背景:神經(jīng)膠質(zhì)瘤是神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)的原發(fā)惡性腫瘤之一,具有較高的發(fā)病率。臨床上膠質(zhì)瘤的治療手段主要是手術(shù)治療輔助放化療。但經(jīng)過(guò)系統(tǒng)性治療后,患者的平均生存期大多也不超過(guò)一年。這可能是由于膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有抗凋亡性,導(dǎo)致其對(duì)放化療不敏感,因此通過(guò)誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)生程序性壞死有望成為一種有效的治療手段。程序性壞死與細(xì)胞凋亡不同,它是一種caspase非依賴性的程序性死亡方式,其機(jī)制與凋亡相似,但形態(tài)學(xué)特征與壞死相似。程序性壞死過(guò)程首先激活RIP1,RIP1通過(guò)其RIP同型作用基團(tuán)激活下游信號(hào)因子RIP3并與之結(jié)合形成“壞死體”,除此之外RIP3還可以通過(guò)自磷酸化作用而被激活。在程序性壞死的過(guò)程中,通常伴有細(xì)胞腫脹、胞膜通透性增強(qiáng)、胞核中DNA的損傷以及細(xì)胞能量衰竭。DNA損傷包括DNA單鏈斷裂,堿基不穩(wěn)定性位點(diǎn)和DNA雙鏈斷裂等多種形式,其中DNA雙鏈斷裂是DNA損傷中最嚴(yán)重的形式,可以造成染色質(zhì)的裂解,引起細(xì)胞死亡。當(dāng)DNA復(fù)制時(shí)受到化學(xué)藥物、電離輻射或氧化應(yīng)激作用后會(huì)導(dǎo)致DNA損傷,發(fā)生DNA雙鏈斷裂。程序性壞死在DNA雙鏈斷裂中的作用尚不完全清楚。在DNA發(fā)生雙鏈斷裂時(shí),DNA依懶性蛋白激... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
前言
中文摘要
Abstract
第一章 緒論
第二章 文獻(xiàn)綜述
    2.1 神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療的現(xiàn)狀
        2.1.1 治療方法總論
        2.1.2 手術(shù)治療
        2.1.3 放射治療
        2.1.4 化學(xué)治療
        2.1.5 其他治療方法
    2.2 程序性壞死
    2.3 Cyclophilin A
    2.4 紫草素研究現(xiàn)狀
第三章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)器材與試劑
        3.1.1 主要的實(shí)驗(yàn)器材
        3.1.2 主要的實(shí)驗(yàn)試劑
    3.2 細(xì)胞系及細(xì)胞培養(yǎng)裸鼠飼養(yǎng)
    3.3 實(shí)驗(yàn)藥物、液體及配置方法
    3.4 細(xì)胞復(fù)蘇、傳代及凍存
    3.5 實(shí)驗(yàn)技術(shù)
        3.5.1 MTT法檢測(cè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生存率
        3.5.2 LDH乳酸脫氫酶釋放法檢測(cè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的死亡率
        3.5.3 siRNA干擾細(xì)胞中蛋白的表達(dá)
        3.5.4 通過(guò)JC-1 檢測(cè)線粒體膜電位(熒光顯微鏡/流式細(xì)胞術(shù))
        3.5.5 膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)ROS水平及線粒體內(nèi)過(guò)氧化物的檢測(cè)(熒光顯微鏡/酶標(biāo)儀)
        3.5.6 Hoechst染色觀察膠質(zhì)瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化
        3.5.7 激光共聚焦掃描顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)蛋白水平的變化
        3.5.8 彗星實(shí)驗(yàn)(中性)
        3.5.9 瓊脂糖凝膠電泳
        3.5.10 Western Blot檢測(cè)細(xì)胞胞漿、線粒體及細(xì)胞核中蛋白的變化
        3.5.11 裸鼠皮下植瘤及給藥
        3.5.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 紫草素能夠抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的活性并且能夠誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的死亡
        4.1.1 MTT法檢測(cè)紫草素時(shí)間梯度膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生存率
        4.1.2 LDH法檢測(cè)紫草素時(shí)間梯度膠質(zhì)瘤細(xì)胞的死亡率
    4.2 紫草素能夠造成膠質(zhì)瘤細(xì)胞染色質(zhì)裂解
        4.2.1 激光共聚焦顯微鏡結(jié)合Hoechst 33258 染色觀察紫草素作用前后,膠質(zhì)瘤細(xì)胞中細(xì)胞核的形態(tài)學(xué)改變
        4.2.2 DNA瓊脂糖凝膠電泳法檢測(cè)紫草素誘導(dǎo)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞DNA的損傷與斷裂
    4.3 紫草素能夠誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞胞漿、線粒體和胞核中CypA表達(dá)的上調(diào)
    4.4 抑制CypA可以減少紫草素誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的死亡和染色質(zhì)裂解
        4.4.1 LDH檢測(cè)使用siRNA沉默CypA后,紫草素誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞死亡率的改變
        4.4.2 LDH檢測(cè)使用CypA特異性抑制劑CsA提前1小時(shí)預(yù)處理后,紫草素誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞死亡率的改變
        4.4.3 Western Blot檢測(cè)使用siRNA沉默CypA或使用CypA特異型抑制劑CsA提前1小時(shí)預(yù)處理后,紫草素誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞胞漿、線粒體和胞核中CypA蛋白水平的改變
        4.4.4 DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)使用siRNA沉默CypA或使用CypA特異型抑制劑CsA后能夠明顯緩解紫草素誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞染色質(zhì)裂解
    4.5 紫草素通過(guò)CypA誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)生線粒體損傷和AIF核轉(zhuǎn)位
        4.5.1 熒光顯微鏡結(jié)合JC-1 染色觀察紫草素誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中線粒體的損傷
        4.5.2 流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合JC-1 檢測(cè)使用siRNA沉默CypA或使用CypA特異型抑制劑CsA提前1小時(shí)預(yù)處理后,對(duì)紫草素誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞線粒體膜電位改變的影響
        4.5.3 Western Blot檢測(cè)紫草素處理后膠質(zhì)瘤細(xì)胞胞漿、線粒體和胞核中AIF表達(dá)的改變
        4.5.4 激光共聚焦顯微鏡結(jié)合Hoechst 33258 染色觀察紫草素作用后AIF核易位
        4.5.5 Western Blot檢測(cè)siRNA敲低AIF后,紫草素誘導(dǎo)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞胞漿和胞核中AIF蛋白水平的變化
        4.5.6 LDH檢測(cè)siRNA敲低AIF后,紫草素誘導(dǎo)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞死亡率的變化
        4.5.7 DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)使用siRNA沉默AIF后能夠明顯緩解紫草素誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞染色質(zhì)裂解
        4.5.8 Western Blot檢測(cè)使用siRNA沉默CypA或使用CypA特異型抑制劑CsA提前1小時(shí)預(yù)處理后,紫草素誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞胞漿和胞核中AIF蛋白水平的改變
        4.5.9 激光共聚焦顯微鏡結(jié)合Hoechst 33258 和mitotracker染色,觀察紫草素作用前后,膠質(zhì)瘤線粒體和細(xì)胞核中CypA的變化
    4.6 紫草素通過(guò)CypA誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞DNA發(fā)生雙鏈斷裂
        4.6.1 Western Blot檢測(cè)siRNA CypA敲低CypA或CsA提前小時(shí)預(yù)處理后,紫草素誘導(dǎo)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞胞核中 γ-H2AX、p-ATM和p-DNAPKcs蛋白水平的變化
        4.6.2 激光共聚焦顯微鏡結(jié)合Hoechst 33258 染色觀察紫草素作用前后,膠質(zhì)瘤細(xì)胞核中 γ-H2AX的變化
        4.6.3 中性彗星實(shí)驗(yàn)觀察紫草素誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞DNA損傷與DNA雙鏈斷裂
    4.7 CypA通過(guò)引起線粒體超氧化物的過(guò)量產(chǎn)生來(lái)提高細(xì)胞中ROS水平
        4.7.1 熒光顯微鏡結(jié)合Mitosox染色觀察紫草素對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞線粒體內(nèi)超氧化物含量的影響
        4.7.2 熒光顯微鏡結(jié)合DCFH-DA染色觀察紫草素對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中ROS含量的影響
        4.7.3 Mitosox檢測(cè)使用siRNA沉默CypA或使用CypA特異型抑制劑CsA提前1小時(shí)預(yù)處理后,對(duì)紫草素誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞線粒體內(nèi)超氧化物產(chǎn)生的影響
        4.7.4 DCFH-DA檢測(cè)使用siRNA沉默CypA或使用CypA特異型抑制劑CsA提前1小時(shí)預(yù)處理后,對(duì)紫草素誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中ROS產(chǎn)生的影響
        4.7.5 Mitosox染色檢測(cè)CsA和線粒體超氧化物特異性抑制劑MnTBAP對(duì)紫草素誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞線粒體中超氧化物產(chǎn)生的影響
        4.7.6 DCFH-DA染色檢測(cè)CsA和MnTBAP對(duì)紫草素誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中ROS產(chǎn)生的影響
    4.8 RIP1和RIP3能夠上調(diào)膠質(zhì)瘤細(xì)胞胞漿、線粒體和胞核中CypA的蛋白水平
        4.8.1 Western Blot檢測(cè)siRNA敲低RIP1和RIP3時(shí),紫草素誘導(dǎo)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞中CypA蛋白水平的變化
        4.8.2 Western Blot檢測(cè)使用抑制劑Nec-1 或GSK872抑制RIP1或RIP3時(shí),紫草素誘導(dǎo)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞中CypA蛋白水平的變化
    4.9 紫草素在體內(nèi)誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中CypA活化和染色質(zhì)的裂解
第五章 討論
第六章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]成人腦惡性膠質(zhì)瘤術(shù)后兩種同步放化療方案的療效比較[J]. 翟小明,王建平,張軍寧,顧科.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(02)
[2]三維適形放射治療聯(lián)合替莫唑胺治療腦膠質(zhì)瘤的療效及安全性[J]. 王龍?jiān)?涂青松,周衛(wèi)兵,周蓉蓉.  中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2011(11)



本文編號(hào)：3474195