第一部分癌相關(guān)成纖維細胞促進卵巢癌腹水多細胞聚集體的形成及轉(zhuǎn)移目的研究癌相關(guān)成纖維細胞（Cancer-associated fibroblasts,CAF）在高級別漿液性卵巢癌（High grade serous ovarian cancer,HGSOC）患者腹水多細胞聚集體（Multicellular aggregates,MCA）形成和轉(zhuǎn)移中的作用。方法1.術(shù)中收取15例高級別漿液性卵巢癌患者的腹水,直接鏡下觀察形態(tài)、細胞免疫熒光和石蠟包埋切片后免疫組化分析腹水MCA的細胞成份及細胞表型。檢測指標包括:上皮性鈣粘附蛋白（E-cadherin,E-cad）、神經(jīng)性鈣粘附蛋白（N-cadherin,N-cad）、波形蛋白（vimentin）、α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、成纖維細胞活化蛋白（Fibroblast activation protein,FAP）、成纖維細胞特異性蛋白1（Fibroblast specific protein 1,FSP-1）、上皮特異性抗原（Moc-31）、核轉(zhuǎn)錄因子8（PAX8）、增殖細胞相關(guān)核抗原Ki-6... 

【文章來源】：華中科技大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

腹水中MCAs的形態(tài)

華中科技大學博士學位論文34在間皮細胞中呈陽性表達。雌激素受體(EstrogenReceptor,ER)主要在卵囊泡膜細胞和某些基質(zhì)細胞中表達，但它在卵巢癌中表達卻很低。該實驗結(jié)果顯示MCAs主要由卵巢腫瘤細胞（Tumorcell，TC）構(gòu)成。圖1-2.MCAs主要由卵巢腫瘤細胞構(gòu)成。IHC染色見上皮腫瘤標記物Moc-31、卵巢癌標記物PAX8及Ki67呈陽性表達；間皮標記物Claudin4、Calretinin及ER呈陰性表達（標尺為20μm）。四、CAF參與了一部分MCAs的構(gòu)成為了進一步明確CAF是否參與腹水MCAs的構(gòu)成，我們通過免疫組化染色檢測CAF標記物：α-SMA、FSP-1及FAP在石蠟包埋的腹水細胞中的表達。結(jié)果顯示，在所研究的患者中，盡管大多數(shù)MCAs陰性表達α-SMA，但均可發(fā)現(xiàn)α-SMA陽性的MCAs（圖1-3A）及FSP-1、FAP陽性MCAs（圖1-4）。但是，MCAsTC/CAF與沒有CAF的MCAsTC在形態(tài)、大小和致密程度上沒有觀察到明顯差異。對患者（#5，#6，#8）的腹水細胞免疫熒光實驗也證實了MCA的表型異質(zhì)性，存在α-SMA陽性和α-SMA陰性的MCAs（圖1-3B）。該結(jié)果顯示，CAF參與了部分MCAs的構(gòu)成。

華中科技大學博士學位論文36呈陽性表達（標尺為50μm）。（B）IF見部分MCAs有α-SMA（紅色）的免疫熒光，DAPI（藍色）標記細胞核。在同一患者中，可以觀察到α-SMA陽性和α-SMA陰性MCAs（標尺為20μm）。圖1-4.部分MCAs存在FSP-1及FAP陽性細胞。IHC染色見CAF標記物FSP-1及FAP在部分MCAs呈陽性表達（標尺為20μm）。五、CAF促進MCA的形成為了闡明CAF在惡性腹水MCA形成中的作用，我們用原代腫瘤細胞和SKOV3細胞單獨或與CAF懸浮共培養(yǎng)5天，進行MCA形成實驗。除SKOV3細胞外，還使用從HGSOC患者（#6）的腹水中通過流式分選獲得的原代腫瘤細胞（圖1-5A）。從HGSOC患者的有轉(zhuǎn)移灶的網(wǎng)膜組織中分離的原代CAF最初呈多極和單極型，融合成典型的紡錘形，細胞之間魚貫相連或平行排列，或呈漩渦樣排列。成纖維細胞免疫組化顯示vimentin呈陽性表達，細胞角蛋白8呈陰性表達，CAF為α-SMA陽性表達（圖1-5B）。Westernblot蛋白印跡試驗證實了前三代CAF中的α-SMA呈陽性表達（圖1-5C）。在懸浮培養(yǎng)5天后，TC-CAF共培養(yǎng)組MCAs的數(shù)量和體積均顯著大于單獨培養(yǎng)組的MCAs（圖1-5D），組間差異有統(tǒng)計學意義（圖1-5E，F(xiàn)）。


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