本文關(guān)鍵詞：KLF4和miR27b在血管疾病中的功能和分子機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一章：KLF4在HRMECs中的功能和分子機(jī)制的研究研究目的血管再生是發(fā)育過程中已有血管生成新血管的生理過程,在胚胎發(fā)育過程中具有重要的作用。人們廣泛地研究了血管再生在很多疾病中的治療效果,通過抑制血管生成或者促新血管生成藥物來控制血管再生。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是一種血管增生因子。通過激活VEGF信號通路,可有效促進(jìn)血管再生。在臨床上,VEGF抗體或者VEGF受體(VEGFR)激酶抑制劑哌加他尼鈉、蘭尼單抗及貝伐單抗等已被批準(zhǔn)應(yīng)用,用來治療癌癥、年齡相關(guān)性黃斑變性及糖尿病性視網(wǎng)膜病變。雖然在治療過程中出現(xiàn)了一定的療效,但一些副作用依然頻發(fā),如：慢性皮膚型紅斑狼瘡及眼內(nèi)中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)淋巴瘤等。因此,還需要對VEGF信號通路在這些疾病中的作用規(guī)律進(jìn)行進(jìn)一步的研究。轉(zhuǎn)錄因子KrUppel樣因子4(KLF4),是能夠?qū)⒊赡晷图?xì)胞重編成誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSCs)的四大因子之一；在重新編碼過程中,KLF4通過抑制上皮向間充質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化(EMT)而發(fā)揮著作用。KLF4作用下的EMT與腫瘤轉(zhuǎn)移存在一定的關(guān)聯(lián),對此人們已在幾種人類癌癥中進(jìn)行廣泛的研究。通過瞄準(zhǔn)VEGF通路,EMT可促進(jìn)血管再生。在維持內(nèi)皮祖細(xì)胞表型的過程中,KLF4是關(guān)鍵的調(diào)節(jié)因子；通過激活A(yù)KT通路,白血病抑制因子和血管內(nèi)皮生長因子能夠上調(diào)KLF4。最近一項研究發(fā)現(xiàn),KLF4通過調(diào)節(jié)miR-15a來抑制細(xì)胞周期蛋白D1,削弱內(nèi)皮細(xì)胞中的管狀形成。然而另外一項調(diào)查結(jié)果則顯示,通過調(diào)節(jié)notch信號通路KLF4能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞中的血管再生。在基因表達(dá)譜上,人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)和人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HRMECs)各自具有不同的特性。轉(zhuǎn)錄因子Kruppel-like factor 4 (KLF4)對人類細(xì)胞的細(xì)胞增殖、遷移和分化起到了調(diào)節(jié)的作用,并且是誘導(dǎo)干細(xì)胞重組的四個因素之一,然而,它在眼部新生血管性疾病中的作用還沒有探明。本實(shí)驗(yàn)的目的是探討其在HRMECs血管生成中的作用和潛在的分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法細(xì)胞培養(yǎng)：HRMECs在Cell Systems (Kirkland, WA)購買,Medium131作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,其中加入了10%的FBS,1%的微血管生長因子添加劑,10 μg/ml慶大霉素,100 U/ml青霉素,100 μg/ml鏈霉素。在37℃5%的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。所有的實(shí)驗(yàn)都在細(xì)胞培養(yǎng)五代之內(nèi)進(jìn)行。慢病毒載體的構(gòu)建：本課題中,KLF4過表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建參照分子克隆的標(biāo)準(zhǔn)方法完成。KLF4shR1和KLF4shR2在GE Dharmacon (Lafayette, CO)購買。shRNA作用KLF4的目標(biāo)序列為5’GCTCCATTACCA AGA GCTCAT (KLF4shR1)和5’GCCAGAATTGGACCCG GTGTA (KLF4shR2),對照pLK01-scrambe(#1864)在Addgene (Cambridge, MA)購買。HEK293FT細(xì)胞包裝慢病毒。純化后的慢病毒轉(zhuǎn)染HRMECs,3 μg/ml嘌呤霉素篩選轉(zhuǎn)染48小時后的細(xì)胞。MTT分析：96孔板每孔接種5000個細(xì)胞,含1%FBS的培養(yǎng)液饑餓培養(yǎng)12小時后VEGF (50 ng/ml)處理。此后,96孔板中,每個孔加入10μl MTT反應(yīng)物,培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)4小時后加入100μl的detergent來終止反應(yīng),測量570 nm的OD值來反映細(xì)胞的增殖情況。細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)：使用購買于BD Science(Franklin Lakes, NJ)公司的細(xì)胞遷移室進(jìn)行細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞遷移室置入24孔板內(nèi)。300 μLM131中包含2×104個細(xì)胞,加入到每個遷移室的上部。終濃度為50 ng/ml的VEGF作為誘導(dǎo)因子添加到每個小室的底部。培養(yǎng)基和未遷移的細(xì)胞被隔離在小室的上層,內(nèi)置遷移室的24孔板培養(yǎng)在5%二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)12小時。在薄膜底部遷移的細(xì)胞用甲醇固定,結(jié)晶紫染色,倒置顯微鏡拍攝圖片。遷移細(xì)胞數(shù)從三個不同的區(qū)域統(tǒng)計,計算遷移率。血管形成分析：基底膜基質(zhì)TM(Biosciences)在4℃過夜解凍,在每個96孔板中加入60μl。聚合反應(yīng)的條件是37℃,30 min。無VEGF處理的細(xì)胞在M131培養(yǎng)基中重懸,調(diào)整細(xì)胞數(shù)量后接種在凝膠的上部,細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)8小時。每孔中選擇3個視野計算管狀結(jié)構(gòu)的分支點(diǎn)和分枝數(shù),分析作圖。熒光素酶報告基因分析：1.5 kb和0.2 kb Vegf啟動子報告載體和帶有KLF4 Tet-on的慢病毒載體共同轉(zhuǎn)染HRMECs, PSV40 Rellina質(zhì)粒作為內(nèi)參質(zhì)粒。1 ug/ml DOX誘導(dǎo)KLF4表達(dá)。firefly熒光素酶和renilla熒光素酶底物在轉(zhuǎn)染后24小時后分別測量,計算firefly熒光素酶和renilla熒光素酶表達(dá)的比例。免疫熒光染色：為檢驗(yàn)HRMECs中VEGF和KLF4的表達(dá),KLF4表達(dá)細(xì)胞和對照組細(xì)胞用4% PFA固定10分鐘,含0.1%Tween20的PBS洗3次,封閉液(5%的正常山羊血清,3%牛血清白蛋白,包含0.1% Triton-X 100的PBS)孵育1小時。VEGF和KLF4的抗體稀釋液孵育過夜,PBST沖洗3次×5分鐘后,室溫下,二抗稀釋液孵育1小時。DAPI進(jìn)行細(xì)胞核復(fù)染色,尼康倒置熒光顯微鏡采集圖像。Western Blot:HRMECs總蛋白的提取,取等量的蛋白(30 μg/lane)進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳,然后將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上,封閉膜,一抗二抗孵育膜,在sigma公司(St. Louis, MO)購買GAPDH的一抗,在Cell Signaling購買P-ERK1/2, P-AKT, p-VEGFR2的一抗。結(jié)果慢病毒載體對Klf4基因進(jìn)行沉默和過表達(dá)。我們構(gòu)建了Klf4基因DOX-responsive啟動子啟動表達(dá)的慢病毒載體。為誘導(dǎo)Klf4基因在HRMECs中過表達(dá),在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入了終濃度為1 μg/ml的DOX, western blot檢測KLF4的表達(dá),結(jié)果表明Klf4基因表達(dá)與對照組相比蛋白水平提高了6倍,有顯著性差異(t=-5.543,P=0.005)。使用pLKO1 shRNA慢病毒載體沉默Klf4基因的表達(dá)。Western blot檢測基因敲低的效果,與對照組相比,Klf4基因在HRMECs中表達(dá)分別降低了86%和91%,都具有顯著性意義(F=594.822,P0.001)。為檢驗(yàn)KLF4在HRMECs增殖方面的作用,在無或者有50 ng/ml的VEGF處理下,對Klf4基因過表達(dá)和敲低的細(xì)胞進(jìn)行MTT分析。Klf4過表達(dá)的細(xì)胞在24小時、48小時、72小時和96小時,相比對照組細(xì)胞增殖顯著(t=-6.082,t=-5.206, t=-2.979, t=-2.997, t=-3.498, t=-8.461, t=-2.887, t=-7.334, P=0.004, P=0.006, P=0.041, P=0.040, P=0.025, P=0.001, P=0.045, P=0.002),而KLF4shRNA1和KLF4shRNA2的細(xì)胞與對照組細(xì)胞相比,在48小時、72小時和96小時,細(xì)胞的增殖顯著下降。50 ng/ml VEGF作為誘導(dǎo)因子,對過表達(dá)和shRNA敲低Klf4的HRMECs分別進(jìn)行transwell遷移實(shí)驗(yàn)。與對照組細(xì)胞相比,過表達(dá)Klf4的HRMECs顯著增多了細(xì)胞的遷移數(shù)量(t=-12.211,P0.001)。不論有沒有VEGF誘導(dǎo),不同KLF4shRNA沉默的HRMECs顯著降低了細(xì)胞的遷移能力(F=35.931,F=185.110,P0.001)。為驗(yàn)證KLF4如何影響VEGF誘導(dǎo)的血管生成,我們對Klf4敲低和過表達(dá)兩種細(xì)胞的微管形成能力進(jìn)行分析。結(jié)果表明：過表達(dá)Klf4促進(jìn)微管的形成,沉默Klf4抑制微管的形成。50 ng/ml VEGF處理過表達(dá)和沉默Klf4基因的HRMECs 5或15分鐘后,檢測其下游受體VEGFR2及P-ERK1/2、P-AKT兩個細(xì)胞信號通路蛋白。發(fā)現(xiàn)在HRMECs中過表達(dá)Klf4增強(qiáng)VEGF對AKT和ERK1/2信號通路的激活,與空白對照組相比有顯著性意義,兩種shRNA沉默Klf4使得VEGF誘導(dǎo)的信號通路蛋白表達(dá)降低,與空白對照組相比有顯著性意義。分析發(fā)現(xiàn)Vegf轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游具有KLF4的結(jié)合位點(diǎn)(CACCC)序列,假設(shè)KLF4與]7egf啟動子結(jié)合并激活Vegf的表達(dá)。為驗(yàn)證這個假說,用熒光素酶報告基因載體分析了帶有Vegf啟動子結(jié)構(gòu)1.5 kb和0.2 kb側(cè)翼序列的轉(zhuǎn)基因HRMECs,0.2 kb Vegf啟動子序列中沒有KLF4的結(jié)合位點(diǎn),1.5 kb啟動子序列區(qū)域內(nèi)有三個潛在的結(jié)合位點(diǎn),在帶有1.5 kb啟動子序列的HRMECs中過表達(dá)KLF4導(dǎo)致熒光素酶表達(dá)量顯著上升(t=-12.486,P0.001),但是在帶有0.2 kb Vegf啟動子序列的轉(zhuǎn)基因HRMECs中,與對照組細(xì)胞相比沒有顯著的差異。這一結(jié)果表明,KLF4結(jié)合Vegf的啟動子區(qū)域。為進(jìn)一步確定KLF4對Vegf的調(diào)控,DOX誘導(dǎo)KLF4在不同時間點(diǎn)表達(dá),然后western blot檢驗(yàn)HRMECs中相應(yīng)時間點(diǎn)VEGF的表達(dá),VEGF的表達(dá)在DOX誘導(dǎo)3、6和12h時顯著增加。結(jié)論KLF4結(jié)合Vegf啟動子區(qū)域,上調(diào)Vegf表達(dá)。KLF4增強(qiáng)HRMECs中VEGF介導(dǎo)的信號通路,激活VEGFR2和下游ERK1/2、AKT信號通路。KLF4促進(jìn)HRMECs的增殖、遷移和微管形成。第二章：miR-27b在MVSMCs中的功能和分子機(jī)制的研究研究目的近年來,miRNA是生物學(xué)研究的熱點(diǎn),生物體內(nèi)許多生理、病理過程都與miRNA直接相關(guān)。miRNA在進(jìn)化過程中具有高度保守的特點(diǎn),是一種內(nèi)源性非編碼RNA,在轉(zhuǎn)錄后水平抑制基因的表達(dá),參與生物的代謝,并且在代謝中發(fā)揮重要作用。miRNA在促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)表型變化的過程中,發(fā)揮著重要的功能,但對其發(fā)揮功能的內(nèi)在分子機(jī)制,依然不是十分明確。編碼miR-27b的基因位于第9染色體,在人類和小鼠中,niR-27b基因序列保守,在腫瘤中的研究表明,miR-27b對胃癌細(xì)胞的生長和遷移具有抑制作用,但對乳腺癌和宮頸癌細(xì)胞的增殖有促進(jìn)作用。在正常的生理情況下,miR-27b調(diào)節(jié)肌肉脂肪細(xì)胞的分化,在肝脂肪細(xì)胞的遷移中發(fā)揮重要作用,在血管生成過程中,miR-27b促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移,促進(jìn)血管的新生。本實(shí)驗(yàn)的目的是探討miR-27b在MVSMCs中的功能和發(fā)揮作用的潛在分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法細(xì)胞培養(yǎng)、MTT分析、熒光素酶報告基因分析、transwell遷移實(shí)驗(yàn)、慢病毒包裝、免疫熒光染色、western blot的實(shí)驗(yàn)方法參見第一章。結(jié)果為研究PDGF和miR-27b在MVSMCs中的關(guān)系,在PDGF濃度為20 ng/ml的條件下,選取PDGF處理的不同時間點(diǎn),測定miR-27b的表達(dá)水平。隨著PDGF處理時間的延長,miR-27b的表達(dá)水平升高,處理6小時,miR-27b的升高與對照組相比具有顯著差異(t=-5.706,P=0.005),處理24小時,miR-27b 的表達(dá)量是對照組的4.67倍(t=-7.038,P=0.002)。為進(jìn)一步明確二者之間的關(guān)系,用不同濃度的PDGF處理MVSMCs, miR-27b表達(dá)的升高與PDGF的處理濃度正相關(guān),20 ng/ml的PDGF處理濃度對提高miR-27b的表達(dá)效果最強(qiáng),是對照組的5.1倍(t=-28.086,P=0.001)。體外建立miR-27b過表達(dá)和敲低的慢病毒載體,通過qPCR檢測細(xì)胞中miR-27b的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)與對照組相比,過表達(dá)組的miR-27b表達(dá)升高了55.67%,敲低組的niR-27b表達(dá)降低了93.33%。通過繪制MVSMCs的生長曲線,研究過表達(dá)和敲低miR-27b對細(xì)胞增殖的調(diào)控,PDGF處理的niR-27b過表達(dá)組MVSMCs的增殖能力最強(qiáng),miR-27b敲低的MVSMCs增殖能力最低,同時用激光共聚焦掃描顯微鏡來獲取MVSMCs免疫熒光染色的圖片,比較PCNA的表達(dá),發(fā)現(xiàn)過表達(dá)miR-27b的MVSMCs對照組細(xì)胞敲低miR-27b的MVSMCs,用細(xì)胞劃線和transwell的實(shí)驗(yàn)方法來研究miR-27b對MVSMCs遷移的影響,在niR-27b過表達(dá)組,細(xì)胞遷移能力為PDGF處理的過表達(dá)miR-27b的MVSMCsPDGF處理的對照組細(xì)胞無PDGF處理的miR-27b過表達(dá)的MVSMCs無PDGF處理的對照組細(xì)胞,在miR-27b敲低組,細(xì)胞遷移能力的結(jié)果為PDGF處理的對照組細(xì)胞無PDGF處理組的對照組細(xì)胞PDGF處理的miR-27b敲低的MVSMCs無PDGF處理組的miR-27b敲低的MVSMCs。細(xì)胞免疫熒光的實(shí)驗(yàn)方法研究miR-27b在MVSMCs中對凋亡的影響,發(fā)現(xiàn)過表達(dá)miR-27b對MVSMCs的凋亡具有抑制作用,而敲低miR-27b促進(jìn)了MVSMCs的凋亡。我們繼續(xù)對miR-27b發(fā)揮作用的分子機(jī)制進(jìn)行研究,通過western blot在蛋白水平上檢測,發(fā)現(xiàn)miR-27b調(diào)控SMA的表達(dá)。在大鼠和小鼠VSMCs中,過表達(dá)miR-27b的VSMCs的SMA表達(dá)量顯著低于對照組細(xì)胞,而敲低miR-27b的VSMCs的SMA的表達(dá)量顯著高于對照組細(xì)胞(F=139.001,P=0.001);CNN1和SM22的表達(dá)水平在三種細(xì)胞間并無顯著差異；對SMA進(jìn)行細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn),SMA在敲低miR-27b的MVSMCs中表達(dá)量最高,高于對照組細(xì)胞,而在過表達(dá)miR-27b的MVSMCs中,SMA的表達(dá)量最低,低于對照組細(xì)胞。Luciferase assay的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為,過表達(dá)niR-27b的質(zhì)粒同表達(dá)SMA3'UTR的野生型質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染MVSMCs時,螢光素酶的表達(dá)量降低,在轉(zhuǎn)染了野生型報告基因載體和敲低miR-27b質(zhì)粒的MVSMCs中,螢光素酶的表達(dá)量升高,與對照組相比具有顯著性差異(t=3.525,P=0.024)。對MVSMCs的AKT和ERK1/2信號通路的檢測發(fā)現(xiàn),沒有PDGF處理和有PDGF處理的時候,miR-27b過表達(dá)組的P-AKT和P-ERK1/2表達(dá)水平都顯著高于對照組(t=-19.148, t=-4.535, t=-4.481, t=-10.230, t=-11.348, t=-7.265, P0.001, P=0.011, P=0.011, P=0.001, P0.001, P=0.002);而沒有PDGF處理的時候,miR-27b敲低組的P-AKT和P-ERK1/2表達(dá)水平都顯著低于對照組(t=15.702, t=38.089, P=0.004, P0.001), PDGF處理后,P-AKT和P-ERK1/2的表達(dá)也升高,敲低miR-27b組顯著低于對照組(t=34.496, t=18.077, t=20.074, t=36.867, P=0.001, P0.001, P0.001, P=0.001)。結(jié)論miR-27b在MVSMCs是一個控制細(xì)胞增殖和遷移的因子,被PDGF所調(diào)控,過表達(dá)miR-27b對MVSMCs的增殖和遷移有促進(jìn)的作用,敲低miR-27b對MVSMCs的增殖和遷移有抑制的作用,過表達(dá)miR-27b對MVSMCs的凋亡有抑制的作用,敲低miR-27b對MVSMCs的凋亡有促進(jìn)的作用。對于其作用機(jī)制的研究表明,過表達(dá)miR-27b下調(diào)MVSMCs標(biāo)記性基因sma的表達(dá),敲低miR-27b對其表達(dá)有上調(diào)的作用,但是miR-27b對MVSMCs另外的兩個標(biāo)記性基因sm22和cnn1的表達(dá)沒有影響。對其進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),VSMCs的標(biāo)記基因sma是miR-27b直接的靶基因。對信號通路的研究發(fā)現(xiàn),miR-27b提高了PDGF影響的細(xì)胞信號通路ERK1/2和AKT的激活。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,miR-27b是一個調(diào)控VSMCs表型的開關(guān),對于術(shù)后新生血管狹窄和動脈粥樣硬化疾病, miR-27b是一個潛在的作用位點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：Kr(u|")ppel樣因子4 血管內(nèi)皮生長因子 人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞 miR-27b 血小板衍生生長因子 小鼠血管平滑肌細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R543
【目錄】：

• 摘要3-11
• ABSTRACT11-22
• 第一章 KLF4在HRMECs中的功能和分子機(jī)制的研究22-90
• 第一節(jié) 前言22-33
• 1.1.1 KLF4轉(zhuǎn)錄因子22-26
• 1.1.2 VEGF26-31
• 1.1.3 眼部病理性新生血管與治療策略31-32
• 1.1.4 本研究的目的與意義32-33
• 第二節(jié) 材料與方法33-47
• 1.2.1 材料33-39
• 1.2.2 方法39-46
• 1.2.3 統(tǒng)計學(xué)分析46-47
• 第三節(jié) 結(jié)果47-66
• 1.3.1 使用慢病毒載體建立過表達(dá)和敲低Klf4的HRMECs細(xì)胞系47-49
• 1.3.2 KLF4在轉(zhuǎn)錄水平上激活Vegf的表達(dá)49-53
• 1.3.3 KLF4增強(qiáng)VEGF介導(dǎo)的信號通路53-57
• 1.3.4 KLF4促進(jìn)VEGF誘導(dǎo)的HRMECs增殖57-60
• 1.3.5 KLF4促進(jìn)VEGF誘導(dǎo)的HRMECs遷移60-63
• 1.3.6 KLF4促進(jìn)VEGF誘導(dǎo)HRMECs形成微管63-66
• 第四節(jié) 討論66-73
• 1.4.1 shRNA技術(shù)和慢病毒載體技術(shù)實(shí)現(xiàn)HRMECs中Klf4的體外敲低和過表達(dá)66-67
• 1.4.2 KLF4與視網(wǎng)膜新生血管形成67-68
• 1.4.3 眼部新生血管相關(guān)疾病治療的新策略68-69
• 1.4.4 KLF4通過啟動子結(jié)合參與Vegf的調(diào)控69-71
• 1.4.6 KLF4作用于VEGF的下游信號通路71-73
• 參考文獻(xiàn)73-90
• 第二章 miR-27b在MVSMCs中的功能和分子機(jī)制的研究90-140
• 第一節(jié) 前言90-97
• 2.1.1 miRNA的產(chǎn)生與調(diào)控90-91
• 2.1.2 參與血管代謝的miRNA91-94
• 2.1.3 miR-27的研究進(jìn)展94-95
• 2.1.4 PDGF在血管生成中的作用95-96
• 2.1.5 miR-27b在血管生成中的作用與本實(shí)驗(yàn)的目的意義96-97
• 第二節(jié) 材料與方法97-102
• 2.2.1 材料97
• 2.2.2 方法97-101
• 2.2.3統(tǒng)計學(xué)分析101-102
• 第三節(jié) 結(jié)果102-125
• 2.3.1 PDGF調(diào)控miR-27b在MVSMCs中的表達(dá)102-104
• 2.3.2 過表達(dá)miR-27b和敲低miR-27b的MVSMCs細(xì)胞系的建立104-105
• 2.3.3 過表達(dá)和敲低miR-27b對MVSMCs增殖的影響105-109
• 2.3.4 過表達(dá)和敲低miR-27b對MVSMCs遷移的影響109-113
• 2.3.5 過表達(dá)和敲低miR-27b對MVSMCs凋亡的影響113-116
• 2.3.6 miR-27b調(diào)控MVSMCs中sma基因的表達(dá)116-122
• 2.3.7 過表達(dá)和敲低miR-27b對MVSMCs的AKT和ERK1/2信號通路的影響122-125
• 第四節(jié) 討論125-130
• 2.4.1 PDGF在代謝中的作用及對miR-27b的調(diào)控125-126
• 2.4.2 miR-27b的靶基因及影響的信號通路126-128
• 2.4.3 miR-27b影響MVSMCs的增殖、遷移和凋亡128-130
• 參考文獻(xiàn)130-140
• 第三章 展望與結(jié)論140-143
• 第一節(jié) 研究展望140-141
• 3.1.1 第一章研究展望140
• 3.1.2 第二章研究展望140-141
• 第二節(jié) 全文結(jié)論141-143
• 3.2.1 第一章結(jié)論141
• 3.2.2 第二章結(jié)論141-143
• 成果143-144
• 致謝144-146
• 統(tǒng)計學(xué)審稿證明146

  本文關(guān)鍵詞：KLF4和miR27b在血管疾病中的功能和分子機(jī)制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：345601