發(fā)布時(shí)間：2022-01-05 00:29

　　奧沙利鉑（Oxaliplatin,OXA）耐藥是肝癌治療中的巨大障礙,上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT）已被證實(shí)與奧沙利鉑耐藥密切相關(guān)。RNA結(jié)合基序蛋白8A（RNA binding motif protein 8a,RBM8A）是外顯子連接復(fù)合物的核心組件,同時(shí)也是無義介導(dǎo)的m RNA衰變中所必需的蛋白之一,與RNA定位、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)運(yùn)、翻譯和降解等有關(guān),同時(shí)還與細(xì)胞周期調(diào)控和細(xì)胞凋亡調(diào)控密切相關(guān),現(xiàn)有研究證實(shí)RBM8A廣泛參與腫瘤發(fā)展。我們前期研究發(fā)現(xiàn):RBM8A在肝癌組織中高表達(dá),與患者不良預(yù)后相關(guān);RBM8A高表達(dá)可誘導(dǎo)體外細(xì)胞株的EMT,抑制肝細(xì)胞癌凋亡,促進(jìn)其增殖、遷移和侵襲能力。但RBM8A能否通過所誘導(dǎo)的EMT參與奧沙利鉑耐藥尚不清楚。如果有兩者有關(guān)系,其具體的分子機(jī)制如何?目前尚無相關(guān)研究報(bào)道。為進(jìn)一步了解RBM8A在肝癌OXA耐藥中發(fā)揮的作用,并闡明RBM8A在肝癌耐藥網(wǎng)絡(luò)中的分子機(jī)制,進(jìn)而探索出逆轉(zhuǎn)肝癌耐藥的潛在藥物靶點(diǎn),本研究應(yīng)用RBM8A低表達(dá)及過表達(dá)的肝細(xì)胞癌OXA耐藥模型和裸鼠皮下耐藥移植瘤模型,檢測(cè)... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：166 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

過表達(dá)慢病毒載體Figure1-1Overexpressedlentivirusvector2)雙酶切載體：把含有載體質(zhì)粒的菌液培養(yǎng)過夜，并且取新鮮菌液

導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化調(diào)控肝細(xì)胞癌對(duì) 奧沙利鉑耐藥的分子機(jī)制研究 2016 級(jí)博加入 2ug/ml 嘌呤霉素篩選，持續(xù)篩選 2 周；Day-21，收和蛋白印跡法檢測(cè) RBM8A的過表達(dá)情況。與包裝 Human RBM8A-shRNA 慢病毒載體料、試劑及儀器-7404 細(xì)胞系及慢病毒載體 PHY-LV 均購自上海漢尹生PHY-LV-KD5.1慢病毒載體信息見圖 2。

-3 采用逐步遞增 OXA 濃度間歇作用體外誘導(dǎo)法建立 OXA 耐藥體外肝細(xì)胞癌模型ure 1-3 The concentration-elevation and intermittent induction treatment with oxaliplatin selectstance-HCC cells.用于從親本肝細(xì)胞癌株 (PCL)誘導(dǎo)獲得 OXA 耐藥肝細(xì)胞癌株 (DR)的詳細(xì)方案示意圖，OX步升高間歇誘導(dǎo)作用，每次劑量維持 15 天，6 個(gè)月后成功構(gòu)建 OXA 耐藥體外肝細(xì)胞癌株相差顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)親本株 BEL-7404、MHCC-97H 細(xì)胞呈上皮樣細(xì)胞生長(zhǎng)，表現(xiàn)為均一細(xì)胞株 BEL-7404/OXA、MHCC-97H/OXA 呈間質(zhì)樣表型，細(xì)胞變?yōu)殚L(zhǎng)條形、梭形、多角則形態(tài)(Scale bar = 20 μm, 20× magnification) 。 構(gòu)建 RBM8A 過表達(dá)和沉默的親本/耐藥肝細(xì)胞癌株模型，RBM8藥肝細(xì)胞癌較親本肝細(xì)胞癌中表達(dá)顯著升高。含 有 RBM8A 干 擾 序 列 的 慢 病 毒 載 體 感 染 BEL-7404 、 B04/OXA，含有 RBM8A 序列的慢病毒載體感染 MHCC-97H、MHH/OXA，篩選后分別獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株：BEL-7404-RBM8A-KD、B

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]奧沙利鉑在消化系統(tǒng)腫瘤中的耐藥機(jī)制研究[J]. 牟雪瑤,湯志明,柳丹,白磊,牛成群,李珊.  重慶醫(yī)學(xué). 2019(05)
[2]中國肝癌一級(jí)預(yù)防專家共識(shí)（2018）[J]. 陳萬青,崔富強(qiáng),樊春筍,李霓,曲春楓,舒為群,王宇婷,殷建華,鄒懷賓.  中國腫瘤. 2018(09)
[3]microRNA與肝癌[J]. 張春艷,張富春,馬紀(jì),王瑩,徐存拴.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2016(10)
[4]腫瘤生物治療進(jìn)展[J]. 魏繼武.  醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào). 2016(09)
[5]長(zhǎng)鏈非編碼RNA在肝癌中的研究進(jìn)展[J]. 何運(yùn),陳攀,羅嘉,吳飛躍.  中國普通外科雜志. 2016(07)
[6]轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β信號(hào)通路在肝癌患者中的作用機(jī)制[J]. 鄭濤,楊甲梅.  中華肝膽外科雜志. 2016 (06)
[7]lncRNA與miRNA相互作用對(duì)疾病的影響[J]. 易紅,張政.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2016(02)
[8]中國肝癌發(fā)病狀況與趨勢(shì)分析[J]. 左婷婷,鄭榮壽,曾紅梅,張思維,陳萬青.  中華腫瘤雜志. 2015 (09)
[9]Advanced hepatocellular carcinoma and sorafenib: Diagnosis, indications, clinical and radiological follow-up[J]. Stefano Colagrande,Francesco Regini,Gian Giacomo Taliani,Cosimo Nardi,Andrea Lorenzo Inghilesi.  World Journal of Hepatology. 2015(08)



本文編號(hào)：3569357