第一部分癌相關(guān)成纖維細(xì)胞促進(jìn)卵巢癌腹水多細(xì)胞聚集體的形成及轉(zhuǎn)移目的研究癌相關(guān)成纖維細(xì)胞（Cancer-associated fibroblasts,CAF）在高級(jí)別漿液性卵巢癌（High grade serous ovarian cancer,HGSOC）患者腹水多細(xì)胞聚集體（Multicellular aggregates,MCA）形成和轉(zhuǎn)移中的作用。方法1.術(shù)中收取15例高級(jí)別漿液性卵巢癌患者的腹水,直接鏡下觀察形態(tài)、細(xì)胞免疫熒光和石蠟包埋切片后免疫組化分析腹水MCA的細(xì)胞成份及細(xì)胞表型。檢測(cè)指標(biāo)包括:上皮性鈣粘附蛋白（E-cadherin,E-cad）、神經(jīng)性鈣粘附蛋白（N-cadherin,N-cad）、波形蛋白（vimentin）、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、成纖維細(xì)胞活化蛋白（Fibroblast activation protein,FAP）、成纖維細(xì)胞特異性蛋白1（Fibroblast specific protein 1,FSP-1）、上皮特異性抗原（Moc-31）、核轉(zhuǎn)錄因子8（PAX8）、增殖細(xì)胞相關(guān)核抗原Ki-6... 

【文章來(lái)源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：106 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

腹水中MCAs的形態(tài)

華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文34在間皮細(xì)胞中呈陽(yáng)性表達(dá)。雌激素受體(EstrogenReceptor,ER)主要在卵囊泡膜細(xì)胞和某些基質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，但它在卵巢癌中表達(dá)卻很低。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MCAs主要由卵巢腫瘤細(xì)胞（Tumorcell，TC）構(gòu)成。圖1-2.MCAs主要由卵巢腫瘤細(xì)胞構(gòu)成。IHC染色見上皮腫瘤標(biāo)記物Moc-31、卵巢癌標(biāo)記物PAX8及Ki67呈陽(yáng)性表達(dá)；間皮標(biāo)記物Claudin4、Calretinin及ER呈陰性表達(dá)（標(biāo)尺為20μm）。四、CAF參與了一部分MCAs的構(gòu)成為了進(jìn)一步明確CAF是否參與腹水MCAs的構(gòu)成，我們通過(guò)免疫組化染色檢測(cè)CAF標(biāo)記物：α-SMA、FSP-1及FAP在石蠟包埋的腹水細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果顯示，在所研究的患者中，盡管大多數(shù)MCAs陰性表達(dá)α-SMA，但均可發(fā)現(xiàn)α-SMA陽(yáng)性的MCAs（圖1-3A）及FSP-1、FAP陽(yáng)性MCAs（圖1-4）。但是，MCAsTC/CAF與沒(méi)有CAF的MCAsTC在形態(tài)、大小和致密程度上沒(méi)有觀察到明顯差異。對(duì)患者（#5，#6，#8）的腹水細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了MCA的表型異質(zhì)性，存在α-SMA陽(yáng)性和α-SMA陰性的MCAs（圖1-3B）。該結(jié)果顯示，CAF參與了部分MCAs的構(gòu)成。

華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文36呈陽(yáng)性表達(dá)（標(biāo)尺為50μm）。（B）IF見部分MCAs有α-SMA（紅色）的免疫熒光，DAPI（藍(lán)色）標(biāo)記細(xì)胞核。在同一患者中，可以觀察到α-SMA陽(yáng)性和α-SMA陰性MCAs（標(biāo)尺為20μm）。圖1-4.部分MCAs存在FSP-1及FAP陽(yáng)性細(xì)胞。IHC染色見CAF標(biāo)記物FSP-1及FAP在部分MCAs呈陽(yáng)性表達(dá)（標(biāo)尺為20μm）。五、CAF促進(jìn)MCA的形成為了闡明CAF在惡性腹水MCA形成中的作用，我們用原代腫瘤細(xì)胞和SKOV3細(xì)胞單獨(dú)或與CAF懸浮共培養(yǎng)5天，進(jìn)行MCA形成實(shí)驗(yàn)。除SKOV3細(xì)胞外，還使用從HGSOC患者（#6）的腹水中通過(guò)流式分選獲得的原代腫瘤細(xì)胞（圖1-5A）。從HGSOC患者的有轉(zhuǎn)移灶的網(wǎng)膜組織中分離的原代CAF最初呈多極和單極型，融合成典型的紡錘形，細(xì)胞之間魚貫相連或平行排列，或呈漩渦樣排列。成纖維細(xì)胞免疫組化顯示vimentin呈陽(yáng)性表達(dá)，細(xì)胞角蛋白8呈陰性表達(dá)，CAF為α-SMA陽(yáng)性表達(dá)（圖1-5B）。Westernblot蛋白印跡試驗(yàn)證實(shí)了前三代CAF中的α-SMA呈陽(yáng)性表達(dá)（圖1-5C）。在懸浮培養(yǎng)5天后，TC-CAF共培養(yǎng)組MCAs的數(shù)量和體積均顯著大于單獨(dú)培養(yǎng)組的MCAs（圖1-5D），組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖1-5E，F(xiàn)）。


本文編號(hào)：3457594