目的:以miRNA-182在乳頭狀甲狀腺癌組織及細(xì)胞中高表達(dá)為切入點(diǎn),擬在組織、細(xì)胞和分子水平探討苦參堿抗乳頭狀甲狀腺癌的潛在分子機(jī)制,并在此基礎(chǔ)上尋找新的抗分化型甲狀腺癌的化療藥物及潛在的診療干預(yù)靶點(diǎn),對于提高甲狀腺癌的防治水平,改善預(yù)后及提高患者生存率具有重要臨床意義。方法:1.RT-qPCR檢測miR-182在乳頭狀甲狀腺癌組織及細(xì)胞中的表達(dá):分別收集乳頭狀甲狀腺癌組織和其對應(yīng)的正常組織標(biāo)本,RT-qPCR在組織水平檢測miRNA-182-3p和miRNA-182-5p的表達(dá);培養(yǎng)人正常甲狀腺上皮細(xì)胞Nthy-ori 3-1和人乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞TPC-1、BCPAP及K1,在細(xì)胞水平檢測miRNA-182-3p和miRNA-182-5p的水平。2.抑制miRNA-182-5p,CCK-8檢測miRNA-182-5p對乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞TPC-1和BCPAP增殖的影響:用陽離子脂質(zhì)體分別將抑制miRNA-182-5p的miRNA-182-5p inhibitor和其對照inhibitor NC轉(zhuǎn)入TPC-1與BCPAP細(xì)胞,24h后傳代培養(yǎng)上述細(xì)胞至96孔板,分別于培養(yǎng)的0、24... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：133 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
    1.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
    1.3 主要的實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.3.2 RNA提取實(shí)驗(yàn)
        1.3.3 miRNA的 cDNA合成
        1.3.4 miRNA RT-qPCR擴(kuò)增
        1.3.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
        1.3.6 RT-qPCR檢測不同濃度的miRNA-182-5p抑制劑轉(zhuǎn)染TPC-1和BCPAP細(xì)胞后miRNA-182-5p的表達(dá)
        1.3.7 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        1.3.8 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        1.3.9 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
        1.3.10 RT-qPCR檢測不同濃度苦參堿對miRNA-182-5p表達(dá)的影響
        1.3.11 CCK-8 檢測苦參堿對TPC-1和BCPAP細(xì)胞增殖的影響
        1.3.12 Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測苦參堿對TPC-1和BCPAP細(xì)胞遷移的影響
        1.3.13 流式細(xì)胞技術(shù)檢測苦參堿對TPC-1和BCPAP細(xì)胞凋亡的影響
        1.3.14 RT-qPCR檢測不同濃度的mi RNA-182-5p模擬物轉(zhuǎn)染TPC-1和BCPAP細(xì)胞后miRNA-182-5p的表達(dá)
        1.3.15 實(shí)驗(yàn)分組及藥物干預(yù)
        1.3.16 過表達(dá)miRNA-182-5p,CCK-8 檢測苦參堿對TPC-1和BCPAP細(xì)胞增殖的影響
        1.3.17 過表達(dá)miRNA-182-5p,Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測苦參堿對TPC-1 和BCPAP細(xì)胞遷移的影響
        1.3.18 過表達(dá)miRNA-182-5p,流式細(xì)胞儀檢測苦參堿對TPC-1和BCPAP細(xì)胞凋亡的影響
        1.3.19 蛋白質(zhì)的免疫印跡實(shí)驗(yàn)
        1.3.20 慢病毒的感染實(shí)驗(yàn)
        1.3.21 裸鼠異位移植瘤實(shí)驗(yàn)
        1.3.22 活體成像檢測乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)
        1.3.23 免疫組織化學(xué)染色的原理及步驟
        1.3.24 HE染色的實(shí)驗(yàn)步驟
        1.3.25 裸鼠肝功、腎功和心肌酶的測定步驟
        1.3.26 數(shù)據(jù)的處理與統(tǒng)計(jì)分析
第二部分 細(xì)胞水平探討苦參堿抑制乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的分子機(jī)制
    2.1 miR-182對PTC細(xì)胞生物學(xué)功能的影響
        2.1.1 引言
        2.1.2 miR-182在乳頭狀甲狀腺癌組織及細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)
        2.1.3 miRNA-182-5p inhibitor能有效抑制miRNA-182-5p的表達(dá)
        2.1.4 下調(diào)的miRNA-182-5p抑制TPC-1和BCPAP細(xì)胞的增殖
        2.1.5 下調(diào)的miRNA-182-5p抑制TPC-1和BCPAP細(xì)胞的遷移
        2.1.6 下調(diào)的miRNA-182-5p誘導(dǎo)TPC-1和BCPAP細(xì)胞的凋亡
        2.1.7 討論
    2.2 苦參堿對miRNA-182-5p及 TPC-1和BCPAP細(xì)胞惡性生物學(xué)功能的影響
        2.2.1 引言
        2.2.2 苦參堿抑制TPC-1和BCPAP細(xì)胞中miRNA-182-5p的表達(dá)
        2.2.3 苦參堿抑制TPC-1和BCPAP細(xì)胞的增殖
        2.2.4 苦參堿抑制TPC-1和BCPAP細(xì)胞的遷移
        2.2.5 苦參堿誘導(dǎo)TPC-1和BCPAP細(xì)胞的凋亡
        2.2.6 討論
    2.3 過表達(dá)miR-182-5p削弱苦參堿抑制乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞惡性生物學(xué)功能的研究
        2.3.1 引言
        2.3.2 篩選最佳的過表達(dá)miR-182-5p的模擬物濃度
        2.3.3 過表達(dá)miR-182-5p削弱了苦參堿抑制乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞的增殖
        2.3.4 過表達(dá)miR-182-5p減弱了苦參堿抑制乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞的遷移
        2.3.5 過表達(dá)miR-182-5p抑制了苦參堿誘導(dǎo)乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞的凋亡
        2.3.6 討論
    2.4 苦參堿抑制乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移和誘導(dǎo)其凋亡的分子機(jī)制
        2.4.1 引言
        2.4.2 苦參堿抑制p-ERK/Bcl-2 和促進(jìn)Bax和 Caspase3 信號分子的表達(dá)
        2.4.3 過表達(dá)miR-182-5p減弱了苦參堿對p-ERK/Bcl-2/Bax/Caspase3 信號分子的調(diào)節(jié)作用
        2.4.4 苦參堿抑制TPC-1和BCPAP細(xì)胞中N-cadherin、Vinmentin和促進(jìn)E-cadherin的表達(dá)
        2.4.5 過表達(dá)miR-182-5p,部分削弱了苦參堿對N-cadherin、E-cadherin和Vinmentin的調(diào)節(jié)作用
        2.4.6 討論
第三部分 體內(nèi)研究苦參堿干預(yù)乳頭狀甲狀腺癌的效應(yīng)及機(jī)制
    3.1 引言
    3.2 檢測攜帶過表達(dá)miRNA-182 慢病毒感染的TPC-1 細(xì)胞中miRNA-182-5p的表達(dá)水平
    3.3 苦參堿部分通過下調(diào)miR-182-5p抑制裸鼠移植瘤的研究
    3.4 小動(dòng)物活體成像觀察苦參堿抑制移植瘤瘤體大小及轉(zhuǎn)移的研究
    3.5 苦參堿部分通過下調(diào)miRNA-182-5p調(diào)節(jié)瘤體組織Bcl-2和Caspase3 的表達(dá)抑制了瘤體的生長
    3.6 苦參堿部分通過下調(diào)miRNA-182-5p抑制腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移
    3.7 苦參堿對裸鼠的肝、腎和心臟組織沒有毒副作用
    3.8 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
研究展望
在學(xué)期間的研究成果
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3465312