研究背景:多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是終末分化階段B細(xì)胞的一種血液系統(tǒng)惡性腫瘤,以惡性漿細(xì)胞克隆性增殖為特征�？寺⌒詽{細(xì)胞分泌大量單克隆免疫球蛋白（monoclonal protein,M蛋白）,導(dǎo)致終末器官的損害引起臨床癥狀。盡管當(dāng)前治療手段的發(fā)展對(duì)MM療效有了很大的改善,但目前MM仍是不可治愈的血液系統(tǒng)惡性腫瘤,MM發(fā)生發(fā)展的機(jī)制尚待深入挖掘。漿細(xì)胞遭受感染、炎癥的刺激后,會(huì)產(chǎn)生DNA損傷和基因組不穩(wěn)定性,可以通過出現(xiàn)和積累遺傳學(xué)事件,逐漸發(fā)展成為有臨床癥狀的MM。隨著疾病的進(jìn)展,新的細(xì)胞遺傳學(xué)事件不斷出現(xiàn),染色體易位、基因拷貝數(shù)變異和體細(xì)胞單核苷酸變異等事件的積累促進(jìn)了 MM的克隆演變。遺傳事件的出現(xiàn)與MM細(xì)胞（multiple myeloma cells,MMCs）的基因組不穩(wěn)定性密切相關(guān),DNA損傷后的修復(fù)異常是直接原因。DNA損傷中,最嚴(yán)重的是DNA雙鏈斷裂（double strand break,DSB）,主要由細(xì)胞通過同源重組（homologous recombination,HR）以及非同源末端連接（non-homologous end j... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：162 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【圖文】：

圖１．２流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)體外誘導(dǎo)的Ｍ＜Ｄｓ表面分子??Ａ．流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Ｍ＜Ｄｓ表面ＣＤ８０，?ＣＤ８６，?ＣＤ１６３和ＣＤ２０６的表達(dá)

ｙＨ２ＡＸ是ＤＮＡ損傷的標(biāo)志性蛋白，為研究ＭＯｓ對(duì)ＭＭＣｓ基線ＤＮＡ損傷的??影響，本課題收取與ＭＯｓ共培養(yǎng)前后的ＡＲＰ－１，０ＰＭ２，ＭＭ．１Ｓ和ＣＡＧ細(xì)胞，??提取蛋白做Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ測(cè)ＭＭＣｓ內(nèi)ＹＨ２ＡＸ表達(dá)水平。結(jié)果表明（圖１．４Ａ），??Ｍ＜Ｄｓ可明顯降低ＡＲＰ－１，?０ＰＭ２，?ＭＭ．１Ｓ和ＣＡＧ細(xì)胞基線的ＹＨ２ＡＸ水平。??為進(jìn)一步探究在ＡＲＰ－１，?０ＰＭ２，?ＭＭ．１Ｓ和ＣＡＧ在遭受ＤＮＡ損傷的情況下，??Ｍ〇）ｓ對(duì)ＭＭＣｓＤＮＡ損傷的作用，我們用博來霉素（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ，?ＢＬＭ）誘導(dǎo)ＭＭＣｓ??ＤＮＡ損傷，再讓ＭＭＣｓ與Ｍ＜Ｄｓ共培養(yǎng)２４ｈ，結(jié)果提示（圖１．４Ｂ）Ｍ（Ｄｓ可顯著降??低?ＡＲＰ－１

Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ＭＭＣｓ中ＹＨ２ＡＸ的表達(dá)。我們觀察到，不管是單獨(dú)培養(yǎng)組??還是ＭＯｓ共培養(yǎng)組，在博來霉素造成ＭＭＣｓＤＮＡ損傷后，ＹＨ２ＡＸ都經(jīng)歷了由高??到低的過程（圖１．５），代表對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中，ＭＭＣｓ在面對(duì)ＤＮＡ損傷時(shí)都啟??動(dòng)了細(xì)胞ＤＤＲ，隨著損傷的ＤＮＡ逐漸被修復(fù)，＂／Ｈ２ＡＸ表達(dá)量逐漸下降。結(jié)果顯??示，Ｍ＜Ｄｓ?共培養(yǎng)組?ＡＲＰ－１?（圖?１．５Ａ），０ＰＭ２?（圖?１．５Ｂ），ＭＭ．１Ｓ?（圖?１．５Ｃ）??和ＣＡＧ?（圖１．５Ｄ）?ｙＨ２ＡＸ下降地更快。??為了更加直觀及客觀地闡述ＭＭＣｓＤＮＡ損傷后，ＹＨ２ＡＸ在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組??中表達(dá)量的變化，本課題采用Ｘ光（Ｘ－ｒａｄｉａｔｉｏｎ，?Ｘ－Ｒａｙ）?５Ｇｙ劑量福照ＭＭ．ｌＳｌ??和ＣＡＧ細(xì)胞后，將細(xì)胞分為單獨(dú)培養(yǎng)組和與Ｍ＜Ｄｓ共培養(yǎng)組。分別在ｌｈ，２ｈ，４ｈ，??８ｈ，２４ｈ和４８ｈ收�。停停茫�，同空白對(duì)照及輻照Ｏｈ?（陽(yáng)性對(duì)照）一起行免疫熒光??檢測(cè)（選擇這兩種細(xì)胞株的原因是這兩株細(xì)胞可處于半貼壁狀態(tài)，利于做細(xì)胞免??疫熒光）。我們采用高內(nèi)涵細(xì)胞成像儀對(duì)免疫熒光片進(jìn)行圖像采集

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]槲皮素對(duì)人急性B淋巴細(xì)胞白血病NOD/SCID小鼠細(xì)胞周期及黏附分子表達(dá)的影響[J]. 王黎,戴紅衛(wèi),鄭君,周嬌,陳德森.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2018(06)
[2]PJ34對(duì)多發(fā)性骨髓瘤RPMI8226細(xì)胞體外生長(zhǎng)及其對(duì)馬法蘭敏感性的影響[J]. 熊婷,陳小瓊,魏恒,肖暉.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2014(03)



本文編號(hào)：3536110