復(fù)發(fā)性流產(chǎn)是由于多種生物因素或者非生物因素導(dǎo)致的病理性妊娠,對孕婦的生理及心理都會產(chǎn)生不同程度的影響,但是目前復(fù)發(fā)性流產(chǎn)發(fā)生的原因還很不清楚。長鏈非編碼RNA-尿路上皮癌胚抗原1（UCA1）最初被發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜癌、膀胱癌、肝癌和乳腺癌等多種癌癥中上調(diào)表達(dá),其高表達(dá)對癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和耐藥都具有重要作用。研究表明,與妊娠期子宮內(nèi)膜重塑最為相關(guān)的滋養(yǎng)層細(xì)胞有著類似癌癥的生物學(xué)行為且與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生密切相關(guān),而不明原因的復(fù)發(fā)性流產(chǎn)可能也影響了子宮內(nèi)膜相關(guān)良惡性疾病的演變。但UCA1在妊娠早期滋養(yǎng)細(xì)胞中的作用極其與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的關(guān)系仍不清楚。在本項(xiàng)目中,我們結(jié)合UCA1過表達(dá)/敲減、絨毛外植體培養(yǎng)分析等手段,解析UCA1在母-胎界面的滋養(yǎng)層侵襲中的功能;應(yīng)用明膠酶譜法、蛋白質(zhì)印跡和染色質(zhì)免疫共沉淀等方法揭示UCA1在滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲功能維持中的分子機(jī)制。我們的研究結(jié)果顯示:使用UCA1 siRNA處理的人滋養(yǎng)層細(xì)胞可以減少UCA1表達(dá),并明顯抑制滋養(yǎng)層細(xì)胞的增殖和侵襲能力;過表達(dá)野生型UCA1則可以顯著促進(jìn)滋養(yǎng)層細(xì)胞的增殖和侵襲能力;敲低UCA1也可以明顯降低絨毛體外培養(yǎng)模型中滋養(yǎng)層細(xì)胞的... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：博士

【圖文】：

UCA1促進(jìn)滋養(yǎng)層細(xì)胞MMP9表達(dá)過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染滋養(yǎng)層細(xì)胞，并在36h后結(jié)合實(shí)時定量PCR金屬蛋白酶家族的基因表達(dá)水平；B-D）利用UCA1siRNA轉(zhuǎn)染滋養(yǎng)層細(xì)胞gure3.UCA1promotesMMP9expressionintrophoblasts檢測方法分析

圖6.敲低絨毛外植體中Figure6.KnockdownUCA1inhibitstrophoblastgrowthA）從妊娠期手術(shù)流產(chǎn)（妊娠期基質(zhì)包被的培養(yǎng)皿上培養(yǎng)，使用對照組織，在24h和72h使用熒光顯微鏡拍攝圖片胞的侵襲能力；C）免疫熒光檢測結(jié)果顯示信號代表MMP9，紅色熒光信號代表已有研究提示滋養(yǎng)細(xì)胞究的結(jié)果顯示人早孕期母滋養(yǎng)細(xì)胞表達(dá)UCA1促進(jìn)自身侵襲的同時，是否又通過調(diào)節(jié)絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞表達(dá)MMP9來控制自身侵襲呢流產(chǎn)的絨毛組織，發(fā)現(xiàn)絨毛組織經(jīng)降低（圖6）。然后我們將完全培養(yǎng)基更換成上清進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)檢測上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文-31-絨毛外植體中UCA1表達(dá)可抑制滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲能力gure6.KnockdownUCA1inhibitstrophoblastgrowthinextravillousexplantcultures妊娠期6-10周）的正常人絨毛組織中分離絨毛組織培養(yǎng)使用對照siRNA和特異敲低UCA1基因表達(dá)的使用熒光顯微鏡拍攝圖片；B）使用Image-Proplus6.0UCA1敲低組MMP9表達(dá)顯著降低CK7，使用DAPI復(fù)染細(xì)胞核。（放大倍數(shù)滋養(yǎng)細(xì)胞能以自分泌的方式分泌MMP9而促進(jìn)自身侵襲人早孕期母-胎界面滋養(yǎng)層細(xì)胞表達(dá)UCA1控制滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲，那么自身侵襲呢?為了回答這一問題，我們用UCA1siRNA流產(chǎn)的絨毛組織，發(fā)現(xiàn)絨毛組織經(jīng)UCA1siRNA沉默后，滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力顯著將完全培養(yǎng)基更換成1%低血清繼續(xù)培養(yǎng)16h實(shí)驗(yàn)檢測。結(jié)果顯示：敲低UCA1絨毛組織分泌的抑制滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲能力inextravillousexplantculturesinvivo絨毛組織中分離絨毛組織培養(yǎng)并在膠原siRNA轉(zhuǎn)染絨毛Pro軟件來評估細(xì)達(dá)顯著降低。綠色熒光放大倍數(shù)：x100）促進(jìn)自身侵襲，本研處理人工并收取培養(yǎng)基MMP9顯著降

低，而MMP2分泌水平并未發(fā)生的改變可以上調(diào)MMP9表達(dá)從而調(diào)控滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲能力（圖圖7.在絨毛外植體中敲低Figure7.KnockdownUCA1inhibitsMMP9expressioninextravillousexplantculturesA-B)從妊娠期手術(shù)流產(chǎn)（妊娠期基質(zhì)包被的培養(yǎng)皿上，使用對照收集培養(yǎng)48h后的絨毛培養(yǎng)基為闡明在體內(nèi)絨毛組織中UCA1siRNA處理人工流產(chǎn)的絨毛組織培養(yǎng)基上清進(jìn)行明膠酶譜實(shí)驗(yàn)檢測MMP9酶活顯著降低，而滋養(yǎng)層細(xì)胞中UCA1可以上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文-32-分泌水平并未發(fā)生的改變，說明在體內(nèi)絨毛組織滋養(yǎng)層細(xì)胞中7）。UCA1可抑制MMP9表達(dá)妊娠期6-10周）的正常人絨毛組織中分離絨毛組織使用對照siRNA和特異敲低UCA1基因表達(dá)的siRNA毛培養(yǎng)基，用于酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測MMP9和MMP2UCA1是否調(diào)控MMP9蛋白酶活性，我們處理人工流產(chǎn)的絨毛組織，并在48h后更換成無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)基上清進(jìn)行明膠酶譜實(shí)驗(yàn)檢測。結(jié)果表明：敲低UCA1絨毛組織分泌的，而MMP2酶活水平并未明顯改變，提示在體內(nèi)絨毛組織可以維持MMP9酶活而調(diào)控滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲能力（圖說明在體內(nèi)絨毛組織滋養(yǎng)層細(xì)胞中UCA1invivo的正常人絨毛組織中分離絨毛組織并培養(yǎng)在膠原轉(zhuǎn)染絨毛組織，的表達(dá)。蛋白酶活性，我們使用更換成無血清培養(yǎng)基以收取在體內(nèi)絨毛組織控滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲能力（圖8）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]北京市某三級甲等醫(yī)院復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者焦慮抑郁狀況及影響因素調(diào)查[J]. 宋東紅,王巧紅,陸虹,王海燕.  中華現(xiàn)代護(hù)理雜志. 2014 (08)



本文編號：3431892