目的:調(diào)查在痛風患者中骨侵蝕的發(fā)病率和相關(guān)因素;檢測毛殼素對痛風的作用并探索其機制;構(gòu)建高尿酸血癥動物模型,觀察其血尿酸水平及高尿酸血癥相關(guān)腎臟損害、糖脂代謝的情況及對降尿酸藥物的敏感性。方法:（1）收集在本院內(nèi)分泌門診就診的痛風患者的一般情況、生化指標。通過超聲掃描患者的下肢關(guān)節(jié)包括膝關(guān)節(jié)、踝關(guān)節(jié)、跗骨間關(guān)節(jié)、跖趾關(guān)節(jié)等。痛風的診斷根據(jù)2015年的ACR/EULAR痛風診斷標準,骨侵蝕通過有經(jīng)驗的影像學醫(yī)生通過關(guān)節(jié)超聲進行診斷。計算在痛風患者中骨侵蝕的患病率及好發(fā)部位,通過二元logistic回歸分析篩選痛風患者中骨侵蝕的獨立相關(guān)因素。（2）分離小鼠骨髓來源的巨噬細胞,檢測毛殼素對炎癥細胞因子IL-1β表達的影響,進一步探討其機制,檢測毛殼素對糖酵解通路及NLRP3炎癥小體激活的作用;在體外觀察毛殼素對單尿酸鈉鹽結(jié)晶（MSU）誘導的小鼠腹膜炎和關(guān)節(jié)炎的影響。（3）通過CRISPR-Cas9技術(shù)敲除Wistar大鼠的尿酸氧化酶（urate oxidase,UOX）基因,每4周采集空腹血,檢測其血尿酸、血脂、肌酐和尿素氮水平;收集24小時尿液檢測尿量和尿蛋白水平;腎臟病理包括HE、α-S... 

【文章來源】：上海交通大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

痛風性關(guān)節(jié)炎超聲超聲下征象

毛殼素抑制NLCaspase-1β-tubulin

上海交通大學2015級博士研究生學位論文 41 圖2.毛殼素抑制NLRP3炎癥小體的激活Figure2.ChaetocininhibitsNLRP3infammasomeactivation(A)Westernblot結(jié)果；(B)免疫熒光檢測ASC斑點；(C)免疫熒光結(jié)果定量。3.毛殼素抑制TLR4信號傳導并減少前IL-1β的產(chǎn)生在體外，MSU誘導的IL-1β釋放需要稱為“啟動”的過程以產(chǎn)生炎性細胞因子的前體，該過程由TLR配體觸發(fā)。在體外TLR信號刺激上調(diào)巨噬細胞中NLRP3的表達[23]。在本研究中，我們使用脂多糖（LPS）（一種TLR4激動劑）用于激活TLR4。如圖3A所示，LPS顯著上調(diào)NLRP3和pro-IL-1β的表達，該過程可以被毛殼素逆轉(zhuǎn)。qPCR結(jié)果顯示，LPS處理的BMDM細胞中NLRP3和Il1b的mRNA水平顯著上升，而毛殼素預處理能抑制這種改變（圖3B和C）。然后我們分析了Tnf的mRNA水平，Tnf是LPS經(jīng)典上調(diào)的基因。我們發(fā)現(xiàn)該基因的mRNA水平在LPS組中顯著更高，并且毛殼素逆轉(zhuǎn)了這些效應（圖3D）。通過ELISA檢測細胞上清中TNF-α的水平，結(jié)果顯示，在毛殼素預處理的BMDM細胞上清中TNF-α的水平顯著低于僅用LPS處理的細胞（圖3E）。然而，TLR配體引起炎性細胞因子前體產(chǎn)生的機制尚不完全清楚。據(jù)報道，在LPS處理過程中MAPKs的磷酸化發(fā)生了變化[24]，因此我們研究了是否是否會影響這一過程。如圖3F所示，LPS處理后p38MAPK，ERK和JNK的磷酸化水平顯著升高，但是，毛殼素并沒有對這一過程產(chǎn)生影響。因此，我們接下來尋找毛殼素抑制IL-1β前體表達的其他機制。AChaetocin---+Caspase-1β-tubulinASCLPS-+++MSU--++BC010203040Specksnumber*LPS-+++MSU--++Chaetocin---+***

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3533642