本文關(guān)鍵詞：迷走神經(jīng)調(diào)節(jié)對重癥胰腺炎大鼠早期炎癥反應(yīng)和器官功能的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：過度炎癥反應(yīng)及其所致的多臟器功能障礙綜合癥(multiple organ dysfunction syndrome, MODS)是重癥急性胰腺炎(Severe acute pancreatitis, SAP)早期死亡的重要原因,發(fā)病早期控制過度炎癥反應(yīng)是提高SAP生存率的關(guān)鍵。在炎癥反應(yīng)和遭受損傷時,機體通過神經(jīng)內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng)之間信息交換,調(diào)控免疫反應(yīng)炎癥反射,保持內(nèi)穩(wěn)態(tài),避免機體遭受進(jìn)一步侵害。迷走神經(jīng)介導(dǎo)的炎癥反射即膽堿能抗炎通路是機體遭受致命損傷和感染后減輕打擊的強大力量,中樞神經(jīng)系統(tǒng)接收到通過迷走神經(jīng)傳入信號感受到的炎癥反應(yīng),中樞通過迷走神經(jīng)傳出纖維發(fā)出調(diào)節(jié)信號,迷走神經(jīng)信號通過T-淋巴細(xì)胞上a7煙堿型乙酰膽堿受體,可以減輕外圍的免疫反應(yīng),包括促炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生、白細(xì)胞招募和核因子κB激活。激活這一通路或通過迷走神經(jīng)刺激或α7膽堿能受體激動劑可以防止多個模型的全身炎癥反應(yīng),減輕休克和敗血癥中的組織損傷。我們前期研究發(fā)現(xiàn)SAP早期交感神經(jīng)活性增加,加重炎癥反應(yīng),通過β受體阻滯劑可以減輕炎癥反應(yīng)。迷走神經(jīng)作為自主神經(jīng)系統(tǒng)的重要組成部分,與交感神經(jīng)一起共同維持神經(jīng)免疫平衡,在動物實驗中,切斷胰腺炎小鼠迷走神經(jīng),淀粉酶明顯比對照組升高,但SAP時迷走神經(jīng)功能狀態(tài)的變化及其對炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)尚不明確。因此,我們設(shè)想SAP早期迷走功能狀態(tài)發(fā)生改變,迷走神經(jīng)功能狀態(tài)的變化與SIRS與迷走神經(jīng)功能有關(guān),如果假設(shè)成立,通過調(diào)節(jié)迷走神經(jīng)興奮性,就可能為SAP早期控制過度炎癥反應(yīng)、減輕器官功能損害提供了一個新治療路徑。研究目的：1.證實SAP早期迷走神經(jīng)功能狀態(tài)的改變,并探討與全身炎癥反應(yīng)關(guān)系；2.通過阻斷/增強迷走神經(jīng)興奮性,證實迷走神經(jīng)活性對SAP炎癥反應(yīng)和器官功能的影響及其機制。研究內(nèi)容如下第一部分SAP大鼠迷走神經(jīng)功能和炎癥反應(yīng)的關(guān)系目的：證實SAP大鼠存在迷走神經(jīng)功能異常,探討SAP大鼠迷走神經(jīng)功能和炎癥因子之間的關(guān)系。方法：SD雄性大鼠18只,隨機分Control組(假手術(shù)組)、SAP組(3.5%牛磺膽酸鈉胰膽管逆行注射,1 ml/kg)和SAP+VGX組(左側(cè)頸迷走神經(jīng)切斷術(shù)后2小時,3.5%�；悄懰徕c胰膽管逆行注射,lml/kg)。造模后,行股靜脈置管補液,補充生理鹽水,速度10ml/kg.h。在模型穩(wěn)定后Oh、1h、2h、4h和6h檢測大鼠的HRV。在模型穩(wěn)定后4h抽取大鼠的靜脈血,檢測TNF-α、IL-1β和IL-10水平(ELISA); SAP組大鼠造模4h后肺組織檢測MDA, MPO水平。所有計量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,使用One-way ANOVA,多組數(shù)據(jù)間兩兩比較使用LSD法(SPSS 18.0),p0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果：1、Control組相比,SAP和SAP+VGX組HRV的nHF在模型穩(wěn)定后0h、1h、2h、4h和6h都明顯升高,但SAP+VGX組較SAP組降低,SAP+VGX vs SAP, p 0.05; nLF/nHF在0h、1h、2h、4h、6h都明顯升高,SAP、SAP+VGX vs Control , p0.05; SAP+VGX組較SAP組增高,SAP+VGX vs SAP, p0.05o和Control組(127.51±17.28ug/ml)相比,SAP組和SAP+VGX組大鼠造模4h后血清Ach濃度增高,p0.05；但SAP+VGX (136.25±13.91 ug/ml)組較SAP( 165.25±11.93 ug/ml)組降低,* p0.05 VGX+SAP vs.SAP 。2、和Control相比,SAP、SAP+VGX組和Control組大鼠血清TNF-α水平分別為191.0±33.4 pg/ml、272.6±33.5 pg/ml和34.8±3.9pg/ml,與Control組相比,SAP、SAP+VGX組血清TNF-α水平明顯增高(p0.05),SAP+VGX組高于SAP組(p0.05)；SAP、SAP+VGX組血清IL-1β水平分別為269.7±26.3 pg/ml和334.8±30.6 pg/ml,與Control組(39.8±6.1 pg/ml)相比,SAP、SAP+VGX組血清IL-1 β水平明顯增高(p0.05),SAP+VGX組高于SAP組(p0.05)；SAP、SAP+VGX組血清IL-10水平分別為34.1±3.6 pg/ml,30.6±2.2 pg/ml,和Control(25.2±3.4 pg/ml)相比,SAP、SAP+VGX組無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)；造模后4hSAP、SAP+VGX組肺組織MDA、MPO水平明顯增高,SAP+VGX組高于SAP組。3、迷走神經(jīng)活性與炎癥介質(zhì)水平相關(guān)性分析,(?)LF/nHF和血清TNF-α水平呈正相關(guān),r=0.837,p0.05；](?)LF/nHF和血清IL-1β水平呈正相關(guān),r=0.827,p0.05；迷走神經(jīng)在正常對照基礎(chǔ)上的變化△nHF與炎癥因子TNF-α的增加呈負(fù)相關(guān),r=-0.751,p0.05;IL-1β的增加呈負(fù)相關(guān),r=-0.870,p0.05。結(jié)論：SAP大鼠早期存在自主神經(jīng)功能失調(diào),表現(xiàn)為交感與迷走神經(jīng)興奮性增加,交感神經(jīng)興奮性高于迷走神經(jīng)興奮性。阻斷SAP大鼠迷走神經(jīng)活性,加重炎癥反應(yīng),但不改變抗炎因子。第二部分α7nAChR激動劑對SAP大鼠炎癥反應(yīng)和器官功能的影響目的：觀察a7nAChR激動劑尼古丁對SAP大鼠炎癥反應(yīng)和器官功能的影響。方法：SD雄性大鼠36只,隨機分為三組：Control組、SAP組以及SAP+Nico組各12只,一半用于觀察生存率。SAP組即建立SAP大鼠模型并且靜脈補充生理鹽水,SAP模型建立同研究一。SAP+Nico組在造模穩(wěn)定后,腹腔注射尼古丁,尼古丁劑量為100ug/kg.h。所有大鼠行股動脈置管持續(xù)監(jiān)測動脈血壓,同時監(jiān)測心率變化。股動脈抽動脈血行血氣分析,并處死大鼠取材(造模4h后)。通過血清酶學(xué)以及病理評定胰腺炎嚴(yán)重度；通過血氣分析、肺干濕重比以及病理評估肺功能情況；通過血生化檢驗評估肝腎功能。結(jié)果：1、腹腔注射a7nAChR激動劑尼古丁4h后,模型處于穩(wěn)定狀態(tài),SAP組大鼠nHF(66.2±2.9nu)相比于Control組(45.5±1.9nu)明顯增高(p0.05), SAP+Nicotine組大鼠的迷走神經(jīng)活性(72.4±1.6nu)相比于SAP組增高(p0.05)。交感/迷走神經(jīng)平衡性(nLF/nHF) SAP+Nicotine組比SAP組高(1.55±0.11 vs 1.73±0.15, p0.05); SAP組和control組相比,變化更加明顯(p0.05)。2、腹腔注射a7nAChR激動劑尼古丁4h后,SAP組、SAP+Nicotine組大鼠血清TNF-α水平比明顯增高control組(34.8±3.9pg/ml, p0.05)。而SAP+Nicotine組和SAP組對比,NF-α水平降低有統(tǒng)計學(xué)差異(143.4±16.7pg/ml vs191.1±33.4pg/ml,p0.05)；IL-1β水平SAP組.SAP+Nicotine組均高于Control組(39.7±6.1pg/ml,p0.05),SAP+Nicotine組與SAP組(269.7±26.3pg/ml vs 181.9± 22.6pg/ml),IL-1β水平明顯降低,p0.05。3、腹腔注射α7nAChR激動劑尼古丁4h后,反應(yīng)胰腺變化的血清淀粉酶和脂肪酶均發(fā)生一定的變化,SAP+Nico組、SAP組大鼠的血清淀粉酶和脂肪酶均高于對照組,但SAP+Nico組較SAP組低；SAP+Nico組胰腺病理評分顯示結(jié)構(gòu)損傷(3.25±0.46)和組織壞死(2.12±0.64)均較SAP組結(jié)構(gòu)損傷(3.50±0.53)組織還是(2.63±0.52)降低(p0.05)。反應(yīng)組織灌注的乳酸水平SAP組大鼠明顯低于SAP±Nicotine組大鼠,(3.70±0.32umol/L vs 2.31±0.69 umol/L,p0.05),兩組均高于control組(0.50±0.15umol/L,p0.05).肺組織中SAP+Nicotine組、SAP組大鼠的MPO.MDA水平都明顯高于對照組(p0.05),SAP+Nicotine組大鼠的肺臟MPO、MDA水平低于SAP組(p0.05)；SAP組、SAP+Nicotine組大鼠的肺W/D高于control組(3.75±0.25,p0.05):SAP組的BE水平明顯低于control組(0.28±0.16umol/L),SAP+Nicotine組和SAP組對比,BE值增高(-1.66±0.55umol/L vs-2.5±0.3l umol/L,p0.05)；肺組織病理評分顯示炎癥反應(yīng)和局部壞死評分SAP+NicOtine組比SAP組低(p0.05)。腎臟的影響變現(xiàn)如下,SAP+Nicotine組大鼠胱抑素C水平低于SAP組(0.63±0.06 mg/ml vs 0.48±0.05 mg/ml,p0.05),與Control組比較無差異(p0.05).SAP.SAP+Nico組大鼠肝臟病理顯示肝細(xì)胞水腫、炎性細(xì)胞浸潤,生化檢查SAP+Nicotine組大鼠ALT(91.88±10.37U/L)比SAP組(122.63±15.56U/L)低,(p0.05)；但AST檢測：SAP.SAP+Nico組組間無統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)。4、腹腔注射尼古丁后SAP+Nico組大鼠最長存活72h,高于SAP大鼠生存率60h,p0.05。結(jié)論：α7AChR激動劑激動劑尼古丁能夠減輕炎癥反應(yīng)；降低SAP大鼠的胰腺損傷,改善肺、肝、腎器官功能。第三部分迷走神經(jīng)對SAP大鼠炎癥反應(yīng)調(diào)控機制的探討目的：探討迷走神經(jīng)興奮性對SAP炎癥反應(yīng)調(diào)控的機制。方法：實驗動物造模同研究一,尼古丁腹腔注射；隨機分為五組,每組6只：Control組、SAP組以及SAP+Nico組(50ug/kg) 、SAP+Nico組(100ug/kg)、SAP+Nico組(300ug/kg);造模4h后取材,取外周血和胰腺,流式細(xì)胞儀對CD4+CD25+T細(xì)胞計數(shù),檢測FOXP3、CTLA-4蛋白表達(dá)水平,熒光定量PCR檢測FOXP3、CTLA-4 mRNA水平(相對定量)。各檢測指標(biāo)以標(biāo)準(zhǔn)對照組檢測參數(shù)為基數(shù)參照對比,設(shè)基數(shù)水平為1,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,SPSS 13.0統(tǒng)計軟件多組間單向方差分析(LSD法),秩相關(guān)檢測各研究數(shù)據(jù)間相關(guān)性。結(jié)果：1、腹腔注射尼古丁后4h, SAP組外周血CD4+CD25+表達(dá)水平明顯低于對照組,Nico(100ug/kg)組(0.61±0.04)、Nico(300ug/kg);組(0.82±0.03)的CD4+CD25+表達(dá)水平高于于SAP組(0.45±0.06,p0.05),具有隨著尼古丁劑量增加而增高趨勢。2、FOXP3、CTLA-4蛋白在這三組大鼠表達(dá)水平的變化趨勢同CD4+CD25+。腹腔注射尼古丁后4h,FOXP3表達(dá)水平,Nico(100ug/kg)組(0.90 ± 0.06)、Nico (300ug/kg)組(1.18±0.07)高于SAP組(0.78±0.03, p0.05); CTLA-4 mRNA水平Nico (100ug/kg)組(0.89±0.03)、Nico (300ug/kg)組(1.18±0.08)高于SAP組(0.70±0.03) , (p0.05) ; Nico (100ug/kg)組F0XP3、CTLA-4蛋白表達(dá)水平與SAP組無差異(p0.05) ; F0XP3、CTLA-4蛋白表達(dá)水平與尼古丁劑量呈濃度依賴性。F0XP3、CTLA-4 mRNA表達(dá)水平均高于SAP組,p0.05。3、相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),尼古丁濃度與CD4+CD25+表達(dá)F0XP3 mRNA水平呈正相關(guān),r=0.962, p0.05% CD4+CD25+表達(dá)F0XP3、CTLA-4蛋白水平隨著F0XP3 mRNA水平增加而增加,r=0.912,p0.05；F0XP3蛋白水平與炎癥介質(zhì)水平負(fù)相關(guān),隨著FOXP3蛋白表達(dá)增加炎癥介質(zhì)TNF-α水平下降,r=-0.844,p0.0.05。在CTLA-4系列表達(dá)水平與F0XP3具有相同的趨勢。結(jié)論：煙堿受體激動劑上調(diào)SAP大鼠外周血T淋巴細(xì)胞CD4+CD25+水平,促進(jìn)CD4+CD25+表達(dá)FOXP3和CTLA-4; F0XP3和CTLA-4的表達(dá)水平增加與促炎因子降低密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：重癥急性胰腺炎(SAP) 迷走神經(jīng) 心率變異性(HRV) 炎癥因子 煙堿 α7nAChR激動劑 器官功能 CD4~+CD25~+ FOXP3 CTLA-4
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R576
【目錄】：

• 縮略詞表6-8
• 摘要8-15
• Abstract15-25
• 前言25-31
• 參考文獻(xiàn)28-31
• 第一部分 SAP大鼠迷走神經(jīng)功能狀態(tài)及其和炎癥反應(yīng)的關(guān)系31-49
• 一、材料和方法31-38
• 二、結(jié)果38-45
• 三、討論45-47
• 四、小結(jié)47
• 參考文獻(xiàn)47-49
• 第二部分 α 7nAChR激動劑尼古丁對SAP大鼠炎癥反應(yīng)、器官功能的影響49-67
• 一、材料和方法49-53
• 二、結(jié)果53-61
• 三、討論61-63
• 四、小結(jié)63
• 參考文獻(xiàn)63-67
• 第三部分 α 7nAChR激動劑對SAP大鼠炎癥反應(yīng)改變機制探討67-82
• 一、材料和方法67-74
• 二、結(jié)果74-78
• 三、討論78-80
• 四、小結(jié)80
• 參考文獻(xiàn)80-82
• 全文總結(jié)82-83
• 綜述83-92
• 參考文獻(xiàn)88-92
• 發(fā)表文章目錄92-93
• 致謝93-94

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本文編號：359378