本文關(guān)鍵詞：miR-224及靶基因CAMKK2協(xié)同影響前列腺癌的發(fā)病進(jìn)程及臨床預(yù)后，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景和目的：前列腺癌在歐美是影響老年男性健康最常見的實(shí)體腫瘤,是男性腫瘤致死的常見原因。前列腺癌是臨床上常見的一種異質(zhì)性、多灶性腫瘤。雖然前列腺癌發(fā)病主要局限于前列腺,但是它具有多種不同行為的類型。其中一些類型呈現(xiàn)惰性行為,但具有不良的臨床預(yù)后。因此,前列腺癌對(duì)公眾健康構(gòu)成挑戰(zhàn)。近年來,隨著前列腺特異性抗原的篩選普及,越來越多進(jìn)展緩慢的前列腺癌被檢測出。即使在診斷及輔助治療取得成績,前列腺癌患者的臨床預(yù)后并沒有顯著改善。越來越多的臨床病理資料用來判斷前列腺癌患者的預(yù)后,比如Gleason評(píng)分、術(shù)前PSA水平及病理分期。但是許多研究表明,患者即使有相似的PSA水平、Gleason評(píng)分及病理分期,它們有不同臨床結(jié)局。這說明前列腺癌的發(fā)生是多階段過程,并具有影響腫瘤進(jìn)展及預(yù)后的不同發(fā)病機(jī)制。因此,有必要尋找新的診斷及治療靶標(biāo),以此來了解前列腺癌的發(fā)病進(jìn)程、提高治療效率及改進(jìn)患者的臨床預(yù)后。許多研究表明,miRNAs在許多腫瘤的發(fā)病進(jìn)程中起著重要作用。miRNAs是一種短片段、非編碼RNAs,通過部分或全部結(jié)合mRNA的3-UTR,導(dǎo)致mRNA降解或抑制轉(zhuǎn)錄,而調(diào)控靶基因的表達(dá)水平。miRNAs及靶基因mRNAs不完全的堿基配對(duì)參與許多重要的細(xì)胞進(jìn)程,如細(xì)胞增殖、分化、凋亡及細(xì)胞周期等。近期研究還證實(shí)miRNAs在許多病理通路起著關(guān)鍵作用,如宿主-病毒間相互作用及腫瘤發(fā)生等過程。從功能上而言,miRNAs可起著致癌基因或抑癌基因作用。同其他腫瘤相似,前列腺癌具有特異的miRNA表達(dá)譜。2011年,我們研究團(tuán)隊(duì)曾經(jīng)對(duì)前列腺癌的miRNAs表達(dá)譜進(jìn)行研究。我們發(fā)現(xiàn)11個(gè)上調(diào)的miRNA及17個(gè)下調(diào)的miRNA.其中我們發(fā)現(xiàn)miR-224在前列腺癌是顯著下調(diào)的,而miR-224在其他腫瘤可調(diào)控細(xì)胞增殖、凋亡,參與腫瘤發(fā)生的進(jìn)程。我們的另一項(xiàng)研究也證實(shí),miR-224的下調(diào)表達(dá)提示前列腺癌患者的不良臨床預(yù)后,并在細(xì)胞學(xué)水平它可通過下調(diào)TRIB1而抑制前列腺癌的發(fā)病進(jìn)程。由于一種miRNA可同時(shí)靶向調(diào)控多種基因,我們認(rèn)為miR-224的潛在調(diào)控機(jī)制尚不清楚。因此,我們采取一系列實(shí)驗(yàn)探索miR-224-靶基因軸是否參與前列腺癌發(fā)生及進(jìn)展的機(jī)制。材料：前列腺癌細(xì)胞DU145從美國ATCC公司購買(Manassas, VA, USA),細(xì)胞在含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基,2mM L-谷氨酸,及抗生素。正常前列腺上皮細(xì)胞(PREC)從Lonza公司購買,培養(yǎng)于含抗生素的PrEGM Bullet kit。所有細(xì)胞均在37攝氏度、5%CO2、濕潤的環(huán)境培養(yǎng)。本研究由廣州醫(yī)科大學(xué)附屬廣州市第一人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),病人均簽署知情同意書。所有組織樣本的處理均符合倫理及法律法規(guī)。miRNA芯片及熒光定量PCR分析,采用4對(duì)和20對(duì)前列腺癌組織及癌旁正常組織,這些組織從廣州醫(yī)科大學(xué)組織樣本庫獲取。TURP或恥骨上前列腺摘除術(shù),樣本切除后,迅速投放于液氮中,用于RNA的提取。術(shù)前患者均未接受放療或化療。術(shù)中均冰凍檢測組織病理類型,術(shù)后石蠟樣本再次證實(shí)組織屬性。Taylor數(shù)據(jù)庫用于生存分析,其包含149例原發(fā)性前列腺癌樣本及29例癌旁良性組織樣本,數(shù)據(jù)庫含miRNAs及mRNAs的資料。方法：2種靶基因預(yù)測軟件miRWalk (最后更新版本2013年3月15日)、miRanda(最后更新版本2010年11月),用來預(yù)測miR-224的靶基因�；蛐酒治鋈缥覀兦笆鑫恼�。數(shù)據(jù)上傳于GEO數(shù)據(jù)儲(chǔ)存庫(http://www.ncbi.nlm.nih.gob/geo/, accession number GSE34932)。miRNAs從20對(duì)前列腺癌及癌旁良性組織提取,所用試劑盒為百泰克miRNA提取試劑盒。miRNA基因表達(dá)水平采用All-in-one miRNA qRT-PCR檢測試劑盒(GeneCopoeia)。 RNU6B作為內(nèi)參基因。PCR擴(kuò)增的特異性采用溶解曲線分析及凝膠電泳確認(rèn)。Ct值分析目標(biāo)miRNA的相對(duì)表達(dá)水平。均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示miRNA的表達(dá)水平。miR-224編碼序列克隆于p MIRNA1腺病毒載體(SBI, USA)以表達(dá)miR-224前體。發(fā)夾p CDH-CMV-MCS-EF1-copGFP作為陰性對(duì)照。P PACKH1質(zhì)粒包裝后miR-224/miR-NC轉(zhuǎn)染293TN細(xì)胞,病毒包裝試劑盒(CatNo:LV500A-1, SBI, USA)。3天后,病毒顆粒按說明書收集,腺病毒沉淀收集試劑盒(CatNo:LV810A, SBI, USA).病毒轉(zhuǎn)染DU145前列腺癌細(xì)胞株(所用試劑盒CatNo:LV85OA-1, SBI,USA)。細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)一定數(shù)量的細(xì)胞,種植于96孔板。Si-CAMKK2及si-NC寡核苷酸購于上海吉瑪公司。CAMKK2編碼序列克隆于p GCMV/EGFP/Neo載體(上海吉瑪)�？蛰d體作為空白對(duì)照。Fugene轉(zhuǎn)染試劑盒(Roche, USA)用來轉(zhuǎn)染siRNA或質(zhì)粒。Westerb blot檢測不同蛋白的表達(dá)變化。細(xì)胞轉(zhuǎn)染48h后,提取蛋白用于Western blot分析。40ug蛋白加入SDS-PAGE孔槽里,轉(zhuǎn)于Hybond nitrecellulose膜(GE Healhcare)。5%脫脂牛奶封閉,anti-CAMKK2(兔抗,ab96531,稀釋倍數(shù)1：150,劍橋,英國)或anti-β-actin (兔抗,sc-7210, Santa Cruz Biotechnology, USA)一抗孵育。SuperSignal West PICO熒光顯像試劑盒(Pierce Biotechnology)檢測蛋白條帶大小。β-actin用來做內(nèi)參對(duì)照。熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)檢測CAMKK2是否為miR-224的靶基因。miR-224可能結(jié)合CAMKK2,其互補(bǔ)序列3-UTR或變異序列,克隆于p GL3熒光素酶報(bào)告載體(Promega, USA)。 DU145前列腺癌細(xì)胞培養(yǎng)于24孔板,共轉(zhuǎn)染熒光質(zhì)粒、10ng miR-224模擬物、NC模擬物及2ng p RL-SV40 RLuci載體(Promega, USA).熒光活力由雙熒光報(bào)告實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)檢測。相對(duì)值由生物熒光檢測儀分析(PerkinElemer, USA)。對(duì)于細(xì)胞活力的檢測,2×103個(gè)細(xì)胞培植于96孔板,培養(yǎng)24、48及72h后,細(xì)胞由20u1的CCK8溶液孵育4小時(shí)(Cat No:C0038, Beyotime, China)。酶標(biāo)儀檢測495nm波長的吸光值。均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示細(xì)胞活力的相對(duì)表達(dá)水平。對(duì)于細(xì)胞周期的檢測,10厘米培養(yǎng)皿的細(xì)胞收集,70%乙醇固定,40攝氏度下過夜。染色前,重新收集細(xì)胞、PBS重新靜置,propidium Iodide(PI)溶液染色細(xì)胞,37攝氏度下孵育15分鐘。流式細(xì)胞儀獲取數(shù)據(jù)(BD FACSVerse TM System, BD Biosciences),軟件分析數(shù)據(jù)(BD FACSuite TM software)。均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示細(xì)胞活力的相對(duì)表達(dá)水平。細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測前列腺癌細(xì)胞的侵襲力。Transwell孔加入50ul的無血清RPMI1640培養(yǎng)基及Matrigel (1:10; BD Bioscience, USA)。 Transwell孔置于24孔培養(yǎng)板(Transwell, Corning, USA),其中含10%胎牛血清培養(yǎng)基。37攝氏度下孵育4小時(shí),固定后,5×104細(xì)胞置于上室。在37攝氏度及5%CO2環(huán)境下孵育48小時(shí),絲裂霉素停止細(xì)胞的有絲分裂,10%福爾馬林固定膜,0.05%Crystal Violet染色。計(jì)數(shù)穿過孔的細(xì)胞。均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示細(xì)胞侵襲的相對(duì)水平。劃痕實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的轉(zhuǎn)移力。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到一定數(shù)量時(shí),pipette tip劃一道痕。含絲裂霉素的培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)48小時(shí)后,新鮮培養(yǎng)基清洗培養(yǎng)皿2次,移除漂浮的細(xì)胞,并拍照。計(jì)數(shù)從細(xì)胞痕爬出的細(xì)胞數(shù)目。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示細(xì)胞侵襲的相對(duì)水平。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理。多組連續(xù)變量數(shù)據(jù)的比較,采用Two-way ANOVA分析各組的表達(dá)差異,兩兩比較采用Bonferroni法,包括熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞周期、細(xì)胞侵襲及細(xì)胞轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)；細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)比較采用析因設(shè)計(jì)的方差分析：前列腺癌組織miR-224及CAMKK2的表達(dá)情況分析,采用Spearman相關(guān)分析�？ǚ綑z驗(yàn)分析它們?cè)谇傲邢侔┙M織中的miR-224/CAMKK2表達(dá)與前列腺癌患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。從年齡、PSA水平、Gleason評(píng)分、臨床分期、病理分級(jí)等相關(guān)方面,采用logistic回歸分析篩選miR-224及CAMKK2協(xié)同表達(dá)的危險(xiǎn)因素。其他兩組均數(shù)的比較采用獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。P0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1. CAMKK2是前列腺癌miR-224的靶基因我們過去研究證實(shí)前列腺癌miR-224起著抑癌作用。為了進(jìn)一步闡明miR-224的調(diào)控機(jī)制,miRNA靶基因預(yù)測軟件(miRWalk及miRanda)用來預(yù)測miR-224的潛在靶基因。兩種軟件均預(yù)測到CAMKK2是miR-224的潛在靶基因。我們?cè)O(shè)計(jì)一系列實(shí)驗(yàn),運(yùn)用hes-miR-224過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染DU145細(xì)胞,miR-224的表達(dá)水平顯著高于陰性對(duì)照組(1.00±0.20 vs.5.11±1.10,t=-6.367,P=0.003)。Western blot結(jié)果表明miR-224過表達(dá)后CAMKK2蛋白的表達(dá)是顯著下調(diào)的(相對(duì)表達(dá)值：0.42±0.09 vs. 0.13±0.05,t=4.879,P=0.008)。我們進(jìn)而運(yùn)用熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)闡明CAMKK2是否為miR-224的靶基因。對(duì)miR-224和CAMKK2的野生型結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行定點(diǎn)突變。miR-224過表達(dá)質(zhì)粒和野生型CAMKK2共轉(zhuǎn)染組的DU145細(xì)胞熒光素酶活性下降約50%(F=13.47,P=0.002),而突變型轉(zhuǎn)染組中熒光素酶活性無明顯變化,統(tǒng)計(jì)分析顯示差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=1.000)。結(jié)果表明,miR-224可互補(bǔ)結(jié)合CAMKK2 mRNA的3-UTR位點(diǎn),即CAMKK2是miR-224的靶基因。2.miR-224通過靶向負(fù)調(diào)控CAMKK2抑制前列腺癌細(xì)胞增殖我們之前的研究發(fā)現(xiàn)miR-224過表達(dá)可抑制前列腺癌DU145細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期、侵襲及轉(zhuǎn)移。我們進(jìn)一步確認(rèn)miR-224是否通過調(diào)控CAMKK2表達(dá)而起著相應(yīng)的細(xì)胞調(diào)控作用。我們將miR-224、CAMKK2載體、si-CAMKK2轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞DU145后,western blot驗(yàn)證CAMKK2的表達(dá)情況。結(jié)果所示,CAMKK2過表達(dá)后能夠逆轉(zhuǎn)miR-224對(duì)CAMKK2蛋白的抑制作用(F=16.88,P=0.001)。首先,我們驗(yàn)證CAMKK2過表達(dá)能夠逆轉(zhuǎn)miR-224對(duì)前列腺癌細(xì)胞增殖抑制的作用。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染不同質(zhì)粒72h, CAMKK2過表達(dá)后使miR-224轉(zhuǎn)染的DU145細(xì)胞生長速度顯著加快(F=158.62,P0.001)。結(jié)果表明,CAMKK2過表達(dá)可消除miR-224對(duì)前列腺癌細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)。細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)的結(jié)果發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染72h后,CAMKK2過表達(dá)顯著逆轉(zhuǎn)了miR-224對(duì)G1期的阻滯,細(xì)胞周期分布接近于對(duì)照細(xì)胞,即CAMKK2通過增加S+G2/M周期而促進(jìn)細(xì)胞增殖(P0.001)。但是,Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)及劃痕轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)表明,CAMKK2不能逆轉(zhuǎn)miR-224對(duì)前列腺癌細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移力的抑制作用(P0.05)。這說明CAMKK2對(duì)細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移無明顯作用。因此,我們結(jié)果表明,miR-224可部分通過靶向調(diào)控CAMKK2而抑制前列腺癌細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期。3.前列腺癌miR-224及CAMKK2表達(dá)顯著負(fù)相關(guān)QRT-PCR檢測20對(duì)原發(fā)性前列腺癌miR-224及CAMKK2的表達(dá)情況。研究表明,miR-224在前列腺癌中下調(diào)表達(dá),CAMKK2是上調(diào)表達(dá)的。那么前列腺癌組織miR-224及CAMKK2是否存在負(fù)相關(guān)關(guān)系呢?我們結(jié)果表明,miR-224下調(diào)表達(dá)同CAMKK2的上調(diào)表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.657,P=0.002)。這結(jié)果同Taylor數(shù)據(jù)庫的結(jié)果一致(r=-0.423,P0.001)。4.miR-224及CAMKK2共表達(dá)同前列腺癌臨床病理特征相關(guān)根據(jù)miR-224及CAMKK2表達(dá)水平的中位數(shù)分組,分為miR-224高-低表達(dá)組及CAMKK2高-低表達(dá)組。在104例患者中,38例(36.54%)miR-224低表達(dá)及CAMKK2高表達(dá)(miR-224 low/CAMKK2 high),14例(13.46%)miR-224高表達(dá)及CAMKK2低表達(dá)(miR-224 high/CAMKK2 high),其他52例(50.0%)患者兩者均高表達(dá)或均低表達(dá)(miR-224 low/CAMKK2-low; miR-224 high/ CAMKK2-high)。我們進(jìn)而研究miR-224及CAMKK2協(xié)同表達(dá)同前列腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果表明(Table 3.6), miR-224低/CAMKK2高表達(dá)(miR-224 low/CAMKK2 high)同前列腺癌進(jìn)展性臨床分期顯著相關(guān)(P=0.028)。miR-224/CAMKK2的表達(dá)量同年齡(P=0.499)、PSA水平(P=0.645)、Gleason評(píng)分(P=0.865)、轉(zhuǎn)移(P=0.652)及生化復(fù)發(fā)(P=0.412)無顯著相關(guān)。這說明,miR-224及CAMKK2協(xié)同表達(dá)同前列腺癌的臨床發(fā)病進(jìn)程是密切相關(guān)的。5.miR-224及CAMKK2共表達(dá)同前列腺癌患者預(yù)后密切相關(guān)運(yùn)用Taylor數(shù)據(jù)庫及Kaplan-Meier方法,我們檢測miR-224及CAMKK2共表達(dá)同前列腺癌的總體生存率的關(guān)系。同miR-224及CAMKK2其它表達(dá)組別相比,miR-224低/CAMKK2高表達(dá)的患者總體生存率是顯著降低的(P=0.028)。多因素回歸分析模型還證實(shí)miR-224低/CAMKK2高表達(dá)、Gleason評(píng)分時(shí)前列腺癌總體生存率的獨(dú)立預(yù)后因素。結(jié)論：1.CAMKK2是前列腺癌miR-224的靶基因。2.miR-224通過靶向負(fù)調(diào)控CAMKK2抑制前列腺癌細(xì)胞周期及增殖。3.miR-224及CAMKK2表達(dá)協(xié)同參與前列腺癌的發(fā)病進(jìn)程。4.miR-224及CAMKK2表達(dá)協(xié)同預(yù)測前列腺癌的臨床預(yù)后。
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 microRNA miR-224 CAMKK2 預(yù)后
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 摘要3-10
• ABSTRACT10-22
• 前言22-49
• 1.1 前列腺癌的發(fā)病現(xiàn)狀22
• 1.2. 前列腺癌“PIN→局限性前列腺癌→轉(zhuǎn)移性前列腺癌”的發(fā)病階段22-24
• 1.3 雄激素非依賴前列腺癌的發(fā)病機(jī)制24-36
• 1.3.1 雄激素受體(AR)與激素非依賴前列腺癌24-29
• 1.3.1.1 AR與雄激素反應(yīng)元件24-25
• 1.3.1.2 AR突變25-26
• 1.3.1.3 AR表達(dá)上調(diào)與雄激素敏感性26
• 1.3.1.4 AR與信號(hào)協(xié)同激活因子/協(xié)同抑制因子26-28
• 1.3.1.5 激活A(yù)R的非經(jīng)典配體28-29
• 1.3.2 細(xì)胞調(diào)節(jié)信號(hào)通路與雄激素非依賴前列腺癌29-32
• 1.3.3 炎癥因子、生長因子與雄激素非依賴前列腺癌32
• 1.3.4 前列腺癌干細(xì)胞32-34
• 1.3.5 前列腺中微環(huán)境的改變34
• 1.3.6 潛伏細(xì)胞34
• 1.3.7 上皮-間質(zhì)的相互作用(EMT)34-35
• 1.3.8 神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞及神經(jīng)纖維細(xì)胞35-36
• 1.4 miRNA與前列腺癌表達(dá)譜研究36-37
• 1.5 miRNA與前列腺癌的生物學(xué)行為37-38
• 1.6 miRNA與AR信號(hào)通路38-41
• 1.6.1 AR在雄激素敏感過渡到抵抗過程中作用38-39
• 1.6.2 AR相關(guān)的miRNA表達(dá)譜研究39
• 1.6.3 miRNA與前列腺癌AR的反饋調(diào)控關(guān)系39-40
• 1.6.4 前列腺癌miRNA-AR信號(hào)通路調(diào)控網(wǎng)絡(luò)40-41
• 1.7 miR-224研究基礎(chǔ)及作用機(jī)制41-43
• 1.8 CAMKK2調(diào)控許多疾病的病理生物學(xué)進(jìn)程43-45
• 1.9 CAMKK2與腫瘤的功能及機(jī)制研究45-46
• 1.10 CAMKK2與前列腺癌AR及AMPK信號(hào)通路46-47
• 1.11 課題設(shè)想47-49
• 材料與方法49-66
• 2.1 材料49-53
• 2.1.1 組織來源及臨床資料49-51
• 2.1.1.1 組織標(biāo)本收集49-50
• 2.1.1.2 病例納入標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)50-51
• 2.1.1.3 臨床病理資料及隨訪51
• 2.1.2 細(xì)胞株51
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)主要試劑51-52
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)主要儀器52-53
• 2.2 方法53-66
• 2.2.1 細(xì)胞及組織miRNA的提取53-54
• 2.2.2 miRNA熒光定量PCR(QRT-PCR)54-59
• 2.2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)54-55
• 2.2.2.2 DNase消化55-56
• 2.2.2.3 反轉(zhuǎn)錄56-57
• 2.2.2.4 SYBR Green Ⅰ染料法實(shí)時(shí)定量熒光PCR(RT-QPCR)57-58
• 2.2.2.5 RT-QPCR產(chǎn)物電泳檢測58
• 2.2.2.6 miR-224基因定量分析58-59
• 2.2.3 miR-224及CAMKK2載體的構(gòu)建及細(xì)胞的篩選59-62
• 2.2.3.1 寡核苷酸的合成59-60
• 2.2.3.2 shDNA模板的退火60-61
• 2.2.3.3 miR-224載體的構(gòu)建61
• 2.2.3.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染61-62
• 2.2.3.5 流式分選62
• 2.2.4 miR-224靶基因軟件預(yù)測62-63
• 2.2.5 熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)63
• 2.2.6 免疫印跡實(shí)驗(yàn)63-64
• 2.2.7 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)64
• 2.2.8 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)64
• 2.2.9 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)64-65
• 2.2.10 細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)65
• 2.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理65-66
• 結(jié)果66-80
• 3.1 CAMKK2是miR-224的靶基因66-68
• 3.2 miR-224通過靶向負(fù)調(diào)控CAMKK2抑制前列腺癌細(xì)胞增殖68-73
• 3.3 前列腺癌miR-224及CAMKK2表達(dá)顯著負(fù)相關(guān)73-75
• 3.4 miR-224及CAMKK2協(xié)同表達(dá)同前列腺癌臨床病理特征相關(guān)75-77
• 3.5 miR-224及CAMKK2協(xié)同表達(dá)同前列腺癌患者預(yù)后密切相關(guān)77-80
• 討論80-87
• 4.1 前列腺癌miR-224的功能及靶向調(diào)控機(jī)制80-81
• 4.2 前列腺癌CAMKK2-AR信號(hào)的交聯(lián)調(diào)控作用81-83
• 4.3 miR-224與前列腺癌CAMKK2-AR信號(hào)通路構(gòu)成調(diào)控網(wǎng)絡(luò)83-85
• 4.5 本文揭示的原理85-87
• 4.5.1 CAMKK2是前列腺癌miR-224的靶基因85
• 4.5.2 miR-224通過靶向負(fù)調(diào)控CAMKK2抑制前列腺癌細(xì)胞周期及增殖85
• 4.5.3 miR-224及CAMKK2表達(dá)協(xié)同參與前列腺癌的發(fā)病進(jìn)程85-86
• 4.5.4 miR-224及CAMKK2共表達(dá)可預(yù)測前列腺癌的臨床預(yù)后86
• 4.5.5 miR-224可能通過調(diào)控CAMKK2-AR通路抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖及周期86-87
• 結(jié)論87-88
• 本研究的不足之處88-89
• 參考文獻(xiàn)89-115
• 縮略詞表115-117
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文117-118
• 致謝118-120

  本文關(guān)鍵詞：miR-224及靶基因CAMKK2協(xié)同影響前列腺癌的發(fā)病進(jìn)程及臨床預(yù)后，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：357411