第一部分結(jié)腸癌患者血清差異表達(dá)miRNAs的初步篩選目的:通過(guò)芯片初步篩選結(jié)腸癌患者血清中差異表達(dá)的miRNAs。方法:采用中國(guó)科學(xué)院蘇州納米技術(shù)與納米仿生研究所開(kāi)發(fā)的miRNA Uni Tag?微陣列芯片,檢測(cè)3例結(jié)腸癌患者血清樣本和3例健康對(duì)照血清中miRNAs的表達(dá)情況,分析結(jié)腸癌血清中差異表達(dá)的miRNAs。結(jié)果:miRNA Uni Tag?微陣列芯片雜交結(jié)果顯示,根據(jù)改變倍數(shù)≧1.5且P值<0.05篩選在結(jié)腸癌患者血清中差異表達(dá)的miRNAs。結(jié)腸癌患者共有87種血清miRNAs差異表達(dá),其中上調(diào)表達(dá)有39個(gè),下調(diào)表達(dá)有48個(gè)。結(jié)論:成功篩選出結(jié)腸癌患者血清中差異表達(dá)miRNAs。第二部分初步評(píng)價(jià)血清miRNA表達(dá)譜在結(jié)腸癌診斷和預(yù)后判斷中的作用目的:初步探討血清miRNA表達(dá)譜在結(jié)腸癌診斷和預(yù)后判斷中的作用。方法:（1）采用Real-time PCR對(duì)芯片中差異表達(dá)最明顯（表達(dá)變化前5位）的miRNAs在訓(xùn)練集（40例結(jié)腸癌患者vs.40例正常對(duì)照）和驗(yàn)證集（60例結(jié)腸癌患者vs.60例正常對(duì)照）中進(jìn)行驗(yàn)證,構(gòu)建結(jié)腸癌血清miRNA表達(dá)譜。（2）對(duì)血清miRNA表達(dá)譜... 

【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

miRNAUniTag微陣列芯片探針差異倍數(shù)柱狀圖

第一部分血清microRNA在結(jié)腸癌中表達(dá)變化的臨床研究8如圖1所示為miRNAUniTag微陣列芯片所有基因探針與分組比對(duì)中的信號(hào)差異情況。圖中橫坐標(biāo)通過(guò)log2代表差異的倍數(shù)，縱坐標(biāo)為探針數(shù)目。通常來(lái)講，其分布應(yīng)該為正態(tài)分布，即比對(duì)中的上/下調(diào)基因基本一致。在本次實(shí)驗(yàn)中，結(jié)腸癌組/正常對(duì)照組的上/下調(diào)基因大致相當(dāng)，表明本芯片的檢測(cè)結(jié)果較理想。3miRNAUniTag微陣列芯片結(jié)腸癌對(duì)比正常對(duì)照血清組的差異表達(dá)基因火山圖(見(jiàn)圖2)圖2miRNAUniTag微陣列芯片結(jié)腸癌/正常對(duì)照血清的火山圖圖2所示為分組比對(duì)中差異基因探針的分布。橫坐標(biāo)表示差異倍數(shù)（Foldchange,log2），縱坐標(biāo)以-log(p值)進(jìn)行表示，代表差異的顯著性。藍(lán)色和紅色虛線表示p值及倍數(shù)篩選的閾值。圖中各點(diǎn)分別代表一個(gè)檢出的基因探針（除了控制探針及flagged探針之外）。結(jié)腸癌組/正常對(duì)照組的差異表達(dá)基因篩選閾值為Foldchange絕對(duì)值≧1.5（紅線），且P-value＜0.05（藍(lán)線），差異探針為左上方和右上方的點(diǎn)。4結(jié)腸癌患者血清中差異表達(dá)的miRNA的芯片表達(dá)譜通過(guò)數(shù)據(jù)的對(duì)比分析可知，按照改變倍數(shù)大于等于1.5且P值小于0.05來(lái)做為篩選，相比正常血清樣品，結(jié)腸癌患者的血清中存在差異表達(dá)的miRNA，一共有87種，其中上調(diào)表達(dá)有39個(gè)，下調(diào)表達(dá)有48個(gè)（見(jiàn)表3）。采用層次聚類(lèi)（hierarchicalclusteringanalysis）分析，對(duì)差異表達(dá)的87種miRNA繪制熱圖，結(jié)果見(jiàn)圖3，表3。

血清microRNA在結(jié)腸癌中表達(dá)變化的臨床研究第一部分9圖33例結(jié)腸癌患者血清標(biāo)本，3例正常人血清標(biāo)本miRNA芯片結(jié)果熱圖，綠色表示miRNA低表達(dá)，紅色表示miRNA高表達(dá)。（篩選條件為改變倍數(shù)大于等于1.5倍，P值<0.05,Ca:結(jié)腸癌血清T：正常人血清）


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