本文關(guān)鍵詞：附子人參配伍對大鼠心肌細胞保護作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:1采用缺糖缺氧/復糖復氧方法建立大鼠心肌細胞損傷模型,附子人參不同配伍對其干預后,考察心肌細胞博動頻率、細胞活力、凋亡率、相關(guān)生化指標SOD活性、MDA含量、LDH釋放率、NO分泌量的影響等及Bcl-2、Bax、Caspases-3m RNA及蛋白表達變化,探討附子人參配伍對心肌細胞保護作用的最佳藥效比例及濃度。2附子具有強心、增加心肌收縮力的作用,但同時附子對心臟也會產(chǎn)生毒性,本文采用附子單獨應用產(chǎn)生的大鼠心肌細胞毒性作用,逐漸增加配伍中人參的比例,探討附子與人參在何種比例下,何種濃度時達到對心肌細胞的減毒作用。3附子、人參合理配伍應用對缺糖缺氧損傷大鼠心肌細胞具有保護作用,通過測定加入ERK1/2(細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶)信號轉(zhuǎn)導通路抑制劑前后相應指標的變化,探討其保護作用機制是否通過ERK1/2(細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶)信號轉(zhuǎn)導通路實現(xiàn)。方法:1乳鼠心肌細胞分離培養(yǎng)取24h內(nèi)新出生大鼠,置于超凈工作臺中,75%酒精消毒,無菌條件下取出心臟,剪成細小碎塊,采用胰蛋白酶與膠原酶進行消化處理,采用差速貼壁分離法去除成纖維細胞,得到較高純度的心肌細胞進行培養(yǎng)。2心肌細胞損傷模型的建立原代心肌細胞培養(yǎng)6天后,心肌細胞密度符合要求,自發(fā)博動頻率穩(wěn)定后,利用D-Hank’s液反復沖洗心肌細胞,降低葡萄糖濃度,確保其低于lmol/L,然后滴加Hank’s無糖液適量,置于缺氧盒中,將含量95%的N2混合氣體,緩慢持續(xù)通入2h,取出心肌細胞培養(yǎng)板,棄去Hank’s液,放入CO2培養(yǎng)箱進行正常培養(yǎng)24h,即模擬體內(nèi)心肌缺血再灌注。3附子人參不同配伍比例載藥血清的制備取附子、人參藥材飲片,按附子、人參0.5:1、1:1、2:1和4:1及附子、人參1:0、1:0.25、1:0.5、1:1、1:2共9種配伍比例混合,制備水煎液,放入4℃冰箱存儲備用。選取100只清潔級Wistar雄性大鼠,隨機分成10組,其中9組大鼠灌胃不同配伍比例的水煎液,第10組大鼠給予同體積生理鹽水,每日給藥1次,連續(xù)1周,于末次給藥2h后,經(jīng)股動脈取血,室溫放置、離心、分離血清,于無菌工作臺內(nèi)0.22μm濾膜過濾,56℃水浴滅活30 min,放入-20℃冰箱存儲備用。4檢測指標及方法4.1心肌細胞自發(fā)博動頻率心肌細胞經(jīng)藥物處理后,在規(guī)定的時間點將孵育有心肌細胞的多孔培養(yǎng)板從CO2培養(yǎng)箱中取出,置于倒置顯微鏡下,隨機選擇10個不同視野內(nèi)10個原代心肌細胞進行觀察,記錄心肌細胞的博動頻率(次/min),重復6次試驗,計算平均心肌細胞博動頻率(次/min)。4.2心肌細胞活力心肌細胞經(jīng)藥物處理后,在規(guī)定的時間點將孵育有心肌細胞的多孔培養(yǎng)板從CO2培養(yǎng)箱中取出,置入超凈工作臺內(nèi),吸棄其中液體,加入MTT溶液(5mg/ml)20μl,搖勻,37℃孵育4 h,吸棄上清液體,加入100μl DMSO溶液,置于振蕩器中輕輕搖動10min,待溶液中看不到藍色顆粒,放入酶標儀中,將檢測波長輕輕調(diào)節(jié)至490 nm,然后分別測定各個樣品吸光度A,并計算心肌細胞的存活率。4.3心肌細胞凋亡率的流式檢測取經(jīng)藥物處理后的心肌細胞,于規(guī)定的時間點利用Annexin V-FITC結(jié)合液195μl輕輕重懸沉淀心肌細胞,向懸浮心肌細胞溶液中加入Annexin V-FITC溶液5μl輕輕混合均勻,密封,用鋁箔包繞避光,于室溫(約25℃)下孵育10 min。再置入4℃預冷的離心機中,1000r/min離心3min,吸棄上清液,利用Annexin V-FITC結(jié)合液190μl輕輕重懸沉淀心肌細胞,向懸浮心肌細胞溶液中加入碘化丙啶染色溶液10μl輕輕混合均勻,密封,用鋁箔包繞避光,置于冰上10 min,隨即進行流式細胞儀分析檢測,激發(fā)波長Ex=488nm;發(fā)射波長Em=530 rim。4.4生化指標的檢測(SOD、MDA、LDH、NO)心肌細胞經(jīng)藥物處理后,在規(guī)定的時間點根據(jù)SOD、MDA、LDH、NO試劑盒的要求,測定各組心肌細胞的OD值4.5分光光度計分析Caspase-3活性心肌細胞經(jīng)藥物處理后,根據(jù)Caspase-3試劑盒的操作方法,在規(guī)定的時間點測定,利用熒光分光光度法測定各組吸光度值。4.6利用westernblot檢測Bcl-2、Bax及ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表達各組心肌細胞經(jīng)藥物處理后,以細胞裂解液提取心肌細胞Bcl-2、Bax及ERK1/2p-ERK1/2蛋白,按照BCA法進行蛋白定量。提取的蛋白進行SDS-PAGE電泳法分離,電泳結(jié)束后,進行轉(zhuǎn)膜,即將分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)到NC膜上,封閉孵育后加入一抗和二抗,進行孵育,再滴加適量熒光檢測試劑,轉(zhuǎn)入一體式熒光圖像分析儀中,進行各條帶積分光密度的掃描、分析。4.7利用RT-PCR檢測Bcl-2、Bax和Caspases-3 m RNA表達各組心肌細胞經(jīng)藥物處理后,利用TRIzol試劑提取總RNA,再利用紫外分光光度計檢測RNA的純度,然后逆轉(zhuǎn)錄合成c DNA,利用Bcl-2、Bax和Caspases-3引物進行目的基因的檢測。最后利用軟件Sequence Detection software version 1.2.3分析RT-PCR實驗的檢測結(jié)果,即分析所測得各個樣本的Ct值,再計算出各個目的基因的2-ΔΔCT值,進而得出不同組心肌細胞基因表達量的差別。5統(tǒng)計分析:用x±s表示試驗數(shù)據(jù),實驗結(jié)果的多因素統(tǒng)計分析采用SPSS13.0軟件進行。采用方差分析試驗結(jié)果多組間差異的顯著性,采用SNK檢驗試驗結(jié)果的組間兩兩比較。具有顯著差異性判斷依據(jù)為P0.05。結(jié)果:1附子人參配伍對缺糖缺氧/復糖復氧損傷大鼠心肌細胞的保護作用1.1對心肌細胞博動頻率的影響在0~72h內(nèi),模型組、空白血清組與空白對照組比較,原代培養(yǎng)的心肌細胞博動頻率顯著降低,其P0.05。與空白血清組相比較,不同配伍比例的附子人參組(0.5:1、1:1、2:1和4:1)心肌細胞自發(fā)博動頻率均有不同程度的升高,除在作用6h時,附子人參(0.5:1)組、附子人參(4:1)組外,在6~48 h內(nèi)差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05),且在6~48 h內(nèi)呈時效依賴關(guān)系,該結(jié)果表明:附子人參不同配伍對缺糖缺氧/復糖復氧所致?lián)p傷的原代大鼠心肌細胞具有一定保護作用。而在0~72 h內(nèi),附子人參(2:1)組心肌細胞的自發(fā)動博動頻率均在不同程度上高于其他配伍組,其中48 h時,與其他3個配伍組比較均有統(tǒng)計學意義(P0.05);24h和72h時,與附子人參(0.5:1)組、附子人參(4:1)組比較有統(tǒng)計學意義(P0.05);作用時間為12h時,與附子人參(0.5:1)組比較有統(tǒng)計學意義(P0.05),進一步表明附子人參(2:1)組對損傷心肌細胞保護作用最顯著。1.2對心肌細胞活力的影響在0~72 h內(nèi),與空白對照組比較,模型組、空白血清組細胞活力顯著下降(P0.05),表明心肌細胞缺糖缺氧/復糖復氧損傷模型成功建立。在6~72h內(nèi),不同配比的附子人參(0.5:1、1:1、2:1和4:1)配伍組,與空白血清組比較,除附子人參(0.5:1)組外,各配伍組心肌細胞活力逐漸升高(P0.05),且呈時效依賴關(guān)系,表明附子人參不同配伍對原代培養(yǎng)心肌細胞缺糖缺氧/復糖復氧造成的損傷具有一定抑制作用。在6~72 h內(nèi),附子人參(2:1)組心肌細胞活力均不同程度地高于其他配伍組,其中48 h時,與其他3個各配伍組相比均具有顯著性差異(P0.05);24h和72h時,與附子人參(0.5:1)組、附子人參(4:1)組比較有統(tǒng)計學意義(P0.05),表明附子人參(2:1)組對損傷心肌細胞保護作用最顯著。1.3對心肌細胞凋亡率的影響實驗結(jié)果顯示,在0~72h內(nèi),與空白對照組相比較,模型組,空白血清組心肌細胞凋亡率顯著升高(P0.05)。與空白血清組比較,除附子人參(0.5:1)組在作用6h時,心肌細胞凋亡率無統(tǒng)計學意義(P0.05)外,其余各附子人參配伍(1:1、2:1、4:1)組心肌細胞凋亡率在6~72h內(nèi)均顯著降低(P0.05),其余時間內(nèi)心肌細胞凋亡率有所下降,但不具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。各配伍組進行比較,附子人參(2:1)組心肌細胞凋亡率均顯著低于其他配伍組(P0.05)。且在作用48h時,附子人參(2:1)組心肌細胞凋亡率低于其他作用時間點。1.4對生化指標SOD\MDA\LDH\NO的影響與空白血清組相比,不同配比的附子人參配伍(0.5:1、1:1、2:1和4:1)組心肌細胞SOD活性顯著升高、MDA含量、LDH釋放率、NO分泌量顯著降低(P0.05)。與其他3個配伍組相比,附子人參(2:1)組心肌細胞SOD活性顯著升高、MDA含量、LDH釋放率顯著降低(P0.05),附子人參(2:1)組,與附子人參(0.5:1)組、附子人參(4:1)組比較,NO分泌量差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。1.5對心肌細胞Caspases-3活性及Caspases-3m RNA表達的影響各組原代培養(yǎng)心肌細胞經(jīng)附子人參配伍處理組后,與空白血清組相比,心肌細胞Caspases-3活性顯著降低、Caspases-3m RNA表達顯著下調(diào)(P0.05)。表明附子人參各配伍組對損傷心肌細胞Caspases-3活性及Caspases-3m RNA表達的升高具有抑制作用。與其他各給藥組相比,附子人參(2:1)組對細胞Caspases-3活性及Caspases-3m RNA表達的影響最顯著(P0.05)。1.6對心肌細胞Bcl-2 m RNA表達及Bcl-2和Bax蛋白表達的影響各組原代培養(yǎng)心肌細胞經(jīng)附子人參配伍處理組后,與空白血清組相比,心肌細胞Bcl-2 m RNA表達及Bcl-2的蛋白表達均顯著上調(diào),Bax的蛋白表達顯著下調(diào),均P0.05,表明附子人參不同配伍組對心肌細胞損傷而導致心肌細胞凋亡具有抑制作用。與其他各給藥組相比,附子人參(2:1)組對Bcl-2、Bax蛋白表達的影響最顯著(均P0.05),說明附子人參按2:1配伍使用對心肌細胞的保護作用較顯著。1.7不同濃度的附子人參對損傷心肌細胞保護作用的影響在考察附子人參配伍不同濃度對缺糖缺氧所致心肌細胞損傷的保護作用研究中,三個不同濃度的(15%、10%、5%)均對損傷心肌細胞有保護作用,其中心肌細胞博動頻率、細胞活力、SOD活性、LDH釋放率、Bcl-2m RNA表達、Bcl-2、Bax蛋白表達的檢測結(jié)果顯示,15%、10%濃度明顯優(yōu)于5%濃度(P0.05),15%、10%濃度之間無明顯差異。其他檢測指標MDA含量、NO分泌量、心肌細胞凋亡率、Caspases-3活性及Caspases-3m RNA表達,15%、10%、5%3個濃度之間均無顯著性差異(P0.05)。2附子人參配伍對大鼠心肌細胞的減毒作用2.1對心肌細胞自發(fā)博動頻率的影響在藥物干預的0~4 h內(nèi),與空白血清組比較,附子人參(1:0)組心肌細胞自發(fā)搏動頻率顯著增加(P0.05),表明附子增加了原代培養(yǎng)的心肌細胞自發(fā)搏動頻率。而附子配伍不同比例人參的心肌細胞處理組,與附子人參(1:0)組相比較,心肌細胞自發(fā)博動頻率顯著降低(P0.05),表明人參對附子引起的心肌細胞博動頻率增加有緩解作用。其中附子人參(1:0.25)組在0~4 h內(nèi)呈時效依賴關(guān)系,而附子人參(1:0.5)組對心肌細胞自發(fā)博動的影響與附子人參(1:0.25)組比較具有顯著性差異(P0.05),與附子人參(1:1)組、附子人參(1:2)組和空白血清組比較不具有顯著性差異(P0.05),表明附子人參配伍,人參比例達到0.5倍時,心肌細胞博動頻率趨近空白血清組水平。2.2對心肌細胞活力的影響培養(yǎng)的原代心肌細胞經(jīng)藥物處理后,在1~4 h內(nèi),與空白血清組比較,附子人參(1:0)組細胞活力顯著下降(P0.05),表明附子對原代培養(yǎng)的心肌細胞具有損傷作用,導致心肌細胞活力下降,而附子配伍不同比例人參的處理組,與附子人參(1:0)組相比,心肌細胞活力逐漸升高,在2~4 h內(nèi),具有顯著性差異(P0.05),表明人參對附子引起的心肌細胞活力降低具有抑制作用。其中附子人參(1:0.25)組在0~4 h內(nèi)呈時效依賴關(guān)系,而附子人參(1:0.5)組對心肌細胞的細胞活力的影響與附子人參1:1組、附子人參(1:2)組和空白血清組比較不具有顯著性差異(P0.05),在3~4 h與附子人參(1:0.25)組比較具有顯著性差異(P0.05),表明附子人參配伍,人參比例達到0.5倍時,心肌細胞活力趨近空白血清組水平。2.3對心肌細胞生化指標SOD、MDA、LDH、NO的影響與空白血清組比較,附子人參1:0組心肌細胞SOD活性顯著降低,MDA含量、LDH釋放率、NO分泌量顯著升高(P0.05),表明心肌細胞受到附子干預后,產(chǎn)生大量的自由基,導致心肌細胞損傷,凋亡。與附子人參(1:0)組相比,附子配伍不同比例人參的處理組,心肌細胞SOD活性顯著升高、MDA含量、LDH釋放率、NO分泌量顯著降低(P0.05),表明人參對附子引起的原代心肌細胞損傷具有一定的抑制作用。其中附子人參(1:0.5)組對心肌細胞SOD活性、MDA含量、LDH釋放率、NO分泌量的影響與空白血清組比較不具有顯著性差異(P0.05),與附子人參(1:0.25)組比較具有顯著性差異(P0.05),表明人參比例為附子0.5倍時,即可抑制附子對原代培養(yǎng)心肌細胞的損傷作用。2.4附子人參配伍不同濃度的對心肌細胞減毒作用的影響與空白血清各濃度組比較,附子人參(1:0)各濃度組心肌細胞博動頻率顯著增加、活力顯著降低、SOD活性顯著降低,MDA含量、LDH釋放率、NO分泌量顯著升高(P0.05),表明附子各濃度對原代培養(yǎng)的心肌細胞均具有損傷作用。與附子人參(1:0)各濃度組相比,附子配伍人參(1:0.5)的各濃度處理組,心肌細胞博動頻率顯著降低、細胞活力、心肌細胞SOD活性顯著升高、MDA含量、LDH釋放率、NO分泌量顯著降低(P0.05),表明附子配伍人參(1:0.5)的各濃度(15%、10%、5%)對心肌細胞損傷均有抑制作用,附子人參(1:0.5)組各濃度組之間比較,以上指標的變化無顯著性差異(P0.05)。2.5對心肌細胞Caspases-3活性及Bcl-2、Caspases-3 m RNA表達的影響培養(yǎng)的原代心肌細胞經(jīng)藥物處理后,與空白血清組比較,附子人參(1:0)組心肌細胞Bcl-2 m RNA的表達均明顯下調(diào),Caspases-3活性、Caspases-3 m RNA表達明顯上調(diào),均具有顯著性差異(P0.05),表明附子對原代培養(yǎng)的心肌細胞具有損傷作用,進而導致心肌細胞凋亡。而附子配伍不同比例人參的處理組,與附子人參(1:0)組相比,心肌細胞Bcl-2 m RNA的表達明顯上調(diào),Caspases-3活性、Caspases-3 m RNA的表達明顯下調(diào),均為顯著性差異(P0.05),表明人參對附子引起的心肌細胞毒性具有抑制作用,附子人參(1:0.5)組對Bcl-2、Caspases-3 m RNA及Caspases-3活性表達的影響與附子人參(1:0.25)組比較具有顯著性差異(P0.05),與空白血清組比較不具有顯著性差異(P0.05),表明人參比例為附子0.5倍時,即可抑制附子對原代培養(yǎng)心肌細胞的損傷作用。2.6對心肌細胞Bcl-2和Bax蛋白表達的影響培養(yǎng)的原代心肌細胞經(jīng)藥物處理后,與空白血清組比較,附子人參(1:0)組心肌細胞Bcl-2的蛋白表達顯著下調(diào),Bax的蛋白表達顯著上調(diào),均具有顯著性差異(P0.05),表明附子對原代培養(yǎng)的心肌細胞具有損傷,使心肌細胞凋亡。而附子配伍不同比例人參的心肌細胞處理組,與附子人參(1:0)組相比,心肌細胞Bcl-2的蛋白表達顯著上調(diào),Bax的蛋白表達顯著下調(diào),均為顯著性差異(P0.05),表明人參對附子引起的心肌細胞損傷具有抑制作用,附子人參(1:0.5)組對心肌細胞Bcl-2和Bax蛋白表達的影響與附子人參(1:0.25)組比較具有顯著性差異(P0.05),與空白血清組組比較不具有顯著性差異(P0.05),表明人參比例為附子0.5倍時,即可抑制附子對原代培養(yǎng)心肌細胞的損傷作用。3附子人參配伍對缺糖缺氧/復糖復氧損傷心肌細胞保護作用機制的研究與空白血清組相比較,附子人參(2:1)組對缺糖缺氧/復糖復氧損傷心肌細胞ERK1/2、Bcl-2以及ERK1/2磷酸化蛋白表達升高,Bax蛋白表達降低,Bcl-2 m RNA表達升高,Bax、Caspases-3 m RNA表達降低,均具有顯著性差異(P0.05)。附子人參(2:1)加入ERK抑制劑PD98059共處理后,即附子人參(2:1)+PD98059組對缺糖缺氧/復糖復氧損傷心肌細胞ERK1/2、Bcl-2、Bax及ERK1/2磷酸化蛋白表達量及Bcl-2、Bax、Caspases-3 m RNA表達量,與空白血清組相比較基本相當,不具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:1附子人參配伍對缺糖缺氧/復糖復氧損傷大鼠心肌細胞具有保護作用,其中以附子人參配伍比例2:1效果最為顯著,在考察附子人參配伍不同濃度對缺糖缺氧所致心肌細胞損傷的保護作用研究中,三個不同濃度的(15%、10%、5%)均對損傷心肌細胞有保護作用,15%、10%濃度優(yōu)于5%濃度,但15%、10%之間無差異。2附子配伍不同比例的人參可抑制附子對心肌細胞的毒性作用,其中附子人參配比為1:0.5時,人參即可有效地抑制附子的毒性作用。15%、10%、5%各濃度對心肌細胞的減毒作用無顯著性差異。3 ERK1/2信號通路可能涉及附子、人參配伍(2:1)對缺糖缺氧再灌損傷原代培養(yǎng)心肌細胞的保護作用。
【關(guān)鍵詞】：附子 人參 配伍 缺糖取樣/復糖復氧 減毒 心肌細胞 細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶
【學位授予單位】：長春中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 中文摘要7-14
• 英文摘要14-22
• 英文縮略語22-25
• 前言25-28
• 文獻綜述28-48
• 一 附子毒性的研究進展及常用的減毒方法28-39
• 二 心力衰竭研的究進展及與ERK1/2 關(guān)系39-48
• 實驗研究48-144
• 第一章 原代大鼠心肌細胞的培養(yǎng)48-65
• 1 實驗材料48-50
• 2 實驗方法50-55
• 3 實驗結(jié)果55-62
• 4 小結(jié)62-65
• 第二章 附子人參配伍對缺糖缺氧/復糖復氧損傷大鼠心肌細胞的保護作用65-109
• 第一節(jié) 附子人參不同配伍比例對損傷大鼠心肌細胞的保護作用65-90
• 1 實驗材料66-68
• 2 實驗方法68-80
• 3 實驗結(jié)果80-90
• 3.1 心肌細胞自發(fā)博動頻率的測定結(jié)果80-82
• 3.2 心肌細胞活力測定結(jié)果82
• 3.3 心肌細胞凋亡率測定結(jié)果82-85
• 3.4 心肌細胞生化指標的測定結(jié)果(SOD、MDA、LDH、NO)85-87
• 3.5 心肌細胞Caspases-3 活性檢測結(jié)果87
• 3.6 心肌細胞Bcl-2 mRNA表達的測定結(jié)果87
• 3.7 心肌細胞Caspases-3 mRNA表達的測定結(jié)果87-88
• 3.8 心肌細胞Bcl-2 和Bax蛋白表達的測定結(jié)果88-90
• 第二節(jié) 附子人參配伍不同濃度對損傷大鼠心肌細胞的保護作用90-101
• 1 實驗材料90
• 2 實驗方法90-92
• 3 實驗結(jié)果92-101
• 3.1 心肌細胞的自發(fā)博動測定結(jié)果92-94
• 3.2 心肌細胞活力的測定結(jié)果94
• 3.3 心肌細胞凋亡率檢測的結(jié)果94-95
• 3.4 心肌細胞生化指標的測定結(jié)果(SOD、MDA、LDH、NO)95-97
• 3.5 肌細胞Caspases-3 活性檢測結(jié)果97
• 3.6 心肌細胞Bcl-2 mRNA表達的結(jié)果97-98
• 3.7 心肌細胞Caspases-3 mRNA表達的結(jié)果98-99
• 3.8 心肌細胞Bcl-2 和Bax蛋白表達的結(jié)果99-101
• 第三節(jié) 小結(jié)與討論101-109
• 1 結(jié)果討論101-104
• 2 心肌細胞損傷造模方法的選擇104-105
• 3 附子人參配伍比例、濃度及檢測時間點的確定105-106
• 4 檢測指標的選擇106-109
• 第三章 附子人參配伍對大鼠心肌細胞的減毒作用109-131
• 第一節(jié) 附子人參不同配伍比例對大鼠心肌細胞的減毒作用109-119
• 1 實驗材料109-111
• 2 實驗方法111-112
• 3 實驗結(jié)果112-119
• 3.1 心肌細胞自發(fā)博動的測定結(jié)果112-113
• 3.2 心肌細胞活力的檢測結(jié)果113-114
• 3.3 生化指標檢測結(jié)果(SOD、MDA、LDH、NO)114-116
• 3.4 心肌細胞Caspases-3 活性檢測結(jié)果116-117
• 3.5 心肌細胞Bcl-2 和Caspases-3 mRNA表達的結(jié)果117
• 3.6 心肌細胞Bcl-2 和Bax蛋白表達的結(jié)果117-119
• 第二節(jié) 附子人參配伍不同濃度對大鼠心肌細胞的減毒作用119-125
• 1 實驗材料119
• 2 實驗方法119-120
• 3 實驗結(jié)果120-125
• 3.1 心肌細胞自發(fā)博動頻率的測定結(jié)果120-121
• 3.2 心肌細胞活力的檢測結(jié)果121-122
• 3.3 生化指標檢測結(jié)果(SOD、MDA、LDH、NO)122-125
• 第三節(jié) 小結(jié)與討論125-131
• 第四章 附子人參配伍對缺糖缺氧/復糖復氧損傷心肌細胞保護作用機制的研究131-144
• 1 實驗材料131-133
• 2 實驗方法133-134
• 3 實驗結(jié)果134-140
• 3.1 藥物對心肌細胞ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2 和Bax蛋白表達的影響134-139
• 3.2 藥物對心肌細胞Bcl-2、Bax、Caspases-3 mRNA表達的影響139-140
• 4 小結(jié)與討論140-144
• 4.1 心肌細胞凋亡與ERK1/2140-142
• 4.2 附子人參(2:1)配伍對心肌細胞ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2 和Bax蛋白表達的影響142
• 4.3 附子人參(2:1)配伍對心肌細胞ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2 和Bax蛋白表達“時-效”關(guān)系的影響142-143
• 4.4 附子人參(2:1)配伍對心肌細胞Bcl-2、Bax、Caspases-3 mRNA表達的影響143-144
• 討論144-146
• 結(jié)語146-147
• 致謝147-149
• 參考文獻149-168

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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  本文關(guān)鍵詞：附子人參配伍對大鼠心肌細胞保護作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：353322