目的:調(diào)查在痛風(fēng)患者中骨侵蝕的發(fā)病率和相關(guān)因素;檢測(cè)毛殼素對(duì)痛風(fēng)的作用并探索其機(jī)制;構(gòu)建高尿酸血癥動(dòng)物模型,觀察其血尿酸水平及高尿酸血癥相關(guān)腎臟損害、糖脂代謝的情況及對(duì)降尿酸藥物的敏感性。方法:（1）收集在本院內(nèi)分泌門診就診的痛風(fēng)患者的一般情況、生化指標(biāo)。通過超聲掃描患者的下肢關(guān)節(jié)包括膝關(guān)節(jié)、踝關(guān)節(jié)、跗骨間關(guān)節(jié)、跖趾關(guān)節(jié)等。痛風(fēng)的診斷根據(jù)2015年的ACR/EULAR痛風(fēng)診斷標(biāo)準(zhǔn),骨侵蝕通過有經(jīng)驗(yàn)的影像學(xué)醫(yī)生通過關(guān)節(jié)超聲進(jìn)行診斷。計(jì)算在痛風(fēng)患者中骨侵蝕的患病率及好發(fā)部位,通過二元logistic回歸分析篩選痛風(fēng)患者中骨侵蝕的獨(dú)立相關(guān)因素。（2）分離小鼠骨髓來源的巨噬細(xì)胞,檢測(cè)毛殼素對(duì)炎癥細(xì)胞因子IL-1β表達(dá)的影響,進(jìn)一步探討其機(jī)制,檢測(cè)毛殼素對(duì)糖酵解通路及NLRP3炎癥小體激活的作用;在體外觀察毛殼素對(duì)單尿酸鈉鹽結(jié)晶（MSU）誘導(dǎo)的小鼠腹膜炎和關(guān)節(jié)炎的影響。（3）通過CRISPR-Cas9技術(shù)敲除Wistar大鼠的尿酸氧化酶（urate oxidase,UOX）基因,每4周采集空腹血,檢測(cè)其血尿酸、血脂、肌酐和尿素氮水平;收集24小時(shí)尿液檢測(cè)尿量和尿蛋白水平;腎臟病理包括HE、α-S... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：101 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎超聲超聲下征象

毛殼素抑制NLCaspase-1β-tubulin

上海交通大學(xué)2015級(jí)博士研究生學(xué)位論文 41 圖2.毛殼素抑制NLRP3炎癥小體的激活Figure2.ChaetocininhibitsNLRP3infammasomeactivation(A)Westernblot結(jié)果；(B)免疫熒光檢測(cè)ASC斑點(diǎn)；(C)免疫熒光結(jié)果定量。3.毛殼素抑制TLR4信號(hào)傳導(dǎo)并減少前IL-1β的產(chǎn)生在體外，MSU誘導(dǎo)的IL-1β釋放需要稱為“啟動(dòng)”的過程以產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子的前體，該過程由TLR配體觸發(fā)。在體外TLR信號(hào)刺激上調(diào)巨噬細(xì)胞中NLRP3的表達(dá)[23]。在本研究中，我們使用脂多糖（LPS）（一種TLR4激動(dòng)劑）用于激活TLR4。如圖3A所示，LPS顯著上調(diào)NLRP3和pro-IL-1β的表達(dá)，該過程可以被毛殼素逆轉(zhuǎn)。qPCR結(jié)果顯示，LPS處理的BMDM細(xì)胞中NLRP3和Il1b的mRNA水平顯著上升，而毛殼素預(yù)處理能抑制這種改變（圖3B和C）。然后我們分析了Tnf的mRNA水平，Tnf是LPS經(jīng)典上調(diào)的基因。我們發(fā)現(xiàn)該基因的mRNA水平在LPS組中顯著更高，并且毛殼素逆轉(zhuǎn)了這些效應(yīng)（圖3D）。通過ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清中TNF-α的水平，結(jié)果顯示，在毛殼素預(yù)處理的BMDM細(xì)胞上清中TNF-α的水平顯著低于僅用LPS處理的細(xì)胞（圖3E）。然而，TLR配體引起炎性細(xì)胞因子前體產(chǎn)生的機(jī)制尚不完全清楚。據(jù)報(bào)道，在LPS處理過程中MAPKs的磷酸化發(fā)生了變化[24]，因此我們研究了是否是否會(huì)影響這一過程。如圖3F所示，LPS處理后p38MAPK，ERK和JNK的磷酸化水平顯著升高，但是，毛殼素并沒有對(duì)這一過程產(chǎn)生影響。因此，我們接下來尋找毛殼素抑制IL-1β前體表達(dá)的其他機(jī)制。AChaetocin---+Caspase-1β-tubulinASCLPS-+++MSU--++BC010203040Specksnumber*LPS-+++MSU--++Chaetocin---+***

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3533642