目的:以miRNA-182在乳頭狀甲狀腺癌組織及細胞中高表達為切入點,擬在組織、細胞和分子水平探討苦參堿抗乳頭狀甲狀腺癌的潛在分子機制,并在此基礎(chǔ)上尋找新的抗分化型甲狀腺癌的化療藥物及潛在的診療干預(yù)靶點,對于提高甲狀腺癌的防治水平,改善預(yù)后及提高患者生存率具有重要臨床意義。方法:1.RT-qPCR檢測miR-182在乳頭狀甲狀腺癌組織及細胞中的表達:分別收集乳頭狀甲狀腺癌組織和其對應(yīng)的正常組織標本,RT-qPCR在組織水平檢測miRNA-182-3p和miRNA-182-5p的表達;培養(yǎng)人正常甲狀腺上皮細胞Nthy-ori 3-1和人乳頭狀甲狀腺癌細胞TPC-1、BCPAP及K1,在細胞水平檢測miRNA-182-3p和miRNA-182-5p的水平。2.抑制miRNA-182-5p,CCK-8檢測miRNA-182-5p對乳頭狀甲狀腺癌細胞TPC-1和BCPAP增殖的影響:用陽離子脂質(zhì)體分別將抑制miRNA-182-5p的miRNA-182-5p inhibitor和其對照inhibitor NC轉(zhuǎn)入TPC-1與BCPAP細胞,24h后傳代培養(yǎng)上述細胞至96孔板,分別于培養(yǎng)的0、24... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：133 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 實驗材料和方法
    1.1 實驗儀器
    1.2 實驗材料與試劑
    1.3 主要的實驗方法
        1.3.1 細胞培養(yǎng)
        1.3.2 RNA提取實驗
        1.3.3 miRNA的 cDNA合成
        1.3.4 miRNA RT-qPCR擴增
        1.3.5 細胞轉(zhuǎn)染實驗
        1.3.6 RT-qPCR檢測不同濃度的miRNA-182-5p抑制劑轉(zhuǎn)染TPC-1和BCPAP細胞后miRNA-182-5p的表達
        1.3.7 細胞增殖實驗
        1.3.8 細胞遷移實驗
        1.3.9 細胞凋亡實驗
        1.3.10 RT-qPCR檢測不同濃度苦參堿對miRNA-182-5p表達的影響
        1.3.11 CCK-8 檢測苦參堿對TPC-1和BCPAP細胞增殖的影響
        1.3.12 Transwell遷移實驗檢測苦參堿對TPC-1和BCPAP細胞遷移的影響
        1.3.13 流式細胞技術(shù)檢測苦參堿對TPC-1和BCPAP細胞凋亡的影響
        1.3.14 RT-qPCR檢測不同濃度的mi RNA-182-5p模擬物轉(zhuǎn)染TPC-1和BCPAP細胞后miRNA-182-5p的表達
        1.3.15 實驗分組及藥物干預(yù)
        1.3.16 過表達miRNA-182-5p,CCK-8 檢測苦參堿對TPC-1和BCPAP細胞增殖的影響
        1.3.17 過表達miRNA-182-5p,Transwell遷移實驗檢測苦參堿對TPC-1 和BCPAP細胞遷移的影響
        1.3.18 過表達miRNA-182-5p,流式細胞儀檢測苦參堿對TPC-1和BCPAP細胞凋亡的影響
        1.3.19 蛋白質(zhì)的免疫印跡實驗
        1.3.20 慢病毒的感染實驗
        1.3.21 裸鼠異位移植瘤實驗
        1.3.22 活體成像檢測乳頭狀甲狀腺癌細胞體內(nèi)成瘤實驗
        1.3.23 免疫組織化學(xué)染色的原理及步驟
        1.3.24 HE染色的實驗步驟
        1.3.25 裸鼠肝功、腎功和心肌酶的測定步驟
        1.3.26 數(shù)據(jù)的處理與統(tǒng)計分析
第二部分 細胞水平探討苦參堿抑制乳頭狀甲狀腺癌細胞惡性生物學(xué)行為的分子機制
    2.1 miR-182對PTC細胞生物學(xué)功能的影響
        2.1.1 引言
        2.1.2 miR-182在乳頭狀甲狀腺癌組織及細胞中表達上調(diào)
        2.1.3 miRNA-182-5p inhibitor能有效抑制miRNA-182-5p的表達
        2.1.4 下調(diào)的miRNA-182-5p抑制TPC-1和BCPAP細胞的增殖
        2.1.5 下調(diào)的miRNA-182-5p抑制TPC-1和BCPAP細胞的遷移
        2.1.6 下調(diào)的miRNA-182-5p誘導(dǎo)TPC-1和BCPAP細胞的凋亡
        2.1.7 討論
    2.2 苦參堿對miRNA-182-5p及 TPC-1和BCPAP細胞惡性生物學(xué)功能的影響
        2.2.1 引言
        2.2.2 苦參堿抑制TPC-1和BCPAP細胞中miRNA-182-5p的表達
        2.2.3 苦參堿抑制TPC-1和BCPAP細胞的增殖
        2.2.4 苦參堿抑制TPC-1和BCPAP細胞的遷移
        2.2.5 苦參堿誘導(dǎo)TPC-1和BCPAP細胞的凋亡
        2.2.6 討論
    2.3 過表達miR-182-5p削弱苦參堿抑制乳頭狀甲狀腺癌細胞惡性生物學(xué)功能的研究
        2.3.1 引言
        2.3.2 篩選最佳的過表達miR-182-5p的模擬物濃度
        2.3.3 過表達miR-182-5p削弱了苦參堿抑制乳頭狀甲狀腺癌細胞的增殖
        2.3.4 過表達miR-182-5p減弱了苦參堿抑制乳頭狀甲狀腺癌細胞的遷移
        2.3.5 過表達miR-182-5p抑制了苦參堿誘導(dǎo)乳頭狀甲狀腺癌細胞的凋亡
        2.3.6 討論
    2.4 苦參堿抑制乳頭狀甲狀腺癌細胞增殖、遷移和誘導(dǎo)其凋亡的分子機制
        2.4.1 引言
        2.4.2 苦參堿抑制p-ERK/Bcl-2 和促進Bax和 Caspase3 信號分子的表達
        2.4.3 過表達miR-182-5p減弱了苦參堿對p-ERK/Bcl-2/Bax/Caspase3 信號分子的調(diào)節(jié)作用
        2.4.4 苦參堿抑制TPC-1和BCPAP細胞中N-cadherin、Vinmentin和促進E-cadherin的表達
        2.4.5 過表達miR-182-5p,部分削弱了苦參堿對N-cadherin、E-cadherin和Vinmentin的調(diào)節(jié)作用
        2.4.6 討論
第三部分 體內(nèi)研究苦參堿干預(yù)乳頭狀甲狀腺癌的效應(yīng)及機制
    3.1 引言
    3.2 檢測攜帶過表達miRNA-182 慢病毒感染的TPC-1 細胞中miRNA-182-5p的表達水平
    3.3 苦參堿部分通過下調(diào)miR-182-5p抑制裸鼠移植瘤的研究
    3.4 小動物活體成像觀察苦參堿抑制移植瘤瘤體大小及轉(zhuǎn)移的研究
    3.5 苦參堿部分通過下調(diào)miRNA-182-5p調(diào)節(jié)瘤體組織Bcl-2和Caspase3 的表達抑制了瘤體的生長
    3.6 苦參堿部分通過下調(diào)miRNA-182-5p抑制腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移
    3.7 苦參堿對裸鼠的肝、腎和心臟組織沒有毒副作用
    3.8 討論
全文結(jié)論
參考文獻
研究展望
在學(xué)期間的研究成果
附錄
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Matrine attenuates oxidative stress and cardiomyocyte apoptosis in doxorubicin-induced cardiotoxicity via maintaining AMPKα/UCP2 pathway[J]. Can Hu,Xin Zhang,Wenying Wei,Ning Zhang,Haiming Wu,Zhenguo Ma,Lingli Li,Wei Deng,Qizhu Tang.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2019(04)
[2]中醫(yī)藥治療甲狀腺癌研究進展[J]. 艾望,張瑩雯,沈鑫,夏玉坤.  遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報. 2018(12)
[3]甲狀腺癌中醫(yī)藥診治研究進展[J]. 王芷喬,夏仲元.  山東中醫(yī)雜志. 2017(10)
[4]Autophagy and multidrug resistance in cancer[J]. Ying-Jie Li,Yu-He Lei,Nan Yao,Chen-Ran Wang,Nan Hu,Wen-Cai Ye,Dong-Mei Zhang,Zhe-Sheng Chen.  Chinese Journal of Cancer. 2017(08)
[5]中醫(yī)藥治療甲狀腺癌術(shù)后之臨床體會[J]. 邵燦燦,呂久省,余丹丹,韓青青,胡曉,王萍,劉元煒,潘研,燕樹勛.  中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志. 2017(07)
[6]苦參堿在抗腫瘤治療中的研究進展[J]. 李琦,王玲玲,徐佳,尚曉泓,王成彬.  國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志. 2017(04)
[7]中醫(yī)藥治療甲狀腺癌研究近況[J]. 景璽潤.  湖南中醫(yī)雜志. 2016(10)
[8]甲狀腺癌的中醫(yī)藥治療[J]. 周立娟,趙曉珍,王中奇.  黑龍江中醫(yī)藥. 2014(02)
[9]Effect of Matrine on Human Ether à go-go Related Gene （HERG） Channels Expressed in Chinese Hamster Ovary Cells[J]. 吳紅金,鄒安若,謝芳,杜以梅,曹于,劉宇娜,楊繼媛,李新民.  Chinese Journal of Integrative Medicine. 2010(05)
[10]Antitumor effect of matrine in human hepatoma G2 cells by inducing apoptosis and autophagy[J]. Jun-Qiang Zhang, Yu-Min Li, Tao Liu, Second Hospital of Lanzhou University, Lanzhou 730030, Gansu Province, China; Gansu Provincial Key Laboratory of Digestive System Tumors, Lanzhou 730030, Gansu Province, ChinaWen-Ting He, Xun Li, Wen-Ce Zhou, Department of General Surgery, First Hospital of Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, ChinaYing-Tai Chen, Xiao-Hui Chen, Jian-Feng Yi, Zhi-Jian Ren, First Clinical Medical School of Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2010(34)



本文編號：3465312