動脈粥樣硬化（atherosclerosis,AS）是以內(nèi)膜粥樣化或纖維斑塊形成、管腔狹窄為病變特征的血管性疾病,其發(fā)病率呈逐年上升趨勢,可導(dǎo)致嚴(yán)重的并發(fā)癥而威脅人類的健康。目前治療動脈粥樣硬化的一線用藥主要是他汀類藥物,但在臨床應(yīng)用中存在著不可忽視的副作用。發(fā)現(xiàn)新的藥物作用靶點并轉(zhuǎn)換干預(yù)策略,從而延緩動脈粥樣硬化的進(jìn)展,是目前抗動脈粥樣硬化機制研究的重點。非編碼RNA（noncoding RNA,ncRNA）在許多重要的生命活動中發(fā)揮功能,隨著近年來長鏈非編碼RNA（long noncoding RNA,lncRNA）在人類疾病中的作用逐漸被揭示,深化lncRNAs的研究對于理解疾病發(fā)生發(fā)展的分子機制具有現(xiàn)實意義,也無疑為開發(fā)疾病診斷標(biāo)志物以及篩選藥物靶標(biāo)帶來了諸多的新方向。淫羊藿苷（icariin,ICA）是傳統(tǒng)中藥淫羊藿（Epimedium）的主要活性成分之一,近年已被證實其具有心血管系統(tǒng)保護(hù)作用,為動脈粥樣硬化的防治提供了新的選擇。但淫羊藿苷抗動脈粥樣硬化相關(guān)機制的研究仍較少,且以往關(guān)于淫羊藿苷作用靶點的研究主要集中在編碼基因領(lǐng)域,對于淫羊藿苷干預(yù)疾病發(fā)生發(fā)展過程中l(wèi)ncRNA... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮寫詞對照表
第一篇 前言
第二篇 文獻(xiàn)綜述長鏈非編碼RNA與動脈粥樣硬化的研究進(jìn)展
    1.1 LncRNAs與血管壁組分
        1.1.1 LncRNA ANRIL
        1.1.2 LncRNA H19
        1.1.3 LincRNA-p21
        1.1.4 LncRNA MALAT1
        1.1.5 LncRNA TUG1
    1.2 LncRNAs與脂代謝
        1.2.1 LncRNA Le Xis與lnc RNA Me Xis
        1.2.2 LncRNA APOA1-AS
        1.2.3 LncLSTR
    1.3 LncRNAs與炎癥
        1.3.1 LincRNA-Cox2
        1.3.2 LincRNA-EPS
        1.3.3 Lnc-DC
    1.4 LncRNAs在AS治療策略中的研究前景與挑戰(zhàn)
第三篇 實驗研究
    第1章 淫羊藿苷對Apo E-/-小鼠動脈粥樣硬化及基因表達(dá)譜的影響
        1.1 實驗材料
            1.1.1 實驗試劑
            1.1.2 實驗儀器
            1.1.3 實驗用溶液配制
        1.2 實驗方法
            1.2.1 實驗動物
            1.2.2 實驗動物分組及給藥
            1.2.3 小鼠取材
            1.2.4 血脂水平的檢測
            1.2.5 主動脈大體油紅O染色
            1.2.6 主動脈HE染色
            1.2.7 組織中總RNA提取
            1.2.8 RNA質(zhì)量檢測
            1.2.9 反轉(zhuǎn)錄合成c DNA
            1.2.10 基因芯片檢測
            1.2.11 Gene Ontology和信號通路富集分析
            1.2.12 全局信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建
            1.2.13 LncRNA對信號通路調(diào)控網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建
            1.2.14 實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)
            1.2.15 免疫組織化學(xué)染色
            1.2.16 統(tǒng)計學(xué)處理
        1.3 實驗結(jié)果
            1.3.1 小鼠一般情況及體重
            1.3.2 各組小鼠血脂水平
            1.3.3 主動脈大體油紅O染色結(jié)果
            1.3.4 主動脈HE染色結(jié)果
            1.3.5 總RNA提取完整性結(jié)果
            1.3.6 差異基因表達(dá)
            1.3.7 GO與Pathway富集分析
            1.3.8 Global Signal Transduction Network
            1.3.9 LncRNA Target Pathway Network
            1.3.10 QPCR
            1.3.11 免疫組織化學(xué)染色
        1.4 本章小結(jié)
    第2章 PKCβⅠ在淫羊藿苷干預(yù)主動脈平滑肌細(xì)胞增殖及遷移中的作用
        2.1 實驗材料
            2.1.1 實驗試劑
            2.1.2 實驗儀器
            2.1.3 實驗用溶液配制
        2.2 實驗方法
            2.2.1 HA-VSMCs的培養(yǎng)
            2.2.2 MTS檢測HA-VSMCs增殖情況
            2.2.3 流式細(xì)胞術(shù)分析HA-VSMCs細(xì)胞周期
            2.2.4 Transwell實驗檢測HA-VSMCs遷移能力
            2.2.5 細(xì)胞中總RNA提取
                2.2.5.1 用品準(zhǔn)備
                2.2.5.2 提取方法
                2.2.5.3 去基因組
            2.2.6 RNA質(zhì)量檢測
            2.2.7 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA
            2.2.8 QPCR
            2.2.9 Western blot
            2.2.10 統(tǒng)計學(xué)處理
        2.3 實驗結(jié)果
            2.3.1 ox-LDL誘導(dǎo)HA-VSMCs增殖、遷移的最適濃度
                2.3.1.1 ox-LDL誘導(dǎo)HA-VSMCs增殖的最適濃度
                2.3.1.2 ox-LDL誘導(dǎo)HA-VSMCs遷移的最適濃度
            2.3.2 ICA對ox-LDL誘導(dǎo)HA-VSMCs增殖、遷移及相關(guān)基因表達(dá)的作用
                2.3.2.1 ICA對ox-LDL誘導(dǎo)HA-VSMCs增殖的抑制作用
                2.3.2.2 ICA對ox-LDL誘導(dǎo)HA-VSMCs細(xì)胞周期的影響
                2.3.2.3 ICA對ox-LDL誘導(dǎo)HA-VSMCs遷移的抑制作用
                2.3.2.4 ICA對ox-LDL誘導(dǎo)HA-VSMCs相關(guān)基因m RNAs及蛋白表達(dá)的影響
            2.3.3 PKCβⅠ在ICA抑制HA-VSMCs增殖、遷移及相關(guān)基因表達(dá)中的作用
                2.3.3.1 PKCβⅠ在ICA抑制HA-VSMCs增殖中的作用
                2.3.3.2 PKCβⅠ在ICA阻滯HA-VSMCs細(xì)胞周期中的作用
                2.3.3.3 PKCβⅠ在ICA抑制HA-VSMCs遷移中的作用
                2.3.3.4 PKCβⅠ在ICA干預(yù)下對Cyclin D1和MMP-9 表達(dá)的影響
        2.4 本章小結(jié)
    第3章 淫羊藿苷通過lnc RNA H19調(diào)控PKCβⅠ抑制主動脈平滑肌細(xì)胞的增殖及遷移
        3.1 實驗材料
            3.1.1 實驗試劑
            3.1.2 實驗儀器
            3.1.3 實驗用溶液配制
        3.2 實驗方法
            3.2.1 載體構(gòu)建
            3.2.2 Si RNA合成
            3.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            3.2.4 MTS、流式細(xì)胞術(shù)及Transwell實驗
            3.2.5 細(xì)胞中總RNA提取、RNA質(zhì)量檢測、反轉(zhuǎn)錄合成c DNA及q PCR
            3.2.6 Western blot
            3.2.7 統(tǒng)計學(xué)處理
        3.3 實驗結(jié)果
            3.3.1 ICA對ox-LDL誘導(dǎo)HA-VSMCs lnc RNA H19表達(dá)的影響
            3.3.2 pLVX-IRES-Neo-H19載體的鑒定及轉(zhuǎn)染效率評價
                3.3.2.1 pLVX-IRES-Neo-H19載體的鑒定
                3.3.2.2 轉(zhuǎn)染效率評價
            3.3.3 LncRNA H19對HA-VSMCs增殖、遷移及相關(guān)基因mRNA、蛋白表達(dá)的影響
                3.3.3.1 LncRNA H19對HA-VSMCs增殖的影響
                3.3.3.2 LncRNA H19對HA-VSMCs細(xì)胞周期的影響
                3.3.3.3 LncRNA H19對HA-VSMCs遷移的影響
                3.3.3.4 LncRNA H19對相關(guān)基因m RNA表達(dá)的影響
                3.3.3.5 LncRNA H19對相關(guān)基因蛋白表達(dá)的影響
            3.3.4 阻斷PKCβⅠ對lnc RNA H19調(diào)控HA-VSMCs增殖、遷移及相關(guān)基因表達(dá)的影響
                3.3.4.1 阻斷PKCβⅠ對lnc RNA H19調(diào)控HA-VSMCs增殖的影響
                3.3.4.2 阻斷PKCβⅠ對lnc RNA H19調(diào)控HA-VSMCs細(xì)胞周期的影響
                3.3.4.3 阻斷PKCβⅠ對lnc RNA H19調(diào)控HA-VSMCs遷移的影響
                3.3.4.4 阻斷PKCβⅠ對lnc RNA H19調(diào)控PKCβⅠ、Cyclin D1和MMP-9 表達(dá)的影響
            3.3.5 抑制lnc RNA H19的表達(dá)對ICA干預(yù)HA-VSMCs增殖、遷移及相關(guān)基因m RNA、蛋白表達(dá)的影響
                3.3.5.1 Si-H19對ICA抑制HA-VSMCs增殖的作用
                3.3.5.2 Si-H19對ICA阻滯HA-VSMCs細(xì)胞周期的作用
                3.3.5.3 Si-H19對ICA抑制HA-VSMCs遷移的作用
                3.3.5.4 Si-H19對ICA干預(yù)下相關(guān)基因m RNAs表達(dá)的影響
                3.3.5.5 Si-H19對ICA干預(yù)下相關(guān)基因蛋白表達(dá)的影響
        3.4 本章小結(jié)
    第4章 討論
        4.1 ICA對ApoE~(-/-)小鼠AS進(jìn)展的阻滯作用
            4.1.1 ICA對小鼠體重、存活率及血脂水平的影響
            4.1.2 ICA能夠有效減少Apo~(E-/-)小鼠主動脈斑塊面積
        4.2 Cyclin D1、MMP-9 在ICA對細(xì)胞增殖、遷移干預(yù)效應(yīng)中的作用
            4.2.1 Cyclin D1在細(xì)胞周期中的調(diào)控作用及ICA對細(xì)胞周期的干預(yù)效應(yīng)
            4.2.2 MMP-9 在VSMCs遷移中的作用及ICA對細(xì)胞遷移的干預(yù)效應(yīng)
        4.3 PKCβⅠ作為ICA抗AS作用核心節(jié)點的探討
        4.4 LncRNA H19作為ICA抗AS作用靶點的探討
第四篇 結(jié)論
創(chuàng)新點
今后工作展望
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
博士論文
[1]槐耳通過lncRNA-H19抑制乳腺癌進(jìn)展的分子機制研究[D]. 王繼軍.山東大學(xué) 2017
[2]長鏈非編碼RNA-p21（lincRNA-p21）在動脈粥樣硬化中的作用和分子機制研究[D]. 吳庚澤.第三軍醫(yī)大學(xué) 2014



本文編號：3441603