第一部分肝缺血再灌注體內(nèi)外模型中OTUD4表達(dá)水平隨時(shí)間變化情況目的:探索OTUD4在肝臟缺血再灌注體內(nèi)外模型中表達(dá)的時(shí)間規(guī)律,同時(shí)檢測NF-κB激活過程中TRAF6的K63泛素化水平。方法:1.小鼠肝缺血再灌注（Ischemia and reperfusion,IR）模型的構(gòu)建。小鼠隨機(jī)分為四組:假手術(shù)組（sham）、I1R3、I1R6、I1R9（“I”代表缺血時(shí)長,“R”代表再灌注時(shí)長）。2.ELISA檢測不同再灌注時(shí)間小鼠血清IL-1β的表達(dá)水平。3.細(xì)胞缺氧復(fù)氧（Hypoxia reoxygenation,HR）模型的構(gòu)建。隨機(jī)分為六組:對照組（Control）、H9R1、H9R2、H9R3、H9R6、H9R9（“H”代表缺氧時(shí)長,“R”代表復(fù)氧時(shí)長）。4.Western-blot檢測IR模型和HR模型中OTUD4及相關(guān)蛋白各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)水平。5.免疫沉淀與免疫印跡檢測TRAF6泛素化。結(jié)果:1.成功建立了小鼠IR模型,缺血前肝臟呈粉紅色,在無創(chuàng)血管夾阻斷70%血供后肝臟呈灰白色。2.Western-blot結(jié)果顯示:與Sham組相比,IR模型中OTUD4表達(dá)的水平下調(diào),且隨著... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

小鼠IR模型的建立A:肝臟缺血前B：夾閉肝十二指腸韌帶Figure1-1EstablishmentofHIRImodelinmice

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文40圖1-1小鼠IR模型的建立A:肝臟缺血前B：夾閉肝十二指腸韌帶Figure1-1EstablishmentofHIRImodelinmiceA:BeforehepaticischemiaB:Thehepatoduodenalligamentwasclipped2.2不同再灌注時(shí)間點(diǎn)小鼠血清中IL-1β表達(dá)水平小鼠隨機(jī)分為四組：sham、I1R3、I1R6、I1R9。ELISA檢測小鼠血清中IL-1β表達(dá)的水平。結(jié)果提示，與Sham組相比，IR模型中IL-1β表達(dá)的水平上調(diào)，且隨著再灌注時(shí)間延長而逐漸增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），如圖1-2所示。圖1-2小鼠血清中IL-1β表達(dá)的水平(*p<0.05表示與sham組相比)Figure1-2SerumlevelofIL-1βinmice(n=6pergroup,*p<0.05versussham)

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文412.3不同再灌注時(shí)間點(diǎn)小鼠肝組織中OTUD4蛋白表達(dá)水平用western-blot檢測各組小鼠肝臟組織OTUD4蛋白表達(dá)的水平。結(jié)果提示，與Sham組相比，IR模型中OTUD4表達(dá)的水平下調(diào)，且隨著再灌注時(shí)間延長而逐漸降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），如圖1-3所示。圖1-3小鼠肝臟組織中OTUD4蛋白表達(dá)水平(*p<0.05表示與sham組相比)Figure1-3TheproteinlevelofOTUD4inlivertissueofmice(n=6pergroup,*p<0.05versussham)2.4不同復(fù)氧時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞中OTUD4及NF-κB相關(guān)蛋白表達(dá)水平用western-blot檢測各組細(xì)胞中OTUD4及NF-κB相關(guān)蛋白表達(dá)的水平。結(jié)果提示，與對照組相比，細(xì)胞HR模型中p-NF-κBp65蛋白表達(dá)水平上調(diào)，且隨著復(fù)氧時(shí)間延長而逐漸增加；而OTUD4和IκB-α蛋白表達(dá)水平下調(diào)，且隨著復(fù)氧時(shí)間延長而逐漸降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），如圖1-4所示。圖1-4細(xì)胞中OTUD4、p-NF-κBp65、NF-κBp65、IκB-α蛋白表達(dá)水平(*p<0.05表示與對照組比較)Figure1-4TheproteinlevelsofOTUD4、p-NF-κBp65、NF-κBp65、IκB-αincells(*p<0.05versuscontrol)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3573510