本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-155對動脈粥樣硬化炎癥的調(diào)控作用及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景及目的:急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome ACS)是以冠狀動脈粥樣硬化斑塊破裂或糜爛,繼發(fā)完全或不完全閉塞性血栓形成為病理基礎(chǔ)的一組臨床綜合征。ASC是冠心病的一種嚴重類型,致死率較高,其風(fēng)險主要來自于不穩(wěn)定斑塊,病理上稱為易損斑塊。易損斑塊的特征為較薄的纖維帽、大量脂質(zhì)構(gòu)成的核心,以及斑塊肩部累積的豐富的巨噬-泡沫細胞炎癥因子。臨床和病理學(xué)研究都表明,持續(xù)的慢性炎癥對血管的刺激在動脈粥樣硬化中的扮演著關(guān)鍵性的角色。單核細胞遷移進入血管內(nèi)皮轉(zhuǎn)化為巨噬細胞后,吞噬斑塊中累積的脂質(zhì)形成泡沫細胞,分泌大量的炎癥因子并在斑塊內(nèi)堆積,是促進斑塊發(fā)生發(fā)展的重要因素。目前認為減少單核細胞募集和炎癥是延緩動脈粥樣硬化的進展、穩(wěn)定動脈粥樣硬化易損斑塊的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。因此,炎癥反應(yīng)的免疫調(diào)節(jié)分子在動脈粥樣硬化中發(fā)揮著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。研究發(fā)現(xiàn),小分子RNA(Micro RNAs,mi RNAs)能對免疫及炎癥反應(yīng)起到顯著的調(diào)節(jié)作用,該作用主要是通過導(dǎo)致其靶標(biāo)分子m RNA的降解或翻譯的抑制,調(diào)節(jié)靶標(biāo)分子轉(zhuǎn)錄后水平的基因表達。有研究顯示動脈粥樣硬化時mi R-155的水平明顯增高,并可通過不同的靶標(biāo)分子對動脈粥樣硬化發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。同時,micro RNA-155(mi R-155)也是一個與炎癥有關(guān)的mi RNAs,能夠通過作用于不同的靶標(biāo)分子調(diào)控巨噬細胞炎癥反應(yīng)。但mi R-155對動脈粥樣硬化炎癥和斑塊穩(wěn)定性的影響及機制仍不明確,有待進一步研究。為此,本課題計劃首先篩選與動脈粥樣硬化炎癥相關(guān)的mi R-155的靶標(biāo)分子并通過實驗驗證,然后觀察mi R-155及其靶標(biāo)分子對ox LDL刺激的巨噬細胞炎癥的影響,最后采用antagomir對動脈粥樣硬化小鼠mi R-155的表達進行干預(yù),觀察mi R-155表達抑制是否有利于改善動脈粥樣硬化炎癥及斑塊穩(wěn)定性,為動脈粥樣硬化治療的研究提供基礎(chǔ)。方法:1.生物信息學(xué)分析并鑒定THP-1細胞中mi R-155的靶標(biāo)分子(1)利用靶標(biāo)分析軟件Target Scan、Miranda預(yù)測,結(jié)合文獻查閱,篩選出動脈粥樣硬化炎癥相關(guān)的mi R-155靶基因;(2)構(gòu)建作用靶點雙螢光素酶報告載體,與mi R-155 mimic(過表達mi R-155)或inhibitor(抑制mi R-155表達)共轉(zhuǎn)染至PMA誘導(dǎo)的THP-1細胞中,觀察mi R-155是不是能夠與靶基因3′-UTR區(qū)中預(yù)測的位點結(jié)合;(3)實時熒光定量PCR(RT-PCR)和Western blot(WB)檢測mi R-155對靶標(biāo)分子m RNA和蛋白表達的影響。2.mi R-155及si RNA干擾靶標(biāo)分子對ox LDL刺激的THP-1巨噬細胞炎癥的影響:(1)PMA誘導(dǎo)24h,ox LDL(50μg/ml)刺激THP-1巨噬細胞24h,mi R-155 mimic、inhibitor及mi R-155靶標(biāo)分子si RNA分別轉(zhuǎn)染24h后收樣;(2)實時定量PCR法、ELISA法檢測炎癥因子TNF-α、IL-1β、趨化因子CCL2、CCL4和CCL7的表達變化情況;(3)Western blot檢測STAT3和IκBα的磷酸化水平,ELISA法檢測NF-κB活化水平。3.干擾動脈粥樣硬化模型小鼠體內(nèi)mi R-155水平對其炎癥及斑塊進展的影響:(1)通過antagomir-155的使用,建立mi R-155表達抑制的動脈粥樣硬化小鼠模型:Apo E-/-小鼠(6周齡)高脂喂養(yǎng)12周,將模型小鼠按照mi R-155對照組和mi R-155抑制組分組,每組16只,分別尾靜脈注射生理鹽水配制的antagomir control和antagomir-155,連續(xù)注射3天,繼續(xù)喂養(yǎng)3周后處死,收集外周血、骨髓單核細胞(bone marrow mononuclear cells,BMMCs)和胸腹主動脈組織以檢測各項指標(biāo)。(2)取主動脈行石蠟切片,HE染色檢測主動脈斑塊的形態(tài),MASSON染色檢測斑塊內(nèi)膠原的沉積情況,免疫組織化學(xué)法檢測斑塊內(nèi)巨噬細胞(CD68)、平滑肌(SMA)和我們預(yù)測的mi R-155靶標(biāo)分子的表達情況。(3)實時定量PCR法分別檢測mi R-155水平變化情況。(4)實時定量PCR法、ELISA法檢測趨化因子TNF-α、IL-1β、CCL2、CCL4和CCL7的表達變化情況。(5)Western blot檢測STAT3和IκBα的磷酸化水平,ELISA法檢測NF-κB活化水平。4.統(tǒng)計學(xué)分析:實驗所得數(shù)據(jù)資料用均值±標(biāo)準差(mean±SD)的方式表示。數(shù)據(jù)通過SPSS 15.0軟件進行t檢驗(t-student)或單因素方差分析比較(One-way ANOVA),以P0.05為有顯著性差異。結(jié)果:1.利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測到mi R-155的靶基因:細胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子-1(suppressor of cytokine signaling-1,SOCS1)和Sirtuin1(SIRT1);2.通過構(gòu)建含mi R-155作用靶點的雙熒光素酶報告載體和GFP報告載體,證實了mi R-155能與SOCS1、SIRT1 m RNA上預(yù)測的結(jié)合位點結(jié)合;結(jié)果表明,mi R-155能顯著抑制SOCS1、SIRT1 m RNA及蛋白水平的表達(P0.05)。3.mi R-155對ox LDL刺激的THP-1巨噬細胞炎癥的影響:(1)實時定量PCR結(jié)果顯示mi R-155在ox LDL刺激的THP-1巨噬細胞中表達顯著上調(diào)(P0.01)。(2)mi R-155表達抑制時,實時定量PCR及ELISA結(jié)果顯示TNF-α、IL-1β、CCL2、CCL4和CCL7的m RNA及蛋白水平均顯著降低(P0.01),NF-κB轉(zhuǎn)錄活性也明顯降低(P0.05);當(dāng)mi R-155過表達及si RNA干擾SOCS1、SIRT1后,TNF-α、IL-1β、CCL2、CCL4和CCL7的m RNA及蛋白水平顯著升高(P0.01),NF-κB轉(zhuǎn)錄活性也明顯升高(P0.05)。(3)Western Blot結(jié)果顯示mi R-155抑制時,IκBα、STAT3磷酸化水平顯著降低,mi R-155過表達及si RNA干擾SOCS1后,IκBα、STAT3磷酸化水平顯著升高;此外,當(dāng)mi R-155抑制時,p65乙�；浇档�,而mi R-155過表達及si RNA干擾SIRT1后,p65乙�；皆黾印�(4)Transwell實驗結(jié)果顯示mi R-155表達抑制可降低THP-1巨噬細胞的遷移能力,而mi R-155過表達及si RNA干擾SOCS1、SIRT1后,THP-1巨噬細胞的遷移能力有所增加(P0.05)。3.干擾動脈粥樣硬化模型小鼠體內(nèi)mi R-155水平對其炎癥及斑塊進展的影響:(1)尾靜脈注射antagomir-155,實時定量PCR檢測小鼠血清、血管組織及BMMCs中mi R-155的水平均顯著降低(P0.01),成功建立了mi R-155表達抑制的動脈粥樣硬化模型小鼠。(2)antagomir-155抑制mi R-155的水平后,小鼠血清內(nèi)TNF-α、IL-1β、CCL2、CCL4和CCL7的表達水平顯著降低(P0.01),同時可顯著減少斑塊內(nèi)的巨噬細胞、增加膠原含量及平滑肌細胞(P0.05)。(3)antagomir-155作用后,動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)及血管組織中的SOCS1、SIRT1均增加,同時STAT3、IκB磷酸化水平降低,NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性也降低(P0.05)。結(jié)論:1.預(yù)測并驗證了hsa-SOCS1和hsa-SIRT1為hsa-mi R-155的靶標(biāo)分子;此外,mi R-155對SOCS1和SIRT1的抑制作用可能是通過介導(dǎo)它們m RNA的降解。2.mi R-155可促進ox LDL刺激的THP-1巨噬細胞的炎癥反應(yīng),其機制可能包括:mi R-155通過抑制它的靶標(biāo)分子SOCS1和SIRT1,進而促進STAT3和NF-κB信號途徑,使炎癥細胞因子及趨化因子增多,單核巨噬細胞遷移增加。3.通過antagomir-155干預(yù)mi R-155表達,成功建立了mi R-155表達抑制的Apo E-/-小鼠動脈粥樣硬化模型;mi R-155抑制有利于改善Apo E-/-模型小鼠的動脈粥樣硬化炎癥和斑塊穩(wěn)定性,其機制可能是部分通過增加其靶標(biāo)分子SOCS1、SIRT1的表達,進而抑制STAT3和NF-κB途徑的活化。
【關(guān)鍵詞】：microRNA-155 動脈粥樣硬化 炎癥 SOCS1 SIRT1
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R541.4
【目錄】：

• 中英文對照索引4-6
• 英文摘要6-11
• 中文摘要11-15
• 第一章 前言15-17
• 第二章 鑒定THP-1 細胞中炎癥相關(guān)的miR-155的靶標(biāo)分子17-41
• 2.1 材料和方法17-30
• 2.2 結(jié)果30-39
• 2.3 討論39-40
• 2.4 小結(jié)40-41
• 第三章 miR-155對oxLDL刺激的THP-1巨噬細胞炎癥的影響及機制研究41-64
• 3.1 材料和方法41-54
• 3.2 結(jié)果54-60
• 3.3 討論60-63
• 3.4 小結(jié)63-64
• 第四章 miR-155對APOE小鼠動脈粥樣硬化炎癥的影響64-86
• 4.1 材料和方法64-77
• 4.2 結(jié)果77-83
• 4.3 討論83-85
• 4.4 小結(jié)85-86
• 全文總結(jié)86-87
• 參考文獻87-95
• 文獻綜述一 動脈粥樣硬化中的炎癥95-108
• 參考文獻102-108
• 文獻綜述二MicroRNA-155作為炎性疾病的治療靶點108-119
• 參考文獻114-119
• 博士就讀期間發(fā)表論文情況119-120
• 致謝120

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 趙晨燕;張晶;余黨會;陳穎;史敏;劉清華;倪燦榮;朱明華;;胰腺導(dǎo)管腺癌患者血清中microRNA-155的表達及其臨床意義[J];臨床與實驗病理學(xué)雜志;2013年04期

2 張波;田野蘋;;microRNA-155的免疫調(diào)控作用[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2012年01期

3 張海叢;何春年;;MicroRNA-155與腫瘤的關(guān)系[J];醫(yī)學(xué)綜述;2012年18期

4 ;[J];;年期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉永安;臧遠勝;聶蔚;李兵;修清玉;;microRNA-155通過調(diào)控sCTLA-4參與哮喘發(fā)病[A];中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)年會——2013第十四次全國呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 王飛;單純皰疹病毒性角膜炎角膜組織microRNA表達譜變化及microRNA-155對炎癥反應(yīng)調(diào)控作用初探[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 楊洋;MicroRNA-155對動脈粥樣硬化炎癥的調(diào)控作用及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 鄭一誡;糖皮質(zhì)激素下調(diào)microRNA-155發(fā)揮抑炎作用的機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 顧俊怡;褪黑素通過調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤細胞中microRNA-155的表達發(fā)揮抑癌作用的機制研究[D];蘇州大學(xué);2014年

2 盧俊江;糖尿病大鼠腦缺血再灌注后皮質(zhì)區(qū)microRNA-155及VEGF、KDR、CD31的表達及意義[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2014年

3 黃涵年;農(nóng)藥氟蟲腈作用下斑馬魚microRNA-155對cyb561d2的調(diào)控作用研究[D];浙江理工大學(xué);2014年

4 康雪;microRNA-31、microRNA-155在新疆哈薩克族和漢族食管鱗癌患者血漿中的表達[D];石河子大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-155對動脈粥樣硬化炎癥的調(diào)控作用及機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：355819