本文關(guān)鍵詞：間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體對(duì)急性肺損傷小鼠的影響及相關(guān)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的：急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)是臨床常見的危重病癥,其起病急驟,病情兇險(xiǎn),死亡率高。ARDS的常見病因?yàn)楦腥?重癥感染極易導(dǎo)致膿毒癥的發(fā)生,而膿毒癥是多器官衰竭包括ARDS的前奏。盡管國(guó)內(nèi)外學(xué)者針對(duì)膿毒癥致ARDS的治療進(jìn)行了大量的研究,但總的看來,結(jié)果不能令人滿意,其病死率仍高達(dá)40%以上。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSCs)具有多向分化能力,取材簡(jiǎn)便,提取過程較簡(jiǎn)單,不會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)具有重要的免疫調(diào)節(jié)和抗炎活性,是理想的組織修復(fù)來源,一系列臨床前研究證實(shí)其能顯著改善ARDS的癥狀及預(yù)后。但是直接移植具有致瘤、栓塞、異常分化、免疫調(diào)節(jié)不可控等風(fēng)險(xiǎn),對(duì)其應(yīng)用造成限制。間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體(exosomes)是MSCs在靜息或活化狀態(tài)下釋放到細(xì)胞外基質(zhì)中的膜分泌體系,不僅含有間充質(zhì)干細(xì)胞的活性物質(zhì),而且具有選擇性組裝、靶向性投遞、高效修復(fù)受損組織、安全性高,化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定易于保存等優(yōu)點(diǎn),是干細(xì)胞領(lǐng)域具有重要研究?jī)r(jià)值的新興熱點(diǎn)。本研究擬將間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體用于急性肺損傷小鼠模型的干預(yù)治療,從生存率、損傷程度、通透性改變、炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激反應(yīng)等五方面評(píng)價(jià)間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的生物學(xué)效應(yīng)并探討其相關(guān)的機(jī)制,為ALI的治療探索新方法。方法與結(jié)果首先分離出MSCs,分離過程采用組織細(xì)胞貼壁法,分離后培養(yǎng)和擴(kuò)增至第三代,然后通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)表明標(biāo)志物,分化誘導(dǎo)培養(yǎng)對(duì)MSCs進(jìn)行成脂、成骨和成軟骨鑒定,最后采用超高速離心法得到MSCs上清中的外泌體,并對(duì)外泌體進(jìn)行表面標(biāo)志物的鑒定。采用盲腸結(jié)扎穿孔法(Cecal ligation perforation, CLP)建立ALI小鼠模型,然后將200只小鼠隨機(jī)地分為正常對(duì)照組即生理鹽水組(Saline組)、CLP加尾靜脈注入等量生理鹽水對(duì)照組(CLP+Saline組)、CLP加尾靜脈注入去除外泌體MSC濃縮上清對(duì)照組(CLP+ExD-CM組)和CLP加尾靜脈注入外泌體實(shí)驗(yàn)組(CLP+Exsomes組)。結(jié)果顯示：在6h和24h時(shí)間點(diǎn),CLP+Exsomes實(shí)驗(yàn)組肺組織病理切片的病變程度明顯減輕,病理評(píng)分有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；CLP+Exsomes實(shí)驗(yàn)組肺濕干比和肺泡灌洗液(BALF)中總蛋白含量與對(duì)照組CLP+Saline和CLP+ExD-CM比較明顯減低；CLP+Exsomes實(shí)驗(yàn)組BALF中中性粒細(xì)胞數(shù)量和肺組織髓過氧化物酶(MPO)的活性與對(duì)照組比較明顯降低;CLP+Exsomes實(shí)驗(yàn)組BALF中和血漿中促炎因子水平與對(duì)照組相比明顯降低而抗炎因子水平明顯增高；另外隨機(jī)將40只小鼠分為同樣的4組單獨(dú)測(cè)試生存率,最終結(jié)果提示與對(duì)照組相比,CLP+Exsomes組7天生存率明顯增高；CLP+Exsomes實(shí)驗(yàn)組肺組織抗氧化應(yīng)激酶如超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)比對(duì)照組明顯增高；免疫組化示CLP+Exsomes實(shí)驗(yàn)組肺組織誘導(dǎo)型一氧化氮合酶iNOS陽(yáng)性的細(xì)胞較對(duì)照組減少,且肺組織反應(yīng)脂質(zhì)過氧化活性的丙二醛(MDA)濃度明顯降低；肺組織免疫蛋白印記顯示CLP+Exsomes實(shí)驗(yàn)組肺組織MAPK、NF-kB表達(dá)明顯降低,而血紅素加氧酶-1(HO-1)、Nrf-2明顯增高。結(jié)論：1.運(yùn)用組織細(xì)胞貼壁法能成功從人臍帶中分離MSCs,并可在體外培養(yǎng)擴(kuò)增。2.運(yùn)用超高速離心法能成功從人臍帶MSCs上清中提取外泌體,其表達(dá)CD9、CD63、CD81等特有標(biāo)志。3. MSCs外泌體能抑制全身炎癥反應(yīng),減少肺組織氧化應(yīng)激損傷,改善肺毛細(xì)血管通透性,減輕ALI肺損傷的嚴(yán)重程度,提高膿毒癥致ALI小鼠的生存率。；5. MSCs外泌體發(fā)揮作用的潛在機(jī)制與抑制MAPK和NF-κB的磷酸化,增強(qiáng)Nrf2和HO-1的活化有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 外泌體 膿毒癥 急性肺損傷
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R563.8
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-8
• 摘要8-10
• Abstract10-13
• 前言13-15
• 第一部分 間充質(zhì)干細(xì)胞及外泌體分離和鑒定15-34
• 第一節(jié) 間充質(zhì)干細(xì)胞的分離和鑒定16-24
• 材料與方法16-21
• 結(jié)果21-24
• 第二節(jié) 間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的分離和鑒定24-34
• 材料與方法24-30
• 結(jié)果30-31
• 討論31-33
• 小結(jié)33-34
• 第二部分 間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體對(duì)ALI小鼠的影響34-78
• 第一節(jié) 小鼠ALI模型的構(gòu)建36-41
• 材料與方法36-40
• 結(jié)果40-41
• 第二節(jié) 間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體對(duì)ALI小鼠生存率和病理變化的影響41-47
• 材料與方法41-43
• 結(jié)果43-47
• 第三節(jié) 間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體對(duì)ALI小鼠通透性的影響47-50
• 材料與方法47-48
• 結(jié)果48-50
• 第四節(jié) 間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體對(duì)ALI小鼠炎性浸潤(rùn)的影響50-61
• 材料與方法50-53
• 結(jié)果53-61
• 第五節(jié) 間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體對(duì)ALI小鼠氧化應(yīng)激的影響61-78
• 材料與方法61-67
• 結(jié)果67-72
• 討論72-77
• 小結(jié)77-78
• 第三部分 間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體對(duì)ALI小鼠作用機(jī)制的探討78-91
• 第一節(jié) 間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體對(duì)ALI小鼠肺組織MAPK通路的影響80-83
• 材料與方法80-81
• 結(jié)果81-83
• 第二節(jié) 間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體對(duì)ALI小鼠肺組織NF-κB通路的影響83-85
• 材料與方法83-84
• 結(jié)果84-85
• 第三節(jié) 間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體對(duì)ALI小鼠肺組織HO-1和Nrf-2通路的影響85-91
• 材料與方法85-86
• 結(jié)果86-87
• 討論87-90
• 小結(jié)90-91
• 全文結(jié)論91-92
• 參考文獻(xiàn)92-101
• 文獻(xiàn)綜述101-110
• 參考文獻(xiàn)106-110
• 致謝110

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 邊素艷;崔華;;膜微粒:干細(xì)胞組織修復(fù)的新機(jī)制?[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2012年02期

  本文關(guān)鍵詞：間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體對(duì)急性肺損傷小鼠的影響及相關(guān)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：351521