目的:本研究的目的是在觀察膿毒癥相關(guān)性腦�。⊿epsis-associated Encephalopathy,SAE）線粒體損傷的基礎(chǔ)上,探討亞甲藍(lán)（Methylene Blue,MB）通過AMPK/PGC-1α通路對SAE腦能量代謝的調(diào)控作用。主要研究包括:1)制備膿毒癥相關(guān)性腦病的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?觀察線粒體損傷,三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）水平、細(xì)胞凋亡等;2)探討MB在SAE細(xì)胞模型中對AMPK/PGC-1α通路的激活以及能量調(diào)控;3)建立Wistar大鼠膿毒癥模型,探討亞甲藍(lán)在SAE動物模型中對SAE Wistar大鼠的AMPK/PGC-1α通路的激活以及能量調(diào)控。方法:1)應(yīng)用細(xì)胞原代培養(yǎng)技術(shù)分離純化Wistar大鼠乳鼠（出生3天以內(nèi)）的大腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞,進(jìn)行純度鑒定后,以不同濃度的脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）和20 ng/mL的干擾素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）聯(lián)合孵育,依照孵育時(shí)間（6h,12h,24h,48h）以及脂多糖的濃度（50 ng/mL,100 ng/mL,200 ng/mL）制備... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：148 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1-1分組示意圖

新疆醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文22圖1-2技術(shù)路線圖Fig.1-2Studytechnologyroadmap2結(jié)果2.1原代培養(yǎng)的大鼠大腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的純度鑒定應(yīng)用ImageJ軟件對圖片中的抗GFAP抗體標(biāo)記的綠色星形膠質(zhì)細(xì)胞和藍(lán)色DAPI復(fù)染的全部細(xì)胞核計(jì)數(shù)，算出二者比例，為原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞純度，隨機(jī)選3個(gè)視野，求得純度平均值為98%以上，視為純度合格，滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)需要。如圖1-3所示：圖1-3原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞純度鑒定（200×）Fig.1-3Purityidentificationofprimaryculturedastrocytes（200×）

新疆醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文22圖1-2技術(shù)路線圖Fig.1-2Studytechnologyroadmap2結(jié)果2.1原代培養(yǎng)的大鼠大腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的純度鑒定應(yīng)用ImageJ軟件對圖片中的抗GFAP抗體標(biāo)記的綠色星形膠質(zhì)細(xì)胞和藍(lán)色DAPI復(fù)染的全部細(xì)胞核計(jì)數(shù)，算出二者比例，為原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞純度，隨機(jī)選3個(gè)視野，求得純度平均值為98%以上，視為純度合格，滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)需要。如圖1-3所示：圖1-3原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞純度鑒定（200×）Fig.1-3Purityidentificationofprimaryculturedastrocytes（200×）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3489943