OTUD4過表達(dá)對肝缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制探討
發(fā)布時(shí)間:2022-01-07 01:11
第一部分肝缺血再灌注體內(nèi)外模型中OTUD4表達(dá)水平隨時(shí)間變化情況目的:探索OTUD4在肝臟缺血再灌注體內(nèi)外模型中表達(dá)的時(shí)間規(guī)律,同時(shí)檢測NF-κB激活過程中TRAF6的K63泛素化水平。方法:1.小鼠肝缺血再灌注(Ischemia and reperfusion,IR)模型的構(gòu)建。小鼠隨機(jī)分為四組:假手術(shù)組(sham)、I1R3、I1R6、I1R9(“I”代表缺血時(shí)長,“R”代表再灌注時(shí)長)。2.ELISA檢測不同再灌注時(shí)間小鼠血清IL-1β的表達(dá)水平。3.細(xì)胞缺氧復(fù)氧(Hypoxia reoxygenation,HR)模型的構(gòu)建。隨機(jī)分為六組:對照組(Control)、H9R1、H9R2、H9R3、H9R6、H9R9(“H”代表缺氧時(shí)長,“R”代表復(fù)氧時(shí)長)。4.Western-blot檢測IR模型和HR模型中OTUD4及相關(guān)蛋白各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)水平。5.免疫沉淀與免疫印跡檢測TRAF6泛素化。結(jié)果:1.成功建立了小鼠IR模型,缺血前肝臟呈粉紅色,在無創(chuàng)血管夾阻斷70%血供后肝臟呈灰白色。2.Western-blot結(jié)果顯示:與Sham組相比,IR模型中OTUD4表達(dá)的水平下調(diào),且隨著...
【文章來源】:重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市
【文章頁數(shù)】:92 頁
【學(xué)位級別】:博士
【部分圖文】:
小鼠IR模型的建立A:肝臟缺血前B:夾閉肝十二指腸韌帶Figure1-1EstablishmentofHIRImodelinmice
重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文40圖1-1小鼠IR模型的建立A:肝臟缺血前B:夾閉肝十二指腸韌帶Figure1-1EstablishmentofHIRImodelinmiceA:BeforehepaticischemiaB:Thehepatoduodenalligamentwasclipped2.2不同再灌注時(shí)間點(diǎn)小鼠血清中IL-1β表達(dá)水平小鼠隨機(jī)分為四組:sham、I1R3、I1R6、I1R9。ELISA檢測小鼠血清中IL-1β表達(dá)的水平。結(jié)果提示,與Sham組相比,IR模型中IL-1β表達(dá)的水平上調(diào),且隨著再灌注時(shí)間延長而逐漸增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),如圖1-2所示。圖1-2小鼠血清中IL-1β表達(dá)的水平(*p<0.05表示與sham組相比)Figure1-2SerumlevelofIL-1βinmice(n=6pergroup,*p<0.05versussham)
重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文412.3不同再灌注時(shí)間點(diǎn)小鼠肝組織中OTUD4蛋白表達(dá)水平用western-blot檢測各組小鼠肝臟組織OTUD4蛋白表達(dá)的水平。結(jié)果提示,與Sham組相比,IR模型中OTUD4表達(dá)的水平下調(diào),且隨著再灌注時(shí)間延長而逐漸降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),如圖1-3所示。圖1-3小鼠肝臟組織中OTUD4蛋白表達(dá)水平(*p<0.05表示與sham組相比)Figure1-3TheproteinlevelofOTUD4inlivertissueofmice(n=6pergroup,*p<0.05versussham)2.4不同復(fù)氧時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞中OTUD4及NF-κB相關(guān)蛋白表達(dá)水平用western-blot檢測各組細(xì)胞中OTUD4及NF-κB相關(guān)蛋白表達(dá)的水平。結(jié)果提示,與對照組相比,細(xì)胞HR模型中p-NF-κBp65蛋白表達(dá)水平上調(diào),且隨著復(fù)氧時(shí)間延長而逐漸增加;而OTUD4和IκB-α蛋白表達(dá)水平下調(diào),且隨著復(fù)氧時(shí)間延長而逐漸降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),如圖1-4所示。圖1-4細(xì)胞中OTUD4、p-NF-κBp65、NF-κBp65、IκB-α蛋白表達(dá)水平(*p<0.05表示與對照組比較)Figure1-4TheproteinlevelsofOTUD4、p-NF-κBp65、NF-κBp65、IκB-αincells(*p<0.05versuscontrol)
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]泛素化修飾調(diào)控固有免疫信號通路的研究進(jìn)展[J]. 王強(qiáng),崔曄,李森林,王琛. 生命的化學(xué). 2015(02)
[2]MiR-146a通過抑制TRAF6減輕自身免疫性心肌炎大鼠心臟炎癥并改善其心功能[J]. 趙思嘉,許蔚起,劉娜,王麗君,吳岳,周娟,袁祖貽. 中國分子心臟病學(xué)雜志. 2015(01)
[3]Mechanisms of hepatic ischemia-reperfusion injury and protective effects of nitric oxide[J]. Lian-Yue Guan,Pei-Yao Fu,Pei-Dong Li,Zhuo-Nan Li,Hong-Yu Liu,Min-Gang Xin,Wei Li. World Journal of Gastrointestinal Surgery. 2014(07)
[4]類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜TRAF6表達(dá)與血清骨代謝標(biāo)志物的相關(guān)性[J]. 朱浪靜,歐陽霞,鄭東輝,馬劍達(dá),陳樂鋒,韋秀寧,莫穎倩,戴冽. 中華醫(yī)學(xué)雜志. 2014 (21)
[5]TRAF-mediated regulation of immune and inflammatory responses[J]. WANG YaYa1,ZHANG Peng2,LIU YingFang2 & CHENG GenHong1 1 Department of Microbiology,Immunology & Molecular Genetics,University of California Los Angeles,609 Charles E.Young Drive East,Los Angeles,California 90095,USA;2 National Laboratory of Biomacromolecules,Institute of Biophysics,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100101,China. Science China(Life Sciences). 2010(02)
[6]Histological and biochemical alterations in early-stage lobar ischemia-reperfusion in rat liver[J]. Hossein Ali Arab,Farhang Sasani,Mohammad Hossein Rafiee,Ahmad Fatemi,Abbas Javaheri. World Journal of Gastroenterology. 2009(16)
[7]脂多糖介導(dǎo)的人牙周膜成纖維細(xì)胞損傷過程中TRAF-6蛋白表達(dá)的研究[J]. 徐利東,李衛(wèi)星,李霞,任娟,程玨,郝鳳翔. 中國藥物與臨床. 2008(03)
本文編號:3573510
【文章來源】:重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市
【文章頁數(shù)】:92 頁
【學(xué)位級別】:博士
【部分圖文】:
小鼠IR模型的建立A:肝臟缺血前B:夾閉肝十二指腸韌帶Figure1-1EstablishmentofHIRImodelinmice
重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文40圖1-1小鼠IR模型的建立A:肝臟缺血前B:夾閉肝十二指腸韌帶Figure1-1EstablishmentofHIRImodelinmiceA:BeforehepaticischemiaB:Thehepatoduodenalligamentwasclipped2.2不同再灌注時(shí)間點(diǎn)小鼠血清中IL-1β表達(dá)水平小鼠隨機(jī)分為四組:sham、I1R3、I1R6、I1R9。ELISA檢測小鼠血清中IL-1β表達(dá)的水平。結(jié)果提示,與Sham組相比,IR模型中IL-1β表達(dá)的水平上調(diào),且隨著再灌注時(shí)間延長而逐漸增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),如圖1-2所示。圖1-2小鼠血清中IL-1β表達(dá)的水平(*p<0.05表示與sham組相比)Figure1-2SerumlevelofIL-1βinmice(n=6pergroup,*p<0.05versussham)
重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文412.3不同再灌注時(shí)間點(diǎn)小鼠肝組織中OTUD4蛋白表達(dá)水平用western-blot檢測各組小鼠肝臟組織OTUD4蛋白表達(dá)的水平。結(jié)果提示,與Sham組相比,IR模型中OTUD4表達(dá)的水平下調(diào),且隨著再灌注時(shí)間延長而逐漸降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),如圖1-3所示。圖1-3小鼠肝臟組織中OTUD4蛋白表達(dá)水平(*p<0.05表示與sham組相比)Figure1-3TheproteinlevelofOTUD4inlivertissueofmice(n=6pergroup,*p<0.05versussham)2.4不同復(fù)氧時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞中OTUD4及NF-κB相關(guān)蛋白表達(dá)水平用western-blot檢測各組細(xì)胞中OTUD4及NF-κB相關(guān)蛋白表達(dá)的水平。結(jié)果提示,與對照組相比,細(xì)胞HR模型中p-NF-κBp65蛋白表達(dá)水平上調(diào),且隨著復(fù)氧時(shí)間延長而逐漸增加;而OTUD4和IκB-α蛋白表達(dá)水平下調(diào),且隨著復(fù)氧時(shí)間延長而逐漸降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),如圖1-4所示。圖1-4細(xì)胞中OTUD4、p-NF-κBp65、NF-κBp65、IκB-α蛋白表達(dá)水平(*p<0.05表示與對照組比較)Figure1-4TheproteinlevelsofOTUD4、p-NF-κBp65、NF-κBp65、IκB-αincells(*p<0.05versuscontrol)
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]泛素化修飾調(diào)控固有免疫信號通路的研究進(jìn)展[J]. 王強(qiáng),崔曄,李森林,王琛. 生命的化學(xué). 2015(02)
[2]MiR-146a通過抑制TRAF6減輕自身免疫性心肌炎大鼠心臟炎癥并改善其心功能[J]. 趙思嘉,許蔚起,劉娜,王麗君,吳岳,周娟,袁祖貽. 中國分子心臟病學(xué)雜志. 2015(01)
[3]Mechanisms of hepatic ischemia-reperfusion injury and protective effects of nitric oxide[J]. Lian-Yue Guan,Pei-Yao Fu,Pei-Dong Li,Zhuo-Nan Li,Hong-Yu Liu,Min-Gang Xin,Wei Li. World Journal of Gastrointestinal Surgery. 2014(07)
[4]類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜TRAF6表達(dá)與血清骨代謝標(biāo)志物的相關(guān)性[J]. 朱浪靜,歐陽霞,鄭東輝,馬劍達(dá),陳樂鋒,韋秀寧,莫穎倩,戴冽. 中華醫(yī)學(xué)雜志. 2014 (21)
[5]TRAF-mediated regulation of immune and inflammatory responses[J]. WANG YaYa1,ZHANG Peng2,LIU YingFang2 & CHENG GenHong1 1 Department of Microbiology,Immunology & Molecular Genetics,University of California Los Angeles,609 Charles E.Young Drive East,Los Angeles,California 90095,USA;2 National Laboratory of Biomacromolecules,Institute of Biophysics,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100101,China. Science China(Life Sciences). 2010(02)
[6]Histological and biochemical alterations in early-stage lobar ischemia-reperfusion in rat liver[J]. Hossein Ali Arab,Farhang Sasani,Mohammad Hossein Rafiee,Ahmad Fatemi,Abbas Javaheri. World Journal of Gastroenterology. 2009(16)
[7]脂多糖介導(dǎo)的人牙周膜成纖維細(xì)胞損傷過程中TRAF-6蛋白表達(dá)的研究[J]. 徐利東,李衛(wèi)星,李霞,任娟,程玨,郝鳳翔. 中國藥物與臨床. 2008(03)
本文編號:3573510
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