癲癇是一種常見的慢性中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病,以腦內(nèi)異常的癲癇神經(jīng)環(huán)路形成為基礎(chǔ),臨床主要表現(xiàn)為反復(fù)性的不自主發(fā)作。目前,臨床主要使用抗癲癇藥（anti-epileptic drugs,AEDs）來控制癲癇發(fā)作;然而,仍有約三分之一的患者因?qū)λ幬锬褪芏l(fā)展為難治性癲癇。其中,以海馬為主要病灶的顳葉癲癇（temporal lobe epilepsy,TLE）是難治性癲癇中最常見的一種,耐藥率高達75%,因此亟需研究其發(fā)病機制及探索新的治療藥物靶點。TLE通常伴有海馬的多種病理性改變,包括異常的成體神經(jīng)再生。目前已有研究表明,致癇因素會導(dǎo)致成體新生的顆粒細胞（adult-born dentate granule cells,abDGCs）產(chǎn)生結(jié)構(gòu)和功能的異常,但是abDGCs究竟是否以及如何參與到TLE的發(fā)作中仍不明確。在本論文中,我們利用小鼠TLE模型,采用光遺傳學(xué)、逆轉(zhuǎn)錄病毒干預(yù)、清醒動物鈣信號記錄、藥理學(xué)、電生理等多種技術(shù),探究癲癇不同階段產(chǎn)生的abDGCs對TLE發(fā)作的作用。首先,我們使用免疫組化標記增殖的abDGCs,發(fā)現(xiàn)在小鼠海馬電點燃造模成功后,abDGCs的數(shù)量呈現(xiàn)一過性增加,具體... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

小鼠電點燃癲癇造模后DG區(qū)細胞增殖水平一過性增加

轉(zhuǎn)錄病毒 pUX-cre）（命名為 pUX-Gcamp6 mice, 圖 2A）。在鈣信號記錄過程中，以△F/F0 反映鈣信號變化，從而反映神經(jīng)元活性變化；同時，記錄癲癇發(fā)作的腦電與鈣信號變化曲線相對應(yīng)（圖 2B）。由于 abDGCs 的形態(tài)和生理特征至少在 4 周左右才能基本成熟，并且會表現(xiàn)出明顯增加的突觸可塑性且在海馬依賴的行為中起到重要作用[17, 61-63]；因此，我們分別對于未成熟的 4 周的 abDGCs 和完全成熟的 8 周的 abDGCs 進行了鈣信號活動的記錄（圖 2C）。實驗結(jié)果表明，4 周和 8周的 abDGCs 內(nèi)部的鈣信號均在癲癇發(fā)作時大量減少，提示 abDGCs 確實參與了癲癇的發(fā)作且在發(fā)作中功能受到抑制（圖 2D-G）。

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文實驗結(jié)果15對癲癇發(fā)作等級、到達GS的潛時無影響，但卻可以明顯延長ADD和GSD（圖3D-G）。相應(yīng)地，針對8周的abDGCs重復(fù)上述實驗流程發(fā)現(xiàn)，光遺傳學(xué)激活也顯著性地延長了癲癇發(fā)作的ADD和GSD（圖3H-K）。分別來自于pre組和light組的典型海馬腦電和相應(yīng)的能譜圖如圖3L所示。同時，頻譜分析顯示藍光激活abDGCs明顯增加theta波段能量（圖3M）。以上結(jié)果表明，abDGCs可能與癲癇狀態(tài)的維持有關(guān)。有趣的是，撤除光照后不同動物的行為學(xué)表現(xiàn)出現(xiàn)了分離：部分小鼠的ADD或GSD與初始3次癲癇發(fā)作的基礎(chǔ)狀態(tài)相當；而另外部分小鼠ADD或GSD與基礎(chǔ)狀態(tài)相比依然是增加的，即光照效果得以維持。圖3光遺傳學(xué)激活海馬電點燃后急性期產(chǎn)生的abDGCs延長了癲癇發(fā)作時長。Figure3OptogeneticactivationofabDGCsgeneratedacutelyafterkindledseizuresextendsseizureduration.(A)Experimentschemeforoptogeneticactivationprotocolinrecurrenthippocampal


本文編號：3413164