發(fā)布時(shí)間：2017-05-10 22:10

  本文關(guān)鍵詞：瘦素基因修飾組織工程化復(fù)合物對(duì)骨質(zhì)疏松狀態(tài)下牙周組織再生的作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的用攜帶人瘦素(human leptin,h LEP)基因的腺病毒Ad-h LEP-EGFP感染骨質(zhì)疏松大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞(osteoporotic rat bone marrow stromal cells,O-r BMSCs),并與β-磷酸三鈣(β-tricalcium phosphate,β-TCP)復(fù)合構(gòu)建h LEP修飾的組織工程化復(fù)合物,分別將其移植入裸鼠背部皮下和骨質(zhì)疏松大鼠牙周骨缺損處,探討h LEP基因修飾的組織工程化復(fù)合物的成骨能力及其對(duì)骨質(zhì)疏松狀態(tài)下牙周組織再生的作用。方法1.雙側(cè)卵巢摘除術(shù)構(gòu)建SD大鼠骨質(zhì)疏松模型,通過體型體重比較、骨密度測(cè)定和組織學(xué)形態(tài)學(xué)觀察鑒定模型構(gòu)建成功與否;2.全骨髓貼壁法體外分離培養(yǎng)O-r BMSCs和正常大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞(sham rat bone marrow stromal cells,S-r BMSCs),比較二者增殖活性和成骨分化能力的差異;3.構(gòu)建并鑒定攜帶h LEP基因的腺病毒Ad-h LEP-EGFP,將其感染O-r BMSCs,通過熒光觀察、流式細(xì)胞術(shù)、RT-PCR、western blot、ELISA及免疫細(xì)胞化學(xué)等方法檢測(cè)感染后O-r BMSCs中h LEP的基因和蛋白表達(dá);4.通過形態(tài)學(xué)和熒光表達(dá)觀察、MTT增殖曲線檢測(cè)、堿性磷酸酶(alkaline phosphate,ALP)活性測(cè)定、礦化結(jié)節(jié)染色和定量分析以及成骨相關(guān)基因Runx2(runt-related transcription factor 2)、ALP、Ⅰ型膠原(collagen type?,Col-?)和骨鈣素(osteocalcin,OC)的熒光定量表達(dá)檢測(cè)等方法,探討h LEP基因感染對(duì)O-r BMSCs生物學(xué)行為的影響;5.將h LEP基因修飾后的O-r BMSCs與β-TCP體外復(fù)合培養(yǎng),構(gòu)建h LEP基因修飾的組織工程化復(fù)合物,通過熒光顯微鏡、掃描電鏡觀察細(xì)胞在β-TCP上結(jié)合及生長(zhǎng)增殖情況;6.將構(gòu)建成功的h LEP基因修飾的組織工程復(fù)合物移植入裸鼠皮下,4w和8w后取材制作組織學(xué)切片,HE和Masson染色進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察和測(cè)量,探討h LEP基因修飾的組織工程化復(fù)合物體內(nèi)異位成骨情況;7.于骨質(zhì)疏松大鼠右側(cè)下頜骨制備牙周缺損,以構(gòu)建骨質(zhì)疏松大鼠牙周缺損模型,將h LEP基因修飾的組織工程化復(fù)合物植入牙周組織缺損內(nèi),分別于術(shù)后10d和28d取術(shù)側(cè)下頜骨制作組織切片,行HE染色觀察并分析牙周組織再生情況,評(píng)價(jià)h LEP基因修飾的組織工程化復(fù)合物對(duì)骨質(zhì)疏松狀態(tài)下牙周組織再生的作用。結(jié)果1.成功構(gòu)建SD大鼠骨質(zhì)疏松模型,其體型明顯變胖,體重明顯增加,骨密度減小,松質(zhì)骨變得稀疏;2.成功分離培養(yǎng)了O-r BMSCs和S-r BMSCs,前者較后者增殖活性和成骨分化能力減弱;3.成功構(gòu)建Ad-h LEP-EGFP,且能高效感染O-r BMSCs,72h的感染效率達(dá)84.5%,表達(dá)出較強(qiáng)的綠色熒光,基因和蛋白兩個(gè)層面多方位檢測(cè)均能發(fā)現(xiàn)感染后O-r BMSCs中h LEP的有效表達(dá);4.h LEP基因感染后O-r BMSCs形態(tài)無明顯改變,增殖能力不受影響,ALP活性增強(qiáng),礦化結(jié)節(jié)形成能力提高,Runx2、ALP和Col-?的基因表達(dá)上調(diào);5.成功構(gòu)建h LEP基因修飾的組織工程化復(fù)合物,感染后各組細(xì)胞與β-TCP均能有效結(jié)合并生長(zhǎng)良好;6.h LEP基因修飾的組織工程化復(fù)合物植入裸鼠皮下8w后,Ad-h LEP-EGFP組形成的骨樣結(jié)構(gòu)最多(P㩳0.05);7.h LEP基因修飾的組織工程化復(fù)合物植入大鼠牙周缺損后發(fā)現(xiàn)Ad-h LEP-EGFP組的新生牙槽骨(new alveolar bone,NB)面積最大(P㩳0.05),Ad-EGFP組和OVX組之間NB無差異(P㧐0.05),但都比β-TCP組NB面積大(P㩳0.05);各組之間新生牙周膜(new periodontium,NP)寬度沒有顯著差異(P㧐0.05)。結(jié)論骨質(zhì)疏松狀態(tài)下大鼠BMSCs增殖及分化能力減弱。h LEP基因修飾可顯著提高O-r BMSCs的成骨能力,以h LEP腺病毒載體可介導(dǎo)h LEP基因在O-r BMSCs中有效表達(dá)。h LEP基因修飾的O-r BMSCs為種子細(xì)胞所構(gòu)建的組織工程化復(fù)合物不僅具有體內(nèi)異位成骨的能力,還可實(shí)現(xiàn)骨質(zhì)疏松大鼠牙周組織缺損的再生修復(fù),有望應(yīng)用于牙周組織工程研究與治療。
【關(guān)鍵詞】：瘦素 骨質(zhì)疏松 骨髓基質(zhì)細(xì)胞 腺病毒 牙周組織再生
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R580;R781.4
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-9
• 中文摘要9-11
• 英文摘要11-14
• 前言14-17
• 第一部分 去卵巢大鼠及假手術(shù)大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞的比較研究17-43
• 引言17
• 材料與方法17-27
• 結(jié)果27-37
• 討論37-42
• 小結(jié)42-43
• 第二部分 瘦素基因修飾對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響43-82
• 引言43
• 材料和方法43-65
• 結(jié)果65-77
• 討論77-81
• 小結(jié)81-82
• 第三部分 瘦素基因修飾的組織工程化復(fù)合物成骨能力研究82-103
• 引言82
• 材料和方法82-89
• 結(jié)果89-99
• 討論99-102
• 小結(jié)102-103
• 第四部分 瘦素基因修飾組織工程化復(fù)合物修復(fù)骨質(zhì)疏松大鼠牙周組織缺損的實(shí)驗(yàn)研究103-121
• 引言103
• 材料和方法103-109
• 結(jié)果109-114
• 討論114-119
• 小結(jié)119-121
• 全文總結(jié)121-123
• 參考文獻(xiàn)123-133
• 綜述一 瘦素在骨代謝中作用的研究進(jìn)展133-144
• 參考文獻(xiàn)140-144
• 綜述二 牙周組織工程研究進(jìn)展144-163
• 參考文獻(xiàn)158-163
• 致謝163-164

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李艷芬;趙欣;閆福華;駱凱;郭建斌;江俊;;不同濃度骨髓基質(zhì)細(xì)胞修復(fù)大鼠牙周組織缺損的實(shí)驗(yàn)研究[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年04期

2 林敏魁;黃永玲;鐘泉;江俊;趙欣;閆福華;;比格犬骨髓基質(zhì)細(xì)胞和牙周韌帶成纖維細(xì)胞體外再生組織能力的比較[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2011年04期

3 王綿潔;徐衛(wèi)華;;齦溝液瘦素與牙齒移動(dòng)的相關(guān)性研究[J];貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年06期

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  本文關(guān)鍵詞：瘦素基因修飾組織工程化復(fù)合物對(duì)骨質(zhì)疏松狀態(tài)下牙周組織再生的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：355591