照組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠附睪、皮下及棕色脂肪組織中巨噬細(xì)胞浸潤顯著增加,巨噬細(xì)胞M1/M2比值顯著增加(0.45±0.02 vs 3.22±0.81,P0.05;0.162±0.017 vs 2.65±0.071,P0.05;0.312 ±0.014 vs 2.87±0.32,P0.05);(2)與對照+STAMP2空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,對照+STAMP2過表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠附睪與棕色脂肪組織中巨噬細(xì)胞浸潤顯著減少,M1/M2比值顯著減少(0.45±0.02 vs 0.17±0.01,P0.05;0.312±0.014 vs 0.111 ±0.017,P0.05),皮下脂肪組織中巨噬細(xì)胞浸潤與巨噬細(xì)胞M1/M2比值無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(0.162±0.017 vs 0.143±0.028,P0.05)；(3)與糖尿病+STAMP2空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病+STAMP2過表達(dá)組ApoE-/-LDLR-/-小鼠附睪與棕色脂肪組織中巨噬細(xì)胞浸潤顯著減少,M1/M2比值顯著減少(3.22±0.81 vs 1.97±0.21,P0.05;2.87±0.32 vs 1.125±0.191,P0.05),皮下脂肪組織中巨噬細(xì)胞浸潤及巨噬細(xì)胞M1/M2比值無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2.65±0.071 vs 2.14±0.0613,P0.05)；6.STAMP2過表達(dá)對ApoE-/-/LDLR-/-小鼠脂肪組織炎癥表達(dá)的影響：(1)與對照組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠附睪、皮下及棕色脂肪組織中MCP-1(0.0097±0.0012 vs 0.1179±0.0278,P0.05; 0.0271±0.00415 vs 0.1113±0.01798,P0.05;0.0041±0.0008 vs 0.0972±0.0127, P0.05)、IL-6(0.0192±0.00474 vs 0.1148±0.02501,P0.05;0.0251±0.00315 vs 0.1458±0.03405,P0.05;0.0247±0.00948 vs 0.0811±0.01824,P0.05)、 TNFα(0.0152±0.00293 vs 0.1428±0.0168,P0.05;0.0196±0.00176 vs 0.1255 ±0.02125,P0.05;0.0017409±0.003534 vs 0.063732±0.007889,P0.05)及 IL-10 (0.0128±0.0012 vs 0.0421±0.0092,P0.05;0.0019±0.0003 vs 0.0247± 0.0075,P0.05;0.0067±0.0001 vs 0.0311±0.0014,P0.05)均顯著增加,但抗炎癥因子IL-10增加程度低于促炎癥因子MCP-1、IL-6及TNFα;(2)與對照+STAMP2空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,對照+STAMP2過表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠附睪與棕色脂肪組織中促炎癥因子MCP-1(0.0097±0.0012 vs 0.0063±0.0014,P0.05;0.0041±0.0008 vs 0.0028± 0.0002,P0.05)、IL-6 (0.0192±0.00474 vs 0.0164±0.00347,P0.05;0.0247 ±0.00948 vs 0.0207±0.00375,P=0.002)及TNFα(0.0152±0.00293 vs 0.0084± 0.0012,P0.05;0.0017409±0.003534 vs 0.0028±0.001868,P0.05)顯著減少,抗炎癥因子IL-10顯著增加(0.0128±0.0015 vs 0.0293±0.0092,P0.05;0.0067 ±0.0001 vs 0.0102±0.0002,P0.05),皮下脂肪組織中炎癥因子表達(dá)無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；(3)與糖尿病+STAMP2空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病+STAMP2過表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠附睪與棕色脂肪組織中促炎癥因子MCP-1(0.1179±0.0278 vs 0.0723±0.0089,P0.05;0.0972±0.0127 vs 0.0423± 0.0098,P0.05)、IL-6 (0.1148±0.02501 vs 0.0486±0.00519,P0.05；0.0811 ±0.01824 vs 0.0547±0.00472,P0.05)及TNFα (0.1428±0.0168 vs 0.0976±0.0172,P0.05;0.063732±0.007889 vs 0.040171±0.004773,P0.05)顯著減少,抗炎癥因子IL-10顯著增加(0.0421±0.0092 vs 0.057±0.0139,P0.05;0.0311 ±0.0014 vs 0.0392±0.0105,P0.05),皮下脂肪組織中炎癥因子表達(dá)無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；7.STAMP2過表達(dá)對ApoE-/-/LDLR-/-小鼠糖耐量實(shí)驗(yàn)的影響：(1)在實(shí)驗(yàn)?zāi)?與對照組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠及糖尿病+STAMP2過表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重均顯著增加(P均0.05)；與糖尿病+STAMP2空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病+STAMP2過表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠體重?zé)o顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)IPGTT實(shí)驗(yàn)顯示,與糖尿病+STAMP2空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病+STAMP2過表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠在Omin、15min、30min、60min及120min血糖水平顯著降低,血糖曲線下面積顯著降低(P均0.05)。結(jié)果提示,STAMP2過表達(dá)改善了糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)。8.STAMP2過表達(dá)對ApoE-/-/LDLR-/-小鼠肝臟脂質(zhì)沉積的影響：與對照組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病+STAMP2空載體組ApoE-/-LDLR-/-小鼠及糖尿病+STAMP2過表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠脂質(zhì)沉積顯著增加(2.63±0.59 vs 7.00±1.7,P0.05;2.63±0.59 vs 5.21±0.8,P0.05);與糖尿病+STAMP2空載體組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病+STAMP2過表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠脂質(zhì)沉積顯著減少(7.00±1.7 vs 5.21±0.8,P0.05)。9.STAMP2過表達(dá)抑制了JNK信號通路與糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病+STAMP2過表達(dá)組ApoE-/-LDLR-/-小鼠附睪脂肪組織中p-JNK/JNK降低了55%；與糖尿病A-poE-/-LDLR-/-小鼠相比,糖尿病+STAMP2過表達(dá)組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠棕色脂肪組織中p-JNK/JNK降低了54.6%。結(jié)論1.與對照組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比,糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠附睪與棕色脂肪組織中STAMP2表達(dá)水平顯著降低,皮下脂肪組織STAMP2表達(dá)水平無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；2.STAMP2過表達(dá)可顯著降低附睪與棕色脂肪組織中巨噬細(xì)胞總量及巨噬細(xì)胞M1/M2比值,相應(yīng)地,促炎癥因子表達(dá)減少,抗炎癥因子表達(dá)增加；3.STAMP2過表達(dá)可通過影響巨噬細(xì)胞極化改善糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠胰島素抵抗。
【關(guān)鍵詞】：心外膜脂肪組織 巨噬細(xì)胞極化 冠心病 糖尿病 巨噬細(xì)胞極化 脂肪細(xì)胞 TRB3 PPARγ 糖尿病 STAMP2 脂肪組織 巨噬細(xì)胞極化
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1;R541.4
【目錄】：

• 論文Ⅰ 脂肪組織巨噬細(xì)胞極化與合并糖尿病的冠心病患者冠脈病變嚴(yán)重程度的相關(guān)性研究8-91
• 中文摘要8-14
• 英文摘要14-20
• 符號說明20-22
• 前言22-25
• 材料與方法25-47
• 結(jié)果47-52
• 討論52-61
• 結(jié)論61-63
• 附表63-66
• 附圖66-79
• 參考文獻(xiàn)79-91
• 論文Ⅱ TRB3基因沉默調(diào)控巨噬細(xì)胞極化及改善脂肪功能紊亂的機(jī)制研究91-191
• 中文摘要91-99
• 英文摘要99-107
• 符號說明107-109
• 前言109-112
• 材料與方法112-125
• 結(jié)果125-136
• 討論136-145
• 結(jié)論145-146
• 附圖146-180
• 參考文獻(xiàn)180-191
• 論文Ⅲ STAMP2基因過表達(dá)通過介導(dǎo)脂肪組織巨噬細(xì)胞極化改善糖尿病ApoE~(-/-)/LDLR~(-/-)小鼠胰島素抵抗191-239
• 中文摘要191-198
• 英文摘要198-205
• 符號說明205-206
• 前言206-208
• 材料與方法208-214
• 結(jié)果214-222
• 討論222-226
• 結(jié)論226-227
• 附圖227-235
• 參考文獻(xiàn)235-239
• 致謝239-240
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文240-241
• SCI論文Ⅰ241-256
• SCI論文Ⅱ256-270
• 附件270

【相似文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：TRB3介導(dǎo)的脂肪組織巨噬細(xì)胞極化與糖尿病冠狀動脈病變關(guān)系的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：359908