研究目的1.采用脊神經(jīng)結(jié)扎（Spinal Nerve Ligation,SNL）模型,模擬神經(jīng)病理性疼痛（Neuropathic Pain,NP）的疾病狀態(tài),考察烏頭湯緩解NP的鎮(zhèn)痛作用特點(diǎn),并分析其作用于NP的病理環(huán)節(jié)。2.通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測烏頭湯緩解NP的分子調(diào)控機(jī)制,并結(jié)合化學(xué)特性評價(jià)、分子對接模擬、表面等離子共振結(jié)果篩選烏頭湯緩解NP的關(guān)鍵藥效物質(zhì)。3.采用兩種NP動(dòng)物模型,借助激動(dòng)劑和拮抗劑從正、反兩個(gè)方向,驗(yàn)證烏頭湯緩解NP關(guān)鍵藥效物質(zhì)的鎮(zhèn)痛作用及其分子調(diào)控機(jī)制。研究方法1.烏頭湯緩解NP的藥效特點(diǎn)及其藥理作用探索1.1動(dòng)物及分組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為雄性ICR小鼠（8周齡）,無特定病原體（SPF）級。組別設(shè)置為:假手術(shù)組（Sham）、SNL組、SNL-烏頭湯低劑量組（3.15g/kg,約為臨床日劑量的0.5倍）、SNL-烏頭湯中劑量組（6.30g/kg,約為臨床日劑量的1倍）、SNL-烏頭湯組（12.60g/kg,約為臨床日劑量的2倍）。從手術(shù)后第一天開始灌胃給藥,連續(xù)給藥21天,Sham組及SNL組用等體積的蒸餾水代替。1.2鎮(zhèn)痛藥效學(xué)指標(biāo)的檢測1.2.1機(jī)械痛閾值在符合行為學(xué)... 

【文章來源】：中國中醫(yī)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１烏頭湯對ＳＮＬ模型小鼠機(jī)械痛閾值和熱痛閾值的影響

ａｌｉｌ??Ｓｈａｍ?ＳＮＬ?１２．６０?６．３０?３．１５?Ｓｈａｍ?ＳＮＬ?１２．６０?６．３０?３．１５??ＷＴＤ?（ｇ／ｋｇ）?ＷＴＤ?（ｇ／ｋｇ）＂＂??Ｃ?Ｄ??ｃｎ４?１００－｝?］?１００－１??Ｑ?＃?Ｏ??＾?８０－?＊?－Ｔ－?Ｏ?８０－?＃??ｉ：ｉｕｌｌｌｌ?ｉｄＤｌｌｌｌ??Ｓｈａｍ?ＳＮＬ?１２．６０?６．３０?３．１５?Ｓｈａｍ?ＳＮＬ?１２．６０?６．３０?３．１５??ＷＴＤ?（ｇ／ｋｇ）?ＷＴＤ?（ｇ／ｋｇ）??圖２烏頭湯對ＳＮＬ小鼠脊髓背角組織中炎癥因子的影響。不同組別小鼠脊髓背??角組織中ＩＬ－１?０?（Ａ），ＴＮＦ－?ａ?（Ｂ），ＣＣＬ２（Ｃ）以及ＣＸＣＬ１?（Ｄ）的含量。（數(shù)據(jù)為均數(shù)??土標(biāo)準(zhǔn)差，“＃”表示與Ｓｈａｍ組相比／＜０？?０５，?“林”分別表示與ＳＮＬ組??相比?Ｋ０．?０５?和?０．０１。）??３．２烏頭湯可顯著改善ＮＰ小鼠的疼痛癥狀??烏頭湯低、中、高劑量均可有效升高ＳＮＬ小鼠的機(jī)械痛閾值（均Ｋ０．?０５），??單次給藥后該現(xiàn)象至少持續(xù)２個(gè)小時(shí)，其中給藥１小時(shí)后藥效最佳。每天給藥持??續(xù)７天后檢測行為學(xué)，發(fā)現(xiàn)烏頭湯的時(shí)－效關(guān)系與給藥第１天類似，提示動(dòng)物未??對烏頭湯產(chǎn)生藥物耐受問題。烏頭湯高劑量可以顯著升高ＳＮＬ小鼠的機(jī)械痛閾??值，但是Ｓｈａｍ組小鼠給予同樣劑量的烏頭湯后其機(jī)械痛閾值的基線沒有改變，??提示烏頭湯僅在ＮＰ狀態(tài)下發(fā)揮作用。熱板實(shí)驗(yàn)的檢測結(jié)果表明，烏頭湯可劑量??依賴性地升高ＳＮＬ小鼠的熱痛閾值，不存在藥物耐受現(xiàn)象，且對Ｓｈａｍ組小鼠的??熱痛閾值基線無明顯影響。??ＥＬＩＳＡ檢測不同組別小鼠脊髓背角組織中炎癥

索???３．３?ＮＰ發(fā)病相關(guān)的基因主要調(diào)控膠質(zhì)細(xì)胞活化、神經(jīng)－免疫反應(yīng)和神經(jīng)炎癥??轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜檢測到ＳＮＬ組與Ｓｈａｍ組共有５６７個(gè)差異表達(dá)基因，其中３３１??個(gè)為上調(diào)基因，２３６個(gè)為下調(diào)基因。上述基因中有１８個(gè)基因是己知ＮＰ相關(guān)基因，??分別是?ＡＤＣＹ１、ＡＤＲＡ２Ａ、Ｂ４ＧＡＬＴ３、ＢＲＡＦ、ＢＴＧ２、ＣＨＲＮＡ４、ＤＹＮＣ１Ｈ１、ＥＧＦＲ、ＧＬ０１、??ＨＴＲ１Ｄ、ＴＵＲ１、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＰＫ１、ＰＧＲ、ＰＮＰＬＡ６、ＳＣＮ１Ｂ、ＴＥＫ?和?ＷＡＲＳ。此外，如??圖３?（分層聚類分析－Ａ，散點(diǎn)圖－Ｂ）所示，ＳＮＬ組與Ｓｈａｍ組顯著不同。??基于上述差異表達(dá)基因信息以及己知ＮＰ相關(guān)基因信息，我們構(gòu)建了?“ＳＮＩ，??所致ＮＰ失衡網(wǎng)絡(luò)”，該網(wǎng)絡(luò)由７６５個(gè)節(jié)點(diǎn)和４７７４條邊組成，以節(jié)點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)拓?fù)??特征值度的數(shù)值大于所有節(jié)點(diǎn)度的中位數(shù)為標(biāo)準(zhǔn)，篩選出２４８個(gè)ｈｕｂ基因，將其??視為ＮＰ相關(guān)基因。如圖３Ｃ所示，通路富集分析結(jié)果表明，上述ｈｕｂ基因主要參??與膠質(zhì)細(xì)胞活化、神經(jīng)－免疫反應(yīng)和神經(jīng)炎癥相關(guān)的信號通路（Ｋ０．?０５）。其中，??神經(jīng)活性配體受體相互作用，鈣離子信號通路、神經(jīng)營養(yǎng)素信號通路、間隙連接??和長期增強(qiáng)通路是膠質(zhì)細(xì)胞活化相關(guān)的信號通路；Ｆｃ?ｅｐｓｉｌｏｎ－ＲＴ和Ｔ細(xì)胞受體??信號通路可介導(dǎo)神經(jīng)－免疫反應(yīng)；ＭＡＰＫ信號通路、細(xì)胞因子－細(xì)胞因子受體相互??作用、Ｊａｋ－ＳＴＡＴ信號通路、趨化因子信號通路、ＮＯＤ樣受體信號通路及Ｔｏｌｌ樣??受體信號通路與神經(jīng)炎癥密切相關(guān)。??Ａ?Ｃ?Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ?ｓｔａｔｅ?＿?Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ?ｐａｍ?ｓｔａｔｅ??篇?、，奪＃?ｖ？＇一

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號：3460234