本文關(guān)鍵詞：右旋龍腦促進(jìn)姜黃素類化合物抑制HepG2肝癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：隨著社會(huì)的發(fā)展、人民生活水平的提高和健康意識(shí)的增強(qiáng),加上由于營(yíng)養(yǎng)比例和結(jié)構(gòu)失衡導(dǎo)致的癌癥發(fā)生率逐年上升,人們對(duì)飲食的需求已從量的滿足轉(zhuǎn)向?qū)|(zhì)的重視,希望通過(guò)合理的飲食結(jié)構(gòu)安排,科學(xué)攝入營(yíng)養(yǎng)成分,從而增強(qiáng)身體素質(zhì),預(yù)防和減少癌癥的發(fā)生。膳食植物中的天然活性物質(zhì)由于其具有良好的清除自由基的抗氧化作用產(chǎn)生的抗腫瘤作用效應(yīng),因而,被譽(yù)為人類“第八大營(yíng)養(yǎng)素”。姜黃素類化合物(姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素)是從姜黃等天然植物中提取的一種多酚類化合物,常作為天然色素和調(diào)味品廣泛應(yīng)用于食品工業(yè),研究表明,它具有廣譜的抗腫瘤活性。然而,存在于食品中的姜黃素類化合物被人體吸收后生物利用度較低,難以發(fā)揮應(yīng)有的抗氧化和抗腫瘤等活性功效,極大限制了它們的應(yīng)用范圍及應(yīng)用價(jià)值。簽于此,本文選取了在食品中作為食用香精的右旋龍腦(NB)作為吸收促進(jìn)劑,考察其促進(jìn)姜黃素類化合物抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,明確NB促進(jìn)姜黃素類化合物抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的分子機(jī)制。該研究有望揭示NB促進(jìn)姜黃素類化合物抗腫瘤的分子作用機(jī)制,為姜黃素類化合物與NB等天然營(yíng)養(yǎng)因子的高效、精準(zhǔn)利用提供理論基礎(chǔ),也為癌癥等慢性疾病的飲食預(yù)防干預(yù)提供理論依據(jù)。在研究中,主要選取Hep G2肝癌細(xì)胞作為研究對(duì)象,考察NB促進(jìn)姜黃素類化合物抑制Hep G2肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響并闡明其相關(guān)分子機(jī)制。一、篩選NB和姜黃素類化合物聯(lián)合處理的最佳配比及處理時(shí)間首先,采用MTT方法考察NB和姜黃素類化合物在不同濃度下單獨(dú)作用不同時(shí)間對(duì)Hep G2細(xì)胞存活率的影響。結(jié)果表明,隨著姜黃素(Cur)的濃度和時(shí)間的增加,Hep G2細(xì)胞的存活率呈逐漸下降的趨勢(shì),說(shuō)明,Cur抑制Hep G2細(xì)胞生長(zhǎng)呈濃度和時(shí)間依賴性;而去甲氧基姜黃素(DCur)和雙去甲氧基姜黃素(BDCur)只表現(xiàn)出濃度依賴性。姜黃素類化合物的抗腫瘤效果依次為CurDCurBDCur,表明,隨著甲氧基數(shù)目的減少,姜黃素類化合物抗腫瘤效果降低。在不同濃度下,NB單獨(dú)作用于Hep G2肝癌細(xì)胞均沒(méi)有表現(xiàn)出明顯的抑制作用。然后,選取NB和姜黃素類化合物在不同濃度下進(jìn)行不同組合配比,考察其聯(lián)合處理不同時(shí)間對(duì)Hep G2細(xì)胞存活率的影響。結(jié)果表明,NB能顯著提高姜黃素類化合物的抗腫瘤活性,且當(dāng)20μg/ml NB與20μM Cur、40μM DCur、40μM BDCur分別聯(lián)合作用24 h時(shí)對(duì)細(xì)胞的抑制作用最大。故,選擇在這一濃度下處理24 h進(jìn)行后序的實(shí)驗(yàn)。二、考察姜黃素類化合物進(jìn)入細(xì)胞的途徑及其在細(xì)胞中的作用部位采用熒光分光光度法考察姜黃素類化合物在Hep G2肝癌細(xì)胞內(nèi)的含量,并深入探討姜黃素類化合物進(jìn)入細(xì)胞的途徑,闡明姜黃素類化合物在細(xì)胞內(nèi)的吸收機(jī)制。進(jìn)一步運(yùn)用熒光顯微鏡考察姜黃素類化合物在細(xì)胞中的定位,從而明確其在細(xì)胞中的分布。結(jié)果表明,NB能顯著提高姜黃素類化合物在Hep G2細(xì)胞內(nèi)的含量,從而提高其抗腫瘤活性。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),NB與姜黃素類化合物聯(lián)合作用Hep G2肝癌細(xì)胞后,姜黃素類化合物主要通過(guò)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體運(yùn)輸姜黃素類化合物進(jìn)入細(xì)胞并定位在胞漿內(nèi)激活下游信號(hào)發(fā)揮作用。三、考察NB提高姜黃素類化合物抗腫瘤活性的增效機(jī)理采用Western blot和細(xì)胞膜通透性實(shí)驗(yàn)考察NB提高姜黃素類化合物抗腫瘤活性的增效機(jī)理。結(jié)果表明,NB能夠提高Hep G2細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性,使得更多的姜黃素類化合物進(jìn)入細(xì)胞,而且,NB能夠下調(diào)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCB1、ABCC1和ABCG2的表達(dá)量,減少姜黃素類化合物從細(xì)胞內(nèi)泵出,從而提高姜黃素類化合物在細(xì)胞內(nèi)的含量。以上兩個(gè)原因的共同作用貢獻(xiàn)了NB增效機(jī)理。四、考察NB促進(jìn)姜黃素類化合物抑制Hep G2肝癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制采用流式細(xì)胞術(shù)、Western blot方法、DHE熒光光譜法和蛋白組學(xué)方法系統(tǒng)研究NB促進(jìn)姜黃素類化合物抑制Hep G2肝癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制。結(jié)果表明,相比姜黃素類化合物,NB與姜黃素類化合物聯(lián)合處理Hep G2細(xì)胞后顯著提高了G2/M期的細(xì)胞數(shù)目,表明,NB促進(jìn)姜黃素類化合物誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生G2/M期阻滯。進(jìn)一步的機(jī)理研究表明,NB與姜黃素類化合物聯(lián)合作用顯著減低了細(xì)胞周期蛋白cyclin B1及其激酶cdc2的表達(dá)量及增加了磷酸化的p53、ATM和MDM2蛋白的表達(dá)量,說(shuō)明,NB與姜黃素類化合物聯(lián)合作用啟動(dòng)了p53信號(hào)傳導(dǎo)通路。并且,Akt和ERK1/2磷酸化表達(dá)水平的下調(diào)和JNK與p38MAPK磷酸化表達(dá)水平的上調(diào)在啟動(dòng)p53通路中發(fā)揮了重要的作用。蛋白組學(xué)研究表明,PSMA5、NPM和hn RNPC1/C2蛋白在NB與姜黃素聯(lián)合調(diào)控p53通路中也發(fā)揮了重要的作用。研究還發(fā)現(xiàn),活性氧(ROS)是NB與姜黃素類化合物聯(lián)合誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生G2/M阻滯信號(hào)通路的源頭。因此,NB促進(jìn)姜黃素類化合物抑制Hep G2細(xì)胞增殖是通過(guò)介導(dǎo)ROS過(guò)量產(chǎn)生從而啟動(dòng)p53通路激活下游信號(hào)誘導(dǎo)Hep G2細(xì)胞發(fā)生G2/M期細(xì)胞周期阻滯。
【關(guān)鍵詞】：右旋龍腦 姜黃素類化合物 HepG2肝癌細(xì)胞 活性氧 p53通路
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-16
• 英文縮略詞表16-17
• 第一章 緒論17-44
• 1.1 膳食干預(yù)預(yù)防慢性非傳染性疾病概述17-19
• 1.2 姜黃素類化合物的概述19-28
• 1.2.1 姜黃素類化合物的化學(xué)成分、結(jié)構(gòu)和性質(zhì)19-23
• 1.2.2 姜黃素類化合物的構(gòu)效關(guān)系23-25
• 1.2.3 姜黃素類化合物的抗腫瘤機(jī)理25-27
• 1.2.4 姜黃素類化合物在食品中的應(yīng)用27-28
• 1.2.5 姜黃素類化合物在應(yīng)用中存在的問(wèn)題28
• 1.3 右旋龍腦概述28-31
• 1.3.1 右旋龍腦的簡(jiǎn)介28-29
• 1.3.2 右旋龍腦促進(jìn)藥物跨膜吸收的研究現(xiàn)狀29-30
• 1.3.3 右旋龍腦在抗腫瘤領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀30-31
• 1.4 細(xì)胞凋亡機(jī)制概述31-35
• 1.4.1 線粒體途徑（mitochondria-mediated pathway）31-32
• 1.4.2 死亡受體途徑 (death receptor-mediated pathway)32-34
• 1.4.3 細(xì)胞周期調(diào)控34-35
• 1.5 細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路概述35-38
• 1.5.1 MAPK通路對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)35-36
• 1.5.2 P13K/AKT通路對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)36-37
• 1.5.3 p53 通路對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)37-38
• 1.6 蛋白組學(xué)概述38-41
• 1.6.1 蛋白質(zhì)組學(xué)的研究?jī)?nèi)容38
• 1.6.2 蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法38-41
• 1.7 本課題的研究意義和研究?jī)?nèi)容41-44
• 1.7.1 本課題的研究意義41-43
• 1.7.2 本課題的研究?jī)?nèi)容43-44
• 第二章 右旋龍腦聯(lián)合姜黃素類化合物對(duì)HepG2 細(xì)胞生長(zhǎng)影響初探44-63
• 2.1 引言44-45
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器設(shè)備45-46
• 2.2.1 材料與試劑45
• 2.2.2 儀器與設(shè)備45-46
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法46-50
• 2.3.1 溶液的配制46-48
• 2.3.2 細(xì)胞的培養(yǎng)48-49
• 2.3.3 細(xì)胞處理與形態(tài)觀察49
• 2.3.4 MTT測(cè)定細(xì)胞存活率49-50
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論50-61
• 2.4.1 姜黃素類化合物對(duì)HepG2 和L02 細(xì)胞生長(zhǎng)的影響50-53
• 2.4.2 右旋龍腦對(duì)HepG2 和L02 細(xì)胞生長(zhǎng)的影響53-54
• 2.4.3 右旋龍腦聯(lián)合姜黃素類化合物對(duì)HepG2 和L02 細(xì)胞生長(zhǎng)的影響54-61
• 2.5 本章小結(jié)61-63
• 第三章 右旋龍腦聯(lián)合姜黃素類化合物對(duì)HepG2 細(xì)胞的作用靶點(diǎn)研究63-76
• 3.1 引言63-64
• 3.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器設(shè)備64-65
• 3.2.1 材料與試劑64
• 3.2.2 儀器與設(shè)備64-65
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法65-67
• 3.3.1 溶液的配制65
• 3.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)65
• 3.3.3 細(xì)胞內(nèi)姜黃素類化合物含量的測(cè)定65-66
• 3.3.4 細(xì)胞內(nèi)姜黃素類化合物的定位測(cè)定66-67
• 3.3.5 Tf、FA和RGD封閉實(shí)驗(yàn)67
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論67-75
• 3.4.1 姜黃素類化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線67-68
• 3.4.2 細(xì)胞內(nèi)姜黃素類化合物的含量68-70
• 3.4.3 細(xì)胞內(nèi)姜黃素類化合物的定位70-71
• 3.4.4 姜黃素類化合物進(jìn)入細(xì)胞的途徑71-75
• 3.5 本章小結(jié)75-76
• 第四章 右旋龍腦促進(jìn)姜黃素類化合物在HepG2 細(xì)胞中吸收的機(jī)理研究76-90
• 4.1 引言76-77
• 4.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器設(shè)備77-79
• 4.2.1 材料與試劑77-78
• 4.2.2 儀器與設(shè)備78-79
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法79-83
• 4.3.1 溶液的配制79-80
• 4.3.2 蛋白質(zhì)樣品的準(zhǔn)備80-81
• 4.3.3 Western blot檢測(cè)ABC家族蛋白81-83
• 4.3.4 YO-PRO-1 染色檢測(cè)細(xì)胞膜通透性83
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論83-88
• 4.4.1 右旋龍腦聯(lián)合姜黃素類化合物對(duì)ABCB1 耐藥蛋白的影響83-85
• 4.4.2 右旋龍腦聯(lián)合姜黃素類化合物對(duì)ABCC1 和ABCG2 耐藥蛋白的影響85-86
• 4.4.3 右旋龍腦對(duì)細(xì)胞通透性的影響86-88
• 4.4.4 右旋龍腦促進(jìn)姜黃素類化合物吸收的物理模型88
• 4.5 本章小結(jié)88-90
• 第五章 右旋龍腦聯(lián)合姜黃素類化合物抑制HepG2 細(xì)胞增殖的機(jī)理研究90-108
• 5.1 引言90
• 5.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器設(shè)備90-91
• 5.2.1 材料與試劑90-91
• 5.2.2 儀器與設(shè)備91
• 5.3 實(shí)驗(yàn)方法91-94
• 5.3.1 溶液的配制91
• 5.3.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期91-93
• 5.3.3 蛋白樣品的準(zhǔn)備93
• 5.3.4 Western blot檢測(cè)93
• 5.3.5 ROS檢測(cè)93-94
• 5.3.6 NAC預(yù)處理對(duì)細(xì)胞存活率的影響94
• 5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論94-106
• 5.4.1 右旋龍腦聯(lián)合姜黃素類化合物對(duì)HepG2 細(xì)胞的細(xì)胞周期分布的影響94-96
• 5.4.2 右旋龍腦聯(lián)合姜黃素類化合物對(duì)細(xì)胞周期蛋白cyclin B1 及其激酶cdc2 活性的影響96-99
• 5.4.3 右旋龍腦聯(lián)合姜黃素類化合物對(duì)MAPK通路和Akt通路的影響99-102
• 5.4.4 右旋龍腦聯(lián)合姜黃素類化合物對(duì)ROS產(chǎn)生的影響102-105
• 5.4.5 右旋龍腦與姜黃素類化合物引起細(xì)胞發(fā)生G2/M期阻滯涉及的信號(hào)通路圖105-106
• 5.5 本章小結(jié)106-108
• 第六章 基于蛋白組學(xué)技術(shù)分析右旋龍腦聯(lián)合姜黃素類化合物抑制HepG2 細(xì)胞增殖的分子機(jī)制108-133
• 6.1 引言108
• 6.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器設(shè)備108-110
• 6.2.1 材料與試劑108-110
• 6.2.2 儀器與設(shè)備110
• 6.3 實(shí)驗(yàn)方法110-120
• 6.3.1 流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)110
• 6.3.2 蛋白組學(xué)的方法步驟110-119
• 6.3.3 蛋白樣品的準(zhǔn)備119
• 6.3.4 Western blot檢測(cè)119-120
• 6.3.5 ROS檢測(cè)120
• 6.3.6 NAC預(yù)處理對(duì)細(xì)胞存活率的影響120
• 6.3.7 NAC預(yù)處理對(duì)細(xì)胞周期的影響120
• 6.3.8 NAC預(yù)處理對(duì)p53、p21 和p-histone的影響120
• 6.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論120-131
• 6.4.1 右旋龍腦聯(lián)合姜黃素對(duì)HepG2 細(xì)胞的細(xì)胞周期分布的影響120-121
• 6.4.2 右旋龍腦聯(lián)合姜黃素處理HepG2 細(xì)胞后蛋白組學(xué)分析121-126
• 6.4.3 右旋龍腦聯(lián)合姜黃素對(duì)PSMA5、NPM和nhRNPC1/C2 蛋白的影響126-128
• 6.4.4 右旋龍腦聯(lián)合姜黃素對(duì)cdc2 和cyclin B1 蛋白的影響128-129
• 6.4.5 右旋龍腦聯(lián)合姜黃素對(duì)ROS產(chǎn)生的影響129-131
• 6.4.6 右旋龍腦與姜黃素引起細(xì)胞發(fā)生G2/M期阻滯涉及的信號(hào)通路圖131
• 6.5 本章小結(jié)131-133
• 結(jié)論與展望133-136
• 參考文獻(xiàn)136-158
• 攻讀博士學(xué)位期間取得的研究成果158-160
• 致謝160-162
• 附件162

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 杜杭根;李宏宇;田勇;;冰片聯(lián)合順鉑對(duì)大鼠C6膠質(zhì)細(xì)胞瘤的治療作用[J];浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2010年01期

2 蘇健裕;陳建平;李冰;李琳;;右旋龍腦-β-環(huán)糊精包合物穩(wěn)定性和溶出度的研究[J];中華中醫(yī)藥雜志;2012年08期

3 李劍明,楊和平,劉松青;3種姜黃色素單體抑制人內(nèi)皮細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];重慶醫(yī)學(xué);2002年09期

4 蔣金;曹友德;磨娜;李靜;莫顯剛;;姜黃素通過(guò)P53/P21/PCNA/eIF4E信號(hào)通路抑制A549細(xì)胞增殖[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2012年01期

5 袁凱龍,翁前鋒,張宏穎,熊建輝,楊軍,許國(guó)旺;毛細(xì)管電泳法測(cè)定尿中的姜黃素[J];色譜;2004年06期

6 ;Curcumin,a Potential Inhibitor of Up-regulation of TNF-alpha and IL-6 Induced by Palmitate in 3T3-L1 Adipocytes through NF-kappaB and JNK Pathway[J];Biomedical and Environmental Sciences;2009年01期

7 胡輝;荊緒斌;蔡先彬;王欽加;;姜黃素對(duì)食管癌EC-109細(xì)胞增殖抑制的研究[J];實(shí)用癌癥雜志;2011年03期

8 袁鵬;陳瑩;肖發(fā);沈立榮;;姜黃素的生物活性及在食品中的應(yīng)用[J];食品工業(yè)科技;2012年14期

9 何曉靜;菅凌燕;劉玉蘭;;冰片注射液對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性腦缺血的保護(hù)作用[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2006年01期

10 趙承光;梁廣;邵麗麗;雷培培;張美玲;李校X;;姜黃素類化合物抗炎和細(xì)胞保護(hù)作用的構(gòu)效關(guān)系研究進(jìn)展[J];中草藥;2008年04期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 林小瓊;基于iTRAQ技術(shù)的高效表達(dá)木聚糖酶重組畢赤酵母細(xì)胞的蛋白組學(xué)研究[D];華南理工大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張海嫦;P-gp參與耐藥乳腺癌細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：右旋龍腦促進(jìn)姜黃素類化合物抑制HepG2肝癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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