目的:培養(yǎng)的口腔黏膜上皮細胞因其可以用作眼表重建植片,而廣泛應用于角膜緣干細胞缺乏癥（Limbal stem cell deficiency,LSCD）的治療。作為角膜緣微環(huán)境的重要組成部分,角膜緣微環(huán)境細胞（Limbal niche cells,LNCs）在成體干細胞分化的方向上起著關鍵作用。在本研究中,本課題組研究了LNCs在體外誘導大鼠口腔黏膜上皮細胞（OMECs）向角膜上皮樣細胞的轉分化的能力。方法:分別采用中性蛋白酶II和膠原酶A從大鼠體內分離了OMECs和LNCs,建立了由它們組成的三維或Transwell共培養(yǎng)體系。3T3和更新的LNCs也被用作Transwell系統(tǒng)的滋養(yǎng)層細胞,以比較它們支持OMECs的能力。采用氣液交換法培養(yǎng),獲得復層上皮片。采用逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）、蛋白質印跡（Western blot）、H-E染色和免疫熒光等方法對共培養(yǎng)的上皮片進行了表型檢測。結果:在大多數共培養(yǎng)體系中,共培養(yǎng)的OMECs表現出角膜上皮樣的鋪路石形態(tài),并表達角膜上皮特異性標記物CK12和Pax6。此外,本研究發(fā)現,與其他組相比,通過更新Transwell中的LNCs... 

【文章來源】：華中科技大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

口腔黏膜上皮和角膜緣微環(huán)境細胞的分離和共培養(yǎng)

華中科技大學博士學位論文31圖2：口腔黏膜、角膜中央和邊緣的免疫熒光。大鼠口腔黏膜、角膜中央和角膜緣的CK3、CK12、Pax6或ΔNP63α（紅色熒光）為單染，或ΔNp63α（綠色熒光）和Vim（紅色熒光）為雙染。核被dapi染色。比例尺=100μm。

華中科技大學博士學位論文32圖3:角膜緣微環(huán)境細胞的分子表型特征。（A）對P0代LNC進行Vim（紅色熒光）、CK12（綠色熒光）、ΔNP63α（綠色熒光）和Pax6（綠色熒光）雙重染色。（B）對P3代ME-LNCs和DF-LNCs進行Vim（紅色熒光）和CK12（綠色熒光）、ΔNP63α（綠色熒光）或Pax6（綠色熒光）雙重染色。此外，對N-cadherin、Oct4或Sox2（比例尺=100μm）進行了染色。（C）在P3代DF-LNC和ME-LNC中表達的Oct4和Sox2的相對mRNA水平（**p<0.01）。（D）用Westernblot分析P3DF-LNC和ME-LNC中oct4和sox2的表達；用GAPDH作為內參。


本文編號：3566346